凡纳滨对虾酚氧化酶原激活因子基因的克隆及表达分析     

赵永贞  陈秀荔  曾地刚  杨春玲  彭敏  何苹萍  李咏梅  彭金霞  韦嫔媛  陈晓汉 《水产学报》2014,38(8):1068-1078

为研究酚氧化酶原激活因子(prophenoloxidase-activating factor,PPAF)在凡纳滨对虾感染传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)过程中所起的免疫作用,实验采用逆转录聚合酶链式反应和cDNA末端快速扩增技术克隆了凡纳滨对虾PPAF基因的全长cDNA序列,并通过实时荧光定量PCR技术分析了该基因在正常凡纳滨对虾和感染IHHNV凡纳滨对虾不同组织的表达情况。结果显示,克隆获得了1 986 bp凡纳滨对虾PPAF基因cDNA全长序列(GenBank登录号JQ684529),其中含有一个1 629 bp开放阅读框(ORF),两翼分别存在21 bp(5'端)和336 bp(3'端)的非翻译区。该基因的开放阅读框共编码542个氨基酸,氨基酸序列269~517处存在功能结构域——丝氨酸蛋白酶结构域,氨基酸序列494~502区域存在一个ALPHA-2巨球型免疫蛋白功能位点,316~321区域有一个组氨酸酶活性位点;定量PCR分析发现,该基因无论在正常对虾还是感染IHHNV对虾的心脏、肝胰腺、肠、胃和肌肉中的表达量均较低,在血液和鳃腺中的表达量明显高于其他组织,但感染IHHNV对虾不同组织中PPAF基因的表达量均低于正常对虾相应组织中的表达量。定量检测PPAF基因在对虾鳃腺组织中的表达情况显示,对虾感染IHHNV后,PPAF基因的表达量急剧降低,3 h时至最低,之后表达量逐渐上升,48h时达最高值。研究表明,IHHNV可抑制PPAF基因的表达,因而抑制酚氧化酶原免疫系统的有效激活,或是其感染对虾并在对虾组织内增殖的原因之一。  相似文献   

基于卵黄蛋白原基因表达的水丝蚓促熟南美白对虾研究     

彭金霞  陈晓汉  陈秀荔  胡睿宇  蒋伟明  蒋小珍  李咏梅  韦嫔媛 《水生态学杂志》2014,35(2):74-79

针对传统海产亲虾饵料易感染或携带与对虾共患病毒,给育种和苗种繁育工作带来巨大生物安全隐患的问题,以淡水品种水丝蚓作为替代饵料进行南美白对虾亲虾催熟试验,并以卵黄蛋白原基因的表达水平变化验证饵料的催熟效果。设水丝蚓、水丝蚓组合饵料、商业亲虾饲料及传统沙蚕组合饵料等4个饵料组合,分别投喂南美白对虾后备亲虾,测定繁殖性能相关参数,并通过荧光定量PCR技术对各亲虾肝胰腺和卵巢中VTG的表达水平的变化进行了追踪研究。结果显示,水丝蚓组的性腺增重最高,达1 475%,连续产卵率最大,平均为72.08%,与传统沙蚕组合饵料组无显著差异性(P0.05)。南美白对虾肝胰腺和卵巢组织中均存在VTG mRNA,在肝胰腺和卵巢中均呈先上升后下降的表达模式;VTG mRNA的表达量能够一定程度上反映对虾的繁殖性能,有希望发展成为亲虾繁殖性能选育指标;水丝蚓在促进亲虾性腺发育方面效果较传统沙蚕饵料组合好,在改善亲虾产卵效果方面基本与沙蚕组合相当,可作为沙蚕替代饵料用于南美白对虾的亲虾强化培育和催熟。  相似文献   

低温处理凡纳滨对虾仔虾全长cDNA文库及troponin Ⅰ基因三种拷贝的比较分析     

彭金霞  房振峰  韦嫔媛  李咏梅  蒋伟明  陈秀荔  赵永贞  李文红  陈晓汉 《水产科学》2013,32(2)

运用SMART技术成功构建了低温处理凡纳滨对虾仔虾的全长cDNA文库,文库的滴度为1.05×106 pfu/mL,重组率94％,插入片段平均长度为1.0 kb.随机选取116个克隆进行测序鉴定,获得111条有效序列,其unigene比例79.2％,涵盖了蛋白质合成、细胞骨架、核糖体结构、信号传导、代谢、细胞周期、能量产生与转换、转录、抗逆及防御、生物发育等10多种功能类别,其中与发育(10.34％)及抗逆及防御(10.34％)相关基因占2o.68％.对测序获得的肌肉发育相关trioponinⅠ基因的3个不同拷贝进行了序列和进化比较分析.研究为发育和耐寒相关分子调控机制的探索创造了基础条件.  相似文献   

