不同倍性灯盏花形态学与细胞学研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

梅琳  郑思乡  杨声超  关文灵  张喜燕  李叶芳 《贵州农业科学》2009,37(7)

对四倍体和二倍体灯盏花的形态学和细胞学进行了观察、测量和比较,鉴定了四倍体与二倍体的染色体.结果表明,四倍体灯盏花植株具有巨大性,花梗粗壮,叶色浓绿、叶片巨大而肥厚.花朵、花辩大,但数量较少,气孔和花粉粒比二倍体显著增大.二倍体染色体数为18,四倍体染色体数为36.  相似文献   

布鲁菌OMP28蛋白的原核表达与间接ELISA方法的建立简     

张小娟  贾广乐  廖娟红  梅琳  王慧煜  李桂兰  张映  韩雪清 《动物医学进展》2014,(1):6-11

  相似文献   

牛布鲁菌荧光标记免疫层析试纸条快速检测方法的建立     

刘佳佳  吴彤  梅琳  韩雪清  吴绍强  林祥梅  王慧煜 《动物医学进展》2018,(10)

为建立一种快速诊断牛布鲁菌病的方法,以原核表达、纯化的外膜蛋白OMP22作为抗原,以带荧光标记的IgG抗体作为标记物制备免疫层析试纸条,建立一种布鲁菌病快速检测方法,并对该方法的敏感性和特异性进行验证。结果显示,制备的试纸条最低可检出1∶100稀释的牛布鲁菌标准阳性血清,且与牛结核、牛蓝舌病、牛病毒性腹泻、牛口蹄疫、牛巴氏杆菌病、牛白血病的血清无交叉反应;试纸条检测结果与商品化ELISA检测试剂盒(IDEXX)的符合率为93.5%。以上结果表明,建立的荧光标记免疫层析试纸条方法能快速检出牛血清中的布鲁菌抗体,具有良好的敏感性和特异性,是一种适合现场初筛的检测方法。  相似文献   

A型塞内卡病毒VP2蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备   总被引：1，自引：1，他引：0  

张永宁  张舟  诸明欣  梅琳  王彩霞  吴绍强  林祥梅 《中国畜牧兽医》2019,46(1):256-263

本研究旨在表达A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)的衣壳蛋白VP2,并制备其多克隆抗体。以SVA GD01/2017分离株RNA为模板,RT-PCR扩增VP2基因序列,并克隆至原核表达载体pET-30a(+)中构建重组质粒pET-30a-SVA-VP2。经测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达。在非变性条件下,利用Ni-NTA琼脂糖树脂从菌体裂解液上清中纯化重组SVA VP2蛋白,并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用Protein A Sepharose CL-4B树脂从兔血清中亲和层析纯化多克隆抗体,并对其进行间接免疫荧光分析。结果显示,重组SVA VP2蛋白以可溶性和包涵体两种形式在大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞内进行表达,分子质量约为47ku;制备的兔抗VP2蛋白多克隆抗体效价高达1∶64 000,该多克隆抗体仅识别SVA,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、脑心肌炎病毒、猪瘟病毒和猪伪狂犬病病毒等常见猪病原无交叉反应,表明制备的多克隆抗体具有良好的特异性。重组SVA VP2蛋白及其多克隆抗体的成功制备为猪塞内卡病毒病血清学检测方法的建立提供了良好的生物材料。  相似文献   

荧光PCR法检测鸡肉中沙门氏菌的研究     

贾广乐  林祥梅  韩雪清  吴绍强  刘建  梅琳 《中国畜牧兽医》2007,34(2):96-97

作者采用合成的基因探针和引物，对2株阳性标准菌株、2株野生菌株和1个无菌去离子水进行检测，结果准确可靠，整个试验过程在30 h内完成。可见，该法是一种特异、敏感、简便、快速的沙门氏菌检测方法，对快速通关将发挥积极的作用。  相似文献   

