抗水霉菌药物的筛选·研制及其防治作用     

周志明  尹文林  沈锦玉  潘晓艺  顾志敏  曹铮  朱俊杰 《安徽农业科学》2013,(18):7849-7851,7900

[目的]筛选出具有较强抑制真菌作用的药物。[方法]以水霉菌FD07为供试菌,测定了24种中药及化药对水霉菌生长的抑制作用,并测定了复方抗真菌药物对鱼受精卵孵化率的影响和对鱼的急性毒性,同时测定了复方抗真菌药对真菌病的防治效果。[结果]五倍子和CuSO4的抑菌效果最为理想。1.0 mg/L复方抗真菌药AF001对真菌的抑制率达100%,对鱼卵的96 h LD50为30 mg/L,安全浓度为3 mg/L。1.0 mg/L复方抗真菌药AF001对鱼的96 h LD50大于100 mg/L,安全浓度大于10 mg/L。1.0 mg/L药物对真菌的预防保护率为71.43%,治疗保护率为67.9%。[结论]该药可用于鱼或鱼卵真菌病的防治。  相似文献   

鹅圆环病毒抗体间接ELISA检测方法的建立     

姜轲冉  胡东健  孙红霞  于洪涛  刘晓宁  俞永裕  余权法  陈维虎  余旭平 《中国预防兽医学报》2013,(2):134-137

为建立鹅圆环病毒(GoCV)抗体的检测方法,本研究通过原核表达重组核衣壳(Cap)蛋白,将纯化的该重组蛋白作为ELISA检测的包被抗原,利用交叉反应性,以羊抗鸡IgG(HRP-IgG)作为二抗,经反应条件的优化,建立了检测鹅血清GoCV抗体的间接ELISA方法。确立的ELISA反应最适条件为:抗原包被浓度为2.05μg/mL,待检血清稀释度为1∶50,HRP-IgG稀释度为1∶2000,待测血清和二抗均于37℃反应1.5h,底物于室温显色10 min。经38份阴性血清检测确定阴阳性临界值为0.25。特异性试验结果显示,该方法与大肠杆菌、新城疫、禽流感H5和H9、小鹅瘟、鹅副粘病毒抗原阳性血清均无交叉反应;重复性试验结果显示,其批内和批间变异系数均小于10%。应用该方法检测了从4群GoCV PCR检测阳性种鹅群采集的血清,结果显示其血清阳性率在60.0%～90.9%。本实验建立的间接ELISA方法具有较好的特异性和重复性,为进一步开展GoCV流行病学调查提供了一种便捷可靠的手段。  相似文献   

嗜水气单胞菌黏附素基因克隆、序列分析及表达          下载免费PDF全文

潘晓艺  沈锦玉  郝贵杰  姚嘉赟  徐洋 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》2010,36(3):262

利用PCR方法对江浙一带淡水鱼类暴发病病原致病性嗜水气单胞菌主要血清型O:9和O:97代表菌株TPS-30和BSK-10的黏附素基因(Al)进行扩增,并分析不同血清型和不同来源菌株Al的序列差异.结果表明:嗜水气单胞菌TPS-30株与BSK-10株相比较,Al序列在N端有个突变区,TPS-30株的Al基因突变区较BSK-10株短;通过pET28a(+)载体构建TPS-30株黏附素基因的表达载体pET28a-AHal,转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,通过SDS-PAGE分析,显示与预期大小约41ku相吻合的融合蛋白带,诱导6h后目的蛋白获得了高效表达,表达量占菌体总蛋白的44.0%;通过免疫攻毒试验发现,免疫银鲫后血清效价在第5周达到峰值,重组表达的蛋白对同源菌株TPS-30和异源菌株BSK-10都具有较高的免疫保护率,分别达到94.7%和77.8%.这为基因工程亚单位疫苗的开发奠定了基础.  相似文献   

哈维氏弧菌灭活疫苗在养殖大黄鱼中的应用与评价   总被引：1，自引：0，他引：1  

沈锦玉  许文军  尹文林  曹铮  潘晓艺  施慧  郝贵杰 《大连水产学院学报》2010,25(3):210-213

将分离自大黄鱼Pseudosciaena crocea的病原菌GYC1108-1,在体积分数为0.5%的福尔马林溶液中灭活24 h,制成灭活全菌苗（细菌含量为6×109cfu/mL）;用该灭活菌苗分别免疫小白鼠和大黄鱼,并检测小白鼠和大黄鱼血清中抗体效价及疫苗对鱼体的免疫保护力。结果表明：小白鼠经注射疫苗后28 d,血清中抗体效价最高达1∶4 000,大黄鱼经注射和浸泡免疫后,血清中最高抗体效价分别为1∶1 280和1∶320,免疫保护率分别为75%和65%;抗GYC1108-1的抗体与不同种属细菌间存在着交叉反应,其分类地位越近,交叉反应也越大;用研制的疫苗开展大黄鱼生产性免疫预防试验,受免疫组鱼存活率有较大提高,分别为85%和86%,而未免疫组鱼存活率仅有70%,表明疫苗可有效防治养殖大黄鱼细菌性病害。  相似文献   

一株亚硝酸盐降解菌的分离鉴定          下载免费PDF全文

周冬仁  沈锦玉  潘晓艺  叶雪平  徐洋  尹文林 《农学学报》2011,(4)