香港牡蛎野生群体家系建立及耐高盐性筛选          下载免费PDF全文

张兴志  官俊良  何苹萍  韦嫔媛  张立  罗帮  彭金霞  李琼珍 《南方农业学报》2019,50(2):385-390

[目的]选育出香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)耐高盐品系,为提高其养殖经济效益和促进产业持续发展提供保障.[方法]以广西茅尾海海区野生香港牡蛎为亲本,采用♂:♀=1:3的交配方式建立30个香港牡蛎野生群体全同胞家系,比较各家系早期的生长性状差异,并对30个家系在高盐度(25‰~30‰)自然海域的生长和存活率进行监测,对香港牡蛎耐高盐性进行筛选.[结果]各家系间的受精率及孵化率无显著差异(P>0.05,下同).在幼虫培育过程中,至15日龄时以家系G1的壳高最大,家系I1的壳高最小,二者差异显著(P<0.05);以G为父本的半同胞家系存活率较低,均低于平均值(63.21%);而以D为父本的3个家系存活率较高,均超过71.33%.海区养殖期间,至60日龄时各家系均表现出较高的存活率,保持在90.00%以上;至120日龄时,除家系B1、B2、B3、E1、I1、J1、J2和J3外,其他各家系的存活率均为0;至300日龄时家系B1、B2、B3、I1、J1和J2的存活率在40.23%~60.32%.不同家系的壳高在相同日龄差异明显,养成期至300日龄时,家系B2的壳高最大,但与家系B1和J3的差异不显著;以家系E1的壳高最小.[结论]通过家系建立结合高盐海域养殖的方式筛选获得B1、B2、I1、J1和J2等优良家系,可为香港牡蛎耐高盐品系选育提供种质资源.  相似文献   

猪丁型冠状病毒CH/GX/1468B/2017的分离鉴定及全基因组序列分析   总被引：1，自引：1，他引：0  

秦毅斌  何苹萍  卢冰霞  何颖  梁家幸  刘磊  段群棚  韦嫔媛  李斌  陈忠伟  周英宁  苏乾莲  蒋冬福  卢敬专  赵武 《中国畜牧兽医》2019,46(7):1907-1916

本研究于广西某猪场采集疑似感染猪丁型冠状病毒（porcine deltacoronavirus，PDCoV）的腹泻仔猪小肠及其内容物进行病毒分离，并通过细胞病变（CPE）、RT-PCR、间接免疫荧光（IFA）和全基因序列测定分析对分离的病毒进行鉴定。结果显示，试验成功分离到1株PDCoV，命名为CH/GX/1468B/2017（简称PDCoV 1468B）。该毒株可稳定有效地在LLC-PK细胞生长增殖，并引起典型CPE；该毒株已在LLC-PK细胞连续传代15代，病毒滴度随着传代次数的增加逐渐提高并稳定在10^8.10TCID₅₀/mL以上。该毒株全基因组序列长25 399 nt；与23个GenBank中登录的参考毒株的全基因组序列比对显示，核苷酸同源性为97.2%~99.4%，其中PDCoV 1468B分离毒株与Vietnam/Binh21/2015株同源性最高，为99.4%。全基因组系统进化分析显示，PDCoV 1468B分离毒株属于Ⅱ群，与东南亚国家PDCoV毒株亲缘关系密切，处于同一进化分支。综上所述，本研究成功分离出PDCoV 1468B株并进行了全基因序列分析，为进一步开展PDCoV致病性等生物学特性研究及疫苗研制奠定了基础，同时可为PDCoV的遗传进化提供数据支持。  相似文献   

应用6-DMAP人工诱导近江牡蛎三倍体的初步研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

杨春玲  陈晓汉  李咏梅  彭敏  蒋伟明  韦嫔媛  王大鹏  杨彦豪 《西南农业学报》2008,21(3)

采用6-二甲基氨基嘌呤（6-DMAP）抑制受精卵第二极体排放法诱导近江牡蛎产生三倍体,通过6-DMAP浓度、诱导时机、诱导持续时间3因素3水平正交试验设计,得出近江牡蛎三倍体诱导3因素最优水平组合,即当30％受精卵出现第一极体时,将受精卵浸泡在含6-DMAP450μmol／L的海水中20min;3因素影响诱导率的主次顺序为：6-DMAP浓度→诱导时机→诱导持续时间。  相似文献   