醋酸甲羟孕酮(MPA)人工抗原的合成与单克隆抗体的制备   总被引：1，自引：0，他引：1  

杨泽晓  张彦明  林祥梅  梅琳  刘建  韩雪清 《上海交通大学学报(农业科学版)》2008,26(2):119-123

为研制检测醋酸甲羟孕酮（MPA）的免疫学检测技术进行MPA单克隆抗体的制备与鉴定,研究分别采用碳二亚胺法、混合酸酐法将MPA偶联到牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白（OVA）上制备免疫原（MPA—BSA）与包被原聊PA—OVA）,通过BALB／c小鼠免疫、细胞融合、间接ELISA和阻断ELISA筛选、有限稀释法克隆亚克隆获得分泌MPA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并通过ELISA方法对其抗体效价、特异性、敏感性、亚类及稳定性进行鉴定。结果表明：成功合成2种人工抗原,MPA与BSA、OVA的偶联比分别为8：1、12：1;获得1株稳定分泌MPA单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞株2G4H9,McAb腹水的间接ELISA效价为1：8×10^4,IgG1亚类,K型轻链,腹水抗体IC50为5．0ng·mL^-1,与甲地孕酮、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和己烯雌酚交叉反应率为12．5％、〈0．01％、〈0．01％和〈0．01％。作者认为：MPA单克隆抗体特异性和敏感性良好,杂交瘤细胞株性能稳定,为进一步研究MPA相关免疫学分析技术奠定了基础。  相似文献   

SPR生物传感器快速检测醋酸甲羟孕酮的初步应用研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

黄强力  王晶钰  韩雪清  林祥梅  王慧煜  梅琳 《中国畜牧兽医》2010,37(3):102-104

动物源性食品中残留的醋酸甲羟孕酮(medroxy progesterone acetate,MPA)对人类健康有潜在的危害。利用SPR生物传感器快速检测MPA,对抗原的固定条件、抗体的浓度及芯片再生条件进行了优化,同时对抗体的稳定性及特异性进行了分析。结果显示,该方法检测的最低限约为1 ng/mL。利用模拟标本进行平行测试表明,其与进口ELISA检测试剂盒结果基本一致。SPR生物传感器检测MPA,单个样品的检测时间小于5 min,非常适合现场的快速检测,具有广泛的应用前景。  相似文献   

猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白(MRP)荧光PCR检测方法的建立   总被引：2，自引：0，他引：2  

林祥梅  吴绍强  韩雪清  刘建  贾广乐  梅琳 《中国兽医杂志》2006,42(10):68-70

猪链球菌病是严重危害人兽健康的一种传染病。常规的猪链球菌血清学检测方法不但费时，而且只能鉴定到血清型。荧光PCR技术是一种新型扩增待检基因的方法，采用“闭管”操作，灵敏度比常规PCR高出100倍以上，而且整个过程只需要0．5～2h，还可避免常规PCR操作时EB染色的危害及PCR后处理可能带来的假阳性，是目前为广大科研工作者所青睐的一种病原的快速鉴定方法。本研究选择MRP设计引物进行PCR，反应结束即可根据扩增曲线判定有无目的基因，从而确定待检菌是否为猪链球菌2型致病株。本方法的建立，为疫情发生后，有针对性地采取紧急防控措施、严防疫情传入传出奠定了基础。  相似文献   

基于E184L基因的非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

崔贝贝  李霆  仇松寅  梅琳  韩雪清  吴绍强  林祥梅 《动物医学进展》2020,(1):8-14

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染引起的一种高度接触性传染病。由于ASFV的感染机制极为复杂,基因型多,至今尚无有效疫苗用于防控,防止该病暴发主要依赖于早期快速诊断和控制。为建立一种高效快速、特异的ASFV检测方法,根据ASFV的E184L基因序列,设计了TaqMan荧光定量PCR引物及探针,建立了检测ASFV的TaqMan荧光定量PCR方法。结果表明,该方法设计的引物具有高度特异性,以构建的重组质粒为标准品建立的TaqMan荧光定量PCR方法的标准曲线具有良好的线性关系,线性相关系数为0.992,对ASFV核酸最低检测限为1.51拷贝,且与伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型等不存在交叉反应。建立的基于ASFV E184L基因实时荧光定量PCR检测方法能够快速、准确、特异地对ASFV核酸进行定量分析,丰富了ASFV的检测方法。  相似文献   

三聚氰胺等4种物质的毒性比较研究   总被引：7，自引：0，他引：7  

贾广乐  王建峰  林祥梅  梅琳 《中国畜牧兽医》2008,35(12):162-163

试验旨在通过细胞毒性试验、急性毒性试验对三聚氰胺及其类似物的毒性进行了初步研究。结果表明,三聚氰胺、三聚氰酸、双氰胺、单氰胺的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为10.11、3.17、22.56、0.305 mg/ml,而三聚氰胺、三聚氰酸、双氰胺的半数致死量（LD₅₀）均大于5000 mg/kg,单氰胺的半数致死量（LD₅₀）小于500 mg/kg。表明三聚氰胺、三聚氰酸、双氰胺为微毒或基本无毒,单氰胺为高毒。  相似文献