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马立克氏病病毒(MDV)GA强毒株的BamH I-L片段DNA全长为2 892 bp,G+C比率为55.91%.用内切酶将其亚克隆为6个片段:BamH I-Pst I、PstI-Pst I、Pst I-Cla I、Cla I-Sma I、Sma I-Sma I和Sma I-BamH I.用地高辛标记L片段DNA或者分别标记其6个亚片段核酸,通过斑点杂交试验都可将MDV血清1型毒株与2型和3型的毒株区分开来,应用PCR方法可获得相同结果.但PCR方法更敏感、更快捷.结果表明,MDV GA强毒株的BamH I-L片段DNA对MDV血清1型毒株是特异的. 相似文献
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猪γ-干扰素双顺反子表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达 总被引:8,自引:1,他引:8
提取经 Con A诱导培养的猪外周血白细胞总 RNA,RT- PCR扩增出猪 IFN- γ基因并克隆到 p GEM- T- easy载体 ,测序结果表明 ,扩增片段为含有信号肽的猪 IFN-γ完整基因。亚克隆猪 IFN-γ成熟蛋白编码基因 ,并对其 5′段前 2个稀有密码子进行大肠杆菌偏嗜性改造。通过引入 SD序列 ,成功构建了猪 IFN- γ原核双顺反子表达载体 p L CS-po IFN2 G,并实现了猪 IFN-γ在大肠杆菌中的高表达 ,约占菌体总蛋白的 5 6 .5 %。表达产物以包涵体形式存在 ,用含 7mol/L 盐酸胍的变性液溶解及含 0 .5 mol/L盐酸胍复性液复性处理 ,复性后的表达产物经凝胶层析纯化后 ,细胞病变抑制法测定结果表明 ,重组猪 IFN-γ具有较高干扰素活性 相似文献
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猪瘟兔化弱毒株E2蛋白A/D抗原区基因的原核表达 总被引:1,自引:2,他引:1
通过RT—PCR扩增了编码猪瘟病毒兔化弱毒囊膜糖蛋白点E2基因;另行设计引物,扩增其中一段所编码的蛋白质抗原性好且适于在大肠杆菌(Eschedchia coli)中表达的基因(E2蛋白AID抗原区),构建了不同的重组原核表达载体(pTH-E2来源于pThioHisB载体;pET—E2来源于pET-32a( )),并对其表达特性进行了研究。将其分别转化到相应的宿主菌中,构建成2株重组工程菌(TOPE2含有pTH—E2;BL21E2含有pET—E2)。结果表明,两种重组菌都获得了高效表达,但BL21E2表达量明显高于TOPE2。另一重要发现是,在E2蛋白上,除了690~812位肽段,所选肽段在大肠杆菌中表达后,也能和抗猪瘟病毒高免血清反应。 相似文献
65.
重组家蝇抗菌肽Des-HF在酵母中的表达及对金黄色葡萄球菌的抗菌活性 总被引:3,自引:0,他引:3
参考家蝇防御素抗菌肽基因序列(AY260152) 设计4条引物,用降落PCR方法获得家蝇防御素抗菌肽成熟肽基因.将基因克隆人酵母表达载体pPICZα-A,构建分泌型重组酵母表达载体pPIC-Des-HF,转化Pichia pastoris受体菌SMD1168,在醇氧化酶(AOX) 启动子调控下,相对分子质量约5 000的重组抗菌肽Des-HF获得表达.抗菌试验结果表明,该表达产物对金黄色葡萄球菌有较好的抑菌活性.以小鼠为试验模型研究重组抗菌肽对金黄色葡萄球菌的体内抗菌活性,试验结果表明,240μg重组Des-HF可分别保护小鼠免受10倍最小致死浓度的金黄色葡萄球菌(ATCC26003) 和Cowan I的攻击. 相似文献
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鸡传染性支气管炎病毒TJ9602、HN9604、BJ9601分离株特性的研究 总被引:3,自引:1,他引:3
从天津、河南、北京的鸡场分别分离到TJ9602、HN9604、BJ9601鸡传染性支气管炎病毒毒株,对其进行了动物回归、生物学特性、理化特性、血清学试验、抗原定位,对分离株的S1基因进行了RT-PCR扩增、核酸序列分析等研究.确定3株分离毒株为致肾病变的IBV,亲嗜器官为肾脏.HN9604和BJ9601与M41和H120均有较强的中和抗原交叉反应性,S1基因同源性分析,HN9604和BJ9601 S1基因与H120毒株的同源性最高,与H120毒株同属于A分支,均属于Ⅰ群.U9602与H120、M41等参考毒株的中和抗原交叉反应均较低,S1基因同源性分析,属于Ⅱ群. 相似文献
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为优化和扩大旋进旋涡流量计的计量范围,通过CFD方法,采用RNG k-ε湍流模型进行数值模拟并结合试验对150 mm口径的旋进旋涡流量计进行了研究。首先对起旋器入射角为57.5°的流量计进行了非定常数值计算,由于气体速度较低,在数值计算时不考虑气体的压缩性,计算结果能够反映压力损失的实际变化,流量计仪表系数的数值模拟结果与试验值基本吻合。通过试验验证了所采用的数值方法能对流量计的性能进行较好的预测。为进一步分析起旋器入射角度对旋进旋涡流量计压力损失和仪表系数的影响,对3种起旋器入射角度55°、57.5°和60°下的旋进旋涡流量计内部流场进行了三维数值模拟,对比分析了不同入射角下旋进旋涡流量计内部流场分布以及压力损失和仪表系数随流量的变化特性。研究结果表明:流体流经起旋器后压力会迅速下降,旋涡中心的压力相对较低,在喉部以前区域压力沿轴向基本成对称分布;发现起旋器入射角越大,流量计压力损失越大;起旋器入射角度对仪表系数有一定的影响,起旋器入射角越大,仪表系数越大。起旋器入射角度为55°时,旋进旋涡流量计性能最好。 相似文献
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传染性支气管炎病毒地方分离毒株S1基因的RT-PCR方法研究 总被引:2,自引:0,他引:2
以传染性支气管炎病毒(IBV)标准毒株M41为材料,根据Genbank公开序列自行全成一对特异引物,用于扩增IBV的完整S1基因。建立了针对IBV基因组RNA特点的RT-PCR方法。对反应体系中的重要反应物Mg^2+、dNTP和引物浓度进行优化,确定其浓度值分别为1.5mmol/L,200μmol/L和40μmol/L。使用此反应体系对国内IBV地方离毒株JS/95/03,SD/97/01等10多 相似文献