EDTA二钠对培养单胞藻的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

姚久祥韦嫔媛  卢小花 《广西水产科技》2007,(1):7-9

本试验对添加不同浓度的EDTA二钠培养等鞭金藻、扁藻、绿色杷夫藻、小球藻，经过3d的培养后，得出结论：添加1-7ms／LEDTA二钠的单胞藻增量比值最高述2．24，最低比值也有1．61，对单胞藻生长有促进作用；添加8—9ms／L的单胞藻增量比值有所降低，对单胞藻生长有一定的抑制作用。  相似文献   

卵形鲳鲹卵巢不同发育时期的转录组测序分析          下载免费PDF全文

李蔚  何苹萍  韦嫔媛  朱鹏  蒋伟明  胡珅华  韦友传  韦明利  彭金霞 《南方农业学报》2022,53(3):714-724

【目的】鉴定筛选出与卵形鲳鲹卵巢发育相关的候选基因及信号通路,为揭示其卵巢性成熟过程的分子机制打下基础。【方法】挑选卵巢发育处于?期和Ш期的雌性卵形鲳鲹,分别构建卵形鲳鲹卵巢?期和Ш期的cDNA文库,采用Illumina HiSeqTM 2500进行转录组测序,经过滤、质量控制及拼接组装后获得的Unigenes在七大数据库（Nr、Nt、Pfam、KOG/COG、Swiss-Prot、KEGG和GO）中进行比对;通过FPKM及DEGseq筛选出差异表达基因,以GOseq和KOBAS对差异表达基因分别进行功能注释及信号通路富集分析,并采用MISA和GATK3进行SSR鉴定及SNP分析。【结果】卵形鲳鲹卵巢组织转录组测序获得的325156432条Raw reads,经过滤筛选得到317206752条Clean reads,拼接组装后得到59554条Unigenes;69.65%的Unigenes在Nr、Nt、Pfam、KOG/COG、Swiss-Prot、KEGG和GO等七大数据库中注释成功,其中有24599条Unigenes被注释到GO数据库,15997条Unigenes被注释到KEGG数据库。在卵形鲳鲹卵巢组织的2个发育时期共鉴定获得56115个基因,经差异表达分析后获得17737个差异基因,其中8169个基因在卵巢Ш期上调表达、9568个基因在卵巢Ш期下调表达。GO功能注释分析发现,卵形鲳鲹卵巢差异表达基因主要注释在细胞过程、氮化合物代谢过程、初级代谢过程、核、核部分、离子结合及水解酶活性等条目上;而KEGG信号通路富集分析结果显示,17737个差异表达基因显著富集在318条代谢途径上,其中前20条KEGG信号通路包括2-氧代羧酸代谢、PI3K-Akt信号通路、甲状腺激素信号通路、磷脂酶D信号通路、Fc εRI信号通路和细胞周期等。卵形鲳鲹卵巢转录组（59554条Unigenes）中共存在30133个SSRs和82490个SNPs。【结论】GnRHR、FSHR、FSHβ、CYP11A、SIRT3和PEG3等差异表达基因及PI3K-Akt信号通路和VEGF信号通路等与卵形鲳鲹卵巢的发育密切相关,共同调节卵巢的发育与成熟,在卵巢性成熟过程中发挥重要作用。  相似文献   

凡纳滨对虾脂肪酸结合蛋白基因全长cDNA的克隆及序列分析     

赵永贞  陈秀荔  谢达祥  王大鹏  彭敏  杨春玲  杨彦豪  韦嫔媛  陈晓汉 《水产学报》2010,34(11):1681-1688

克隆了凡纳滨对虾脂肪酸结合蛋白基因全长cDNA并进行了序列分析。该基因由1042bp的碱基组成,开放阅读框长411bp,编码由136个氨基酸组成的蛋白,基因两翼分别存在113bp(5'端)和518bp(3'段)的非翻译区。聚类分析表明,凡纳滨对虾脂肪酸结合蛋白氨基酸序列与斑节对虾脂肪酸结合蛋白紧密聚为一支,之后聚类顺序依次为刀额新对虾、意大利蜜蜂、斑马鱼、大西洋鲑、鸡、猪和人。通过半定量RT-PCR对该基因在不同组织的表达分析表明,该基因在抗IHHNV对虾肠、胃、肝胰腺和肌肉组织中表达较高,在心肌中表达较低,在眼柄中不表达。比较该基因在抗IHHNV对虾和IHHNV易感对虾心、肝胰腺、肠、胃、眼柄和肌肉组织表达发现,该基因在两种对虾心、肠、胃和肌肉组织中的表达无明显差异,但在肝胰腺中抗IHHNV对虾的表达量明显高于IHHNV易感对虾的表达量,说明该基因参与抗性对虾抑制IHHNV感染的免疫过程。  相似文献