为寻找对亚硝酸盐具有高效降解能力、稳定和安全的优良菌株,采用亚硝酸盐氧化细菌(Nitrite-oxidizing bacteria,NOB)富集、分离技术从湖州某水域淤泥中分离得到一株纯培养菌株N3。提取细菌的总DNA,利用细菌16S rDNA特异性引物进行多聚酶链反应(PCR)扩增;扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和Sanger末端终止法测序分析,用NCBI-Blast软件将测序结果在Genbank等数据库中进行同源性检索。结果表明,N3的DNA扩增产物片断大小为1441bp,测序结果经检索证实N3与标准菌株Cellulosimicrobium cellulans(AY665978.1)16S rDNA保守性片段有100%的同源性,可以判定所分离得到的N3菌株为纤维单胞菌属的纤维化纤维单胞菌(Cellulosimicrobium cellulans)。  相似文献   

气单胞菌和嗜水气单胞菌双重PCR检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

潘晓艺  沈锦玉  郝贵杰  姚嘉贇  徐洋  尹文林  孙逢明  吴颖蕾 《华中农业大学学报》2011,30(6):759-763

针对GenBank中登录的气单胞菌属(Aeromonas)的毒力基因甘油磷脂胆固醇酰基转移酶基因(GCA T)和嗜水气单胞菌(Aeromonash ydrophila)的16S rRNA基因的保守区设计2对特异性引物.通过进行双重PCR反应体系优化,PCR产物的测序鉴定和特异性试验,建立了一种能同时检测气单胞菌(Aer...  相似文献   

不同免疫增强剂对青虾免疫功能影响的研究     

盛鹏程  尹文林  林锋  徐洋  姚嘉贇  许婷  郝贵杰  曹铮  吴颖蕾  沈锦玉 《河北渔业》2014,(3):7-10

以添加不同量银耳菌丝体多糖(0.1%、0.12%、0.15%),酵母细胞壁多糖(0.005%、0.01%、0.02%),黄芩苷(0.01%、0.02%、0.04%)的饲料投喂初体质量为0.227g±0.017g的青虾60d,研究其对青虾的生长及免疫因子的影响。各组青虾肝胰脏中SOD活力均被抑制。与对照组相比,0.1%添加量的银耳菌丝体多糖对青虾肝胰脏中的ACP活力的提高最明显;0.02%添加量的酵母细胞壁多糖组对虾肝胰脏中的AKP活力的提高最明显;0.005%添加量的酵母细胞壁多糖组对虾肝胰脏中的POD活力的提高最明显;银耳菌丝体多糖和酵母细胞壁多糖各添加量组对青虾生长有明显提高。实验结果表明,添加适当剂量的银耳菌丝体多糖和酵母细胞壁多糖可以促进青虾的生长及增强青虾的免疫能力。  相似文献   

猪圆环病毒复合PCR检测方法的建立   总被引：7，自引：0，他引：7  

朱军莉余旭平  时晗吴海波  金俊杰何世成 《中国兽医科技》2004,34(2):38-42

根据已发表的PCV—1和PCV-2全基因组序列，设计了3条引物，组成PCV-2的特有引物对和PCV-1、PCV-2的共有引物对，分别扩增长度为472bp和339bp的片段。为验证PCR扩增的特异性，将472bp的扩增产物纯化后，克隆到pMD18-T载体，转化大肠埃希氏菌TG1，对阳性克隆进行酶切及PCR鉴定，并测序。将该序列递交NCB1进行BL-AST同源序列比较，发现它与美国、加拿大及我国台湾的PCV-2毒株核苷酸序列的同源性均在99％以上，与PCV—1毒株的同源性为86％。结果显示，该方法最少可用于3μg病料组织和0．75pg DNA的PCV-2检出．具有很高的灵敏性。应用该PCR方法检测了浙江省和上海市47份“猪高热综合征”病料，PCV-2感染阳性率为36．17％，PCV—1单独感染阳性率为34．04％。  相似文献   

多杀性巴氏杆菌鉴定与特性研究的分子生物学方法     

曾静雯  刘慧芳  沈琴芳  郑新添  余旭平  吴彤  李永明  周碧君  王开功 《中国兽药杂志》2006,40(4):41-44,31

多杀性巴氏杆菌是一种常见病原菌，其血清型众多（16种血清型），在毒力及流行病学等方面的生物学特性差异很大。分子生物学鉴定和特性分析方法能直接揭示其基因型上的差异，具有高灵敏度和可靠性。本文综述了多杀性巴氏杆菌的PCR、菌落杂交和16S rRNA基因测序等鉴定方法以及限制性酶切分析、核糖体分型、脉冲场凝胶电泳、PCR指纹等特性分析方法。  相似文献   

鸽圆环病毒浙江株△Cap基因的克隆与原核表达     

余旭平  刘晓宁  郑新添  邬栋栋  刘江梅  竺春 《中国预防兽医学报》2007,29(9):680-684

根据已发表的鸽圆环病毒(PiCV)序列,在V1ORF保守序列部位设计引物(目的片段长度为629bp),对浙江某鸽养殖场的病料进行PCR扩增检测,获得阳性样品;应用设计的删除核定位信号外壳蛋白基因(△Cap)的引物,扩增获得680bp的△Cap基因,克隆于pMD18-T载体,进行测序;将△Cap基因亚克隆到原核表达载体pET-28a进行融合表达,SDS-PAGE电泳检测发现,△Cap融合蛋白经IPTG诱导后在大肠杆菌中以包涵体形式表达,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的22.1%。  相似文献