sFat-1转基因猪的遗传特性及基因漂移研究   总被引：2，自引：2，他引：0  

华文君  刘西梅  程妮  乔宪凤  郑新民 《江西农业学报》2012,24(5):127-129

采用PCR检测方法和Southern印迹杂交试验,研究了转sFat-1基因猪的遗传特性及基因漂移情况。结果表明:F1代转sFat-1基因猪能够将外源基因遗传到F2代,F2代仔猪的sFat-1基因阳性比例为32%。F1代及F2代转sFat-1基因猪均没有对同一生产场的猪群产生sFat-1基因漂移。  相似文献   

猪乙脑病毒WHe株的PrM-E、NS1、E-NS2A基因的克隆及序列测定   总被引：1，自引：0，他引：1  

乔宪凤  熊东海  郑新民  徐涤平  赵浩斌  魏庆信 《中国预防兽医学报》2003,25(3)

本文通过RT-PCR扩增了猪乙型脑炎病毒WHe株主要抗原基因NS1(约1.14 kb)、prM-E(约2.1 kb)、E-NS1-NS2A (约3.0 kb),并将NS1、E-NS1-NS2A、PrM-E基因克隆、测序.与Genbank发表的JEV基因序列进行序列分析,发现WHe株与其他12种典型的JEV强毒株的同源性在88.3 %～99.4 %之间.WHe株与K94P05株的同源性最低(88.3 %),与P3株的同源性最高(99.4 %),可认为WHe株是由P3株衍生而来的.在JEV基因组5'端389～3910的长3522 nt的决定JEV抗原性的C-prM-E-NS1-NS2A区中,WHe株与P3株仅有21个碱基不同,其中的14个单碱基突变为同义突变,另外7个为错义突变,导致相应的氨基酸序列(1173个)中的6个氨基酸发生了变异,其中的5个氨基酸变异出现在含有各关键的抗体中和决定簇的E蛋白内,另一个位于NS1蛋白内.  相似文献   

应用多重引物RT-PCR快速诊断禽流感亚型     

华文君  乔宪凤  郑新民 《水禽世界》2007,(3):5-7

将本实验室分离保存、已经过PCR扩增、核酸测序鉴定的三种不同亚型禽流感病毒(AIVH5N1、H6N2、H9N2)分别接种鸡胚,收集尿囊液,分离提取AIV总RNA。参考H1￣H15亚型禽流感病毒的核蛋白(NP)基因序列以及H5、H6、H9亚型AIV血凝素(HA)基因序列,设计四对引物:NP1,NP2;H5P1,H5P2;H6P1,H6P2;H9P1,H9P2,混合为PCR扩增多重引物MP1,下游引物NP2、H5P2、H6P2,、H9P2混合为逆转录反应多重引物MP2。AIV总RNA在相同反应条件下经MP2逆转录,用MP1进行PCR扩增,AIVH5亚型材料得到205bp,563bp两条扩增带,AIVH6亚型材料得到205bp,233bp两条扩增带,AIVH9亚型材料得到205bp,690bp两条扩增带,都与实验设计相符合,阴性材料没有扩增带。该方法成功实现四对引物进行RT-PCR反应同时检测出AIV,准确诊断H5、H6、H9三种禽流感亚型,检测时间短,特异性强,能及时检测出AIV亚型。  相似文献   

PEDV膜蛋白基因RT－PCR最适反应条件的确立   总被引：2，自引：0，他引：2  

乔宪凤  熊忠良  华文君  郑新民 《湖北畜牧兽医》2001,(1):8-10

以猪流地性腹泻病毒（PEDV）的RNA为模板，探讨了影响猪流行性腹泻病毒（PEDV）的RT－PCR反庆的各种因素，确立了RT－PCR的最适瓜应条件。  相似文献   

精子介导生产转hCD59基因猪   总被引：9，自引：0，他引：9  

肖红卫  郑新民  陈思怀  乔宪凤  谷习文  田永祥  张涌  魏庆信 《华中农业大学学报》2006,25(2):170-173

为研究精子介导法生产异种器官移植用转基因猪的效率,将人膜反应性溶解抑制物(hCD59)基因与脂质体混合制成基因/脂质体复合物,分别采用睾丸注射法和基因脂质体复合物/精子共孵育法制备转人hCD59基因猪,其中睾丸注射法处理公猪1头,44 d后配母猪8头,7头受孕(受孕率87.5%),产仔73头,PCR阳性猪3头(阳性率4.3%);外源基因/精子共孵育法处理公猪4头,处理母猪4头,1头受孕(受孕率25%),产仔11头,PCR阳性猪1头(阳性率9%)。从15头受孕母猪共获得84只仔猪,经PCR初步检测,其中4只仔猪为转基因阳性,阳性率4.8%。研究结果表明:通过精子介导法可以获得转基因猪。  相似文献   

转人血清白蛋白基因猪的表达分析     

郑新民  乔宪凤  杨在清  魏庆信 《经济动物学报》2002,6(2):24-26

整合有人血清白蛋白基因的转基因猪 ,经琼脂糖扩散、蛋白质电泳、Western杂交等分析 ,发现 3头转基因猪不同程度地表达了人血清白蛋白 ,其中最高表达水平为 2 0 3mg/mL。  相似文献   

猪羊生长激素基因保守性研究     

郑新民  华文君  乔宪凤  赵浩斌  李莉  曹军平  周荆荣  魏庆信 《湖北农业科学》2001,(2):62-64

生长激素基因在猪羊间的差异 ,通过两对引物 ,分别为P1:5’ -agctggattctttacggctgagcc - 3’和P2 :5’ -tccggaagcaggagagcagaccgtag - 3’ ,P3:5’ -gctgacacctacaaggagtttg - 3’和P4:5’ - gtttgcttgaggatctgtcctg - 3’。对它们的DNA进行聚合酶链反应 ,电泳及序列分析结果表明 :P1-P2和P3-P4引物都能扩增出猪羊DNA样 ,得到大小一致的扩增带 (对应引物的带 ) ,但southern杂交结果的差别很大 ;生长激素基因的碱基组成在猪羊间的差异为 6 5 % ,即猪羊生长激素基因保守性很强  相似文献   

我国不同地区禾谷缢管蚜种群感染RhPV的RT-PCR检测     

彭雄  宋月  乔宪凤  陈茂华 《麦类作物学报》2014,34(11):1583-1588

禾谷缢管蚜病毒(RhPV)是一种寄生在禾谷缢管蚜体内的小RNA病毒。为了探讨RhPV在我国禾谷缢管蚜种群中的分布和感染情况,从我国11个省16个不同地区麦田采集禾谷缢管蚜,利用RT-PCR检测RhPV在不同种群共212个禾谷缢管蚜个体中的感染情况,并对获得的RhPV基因序列进行了差异比较和系统发育分析。结果表明,16个禾谷缢管蚜地理种群中均检测到了RhPV,感染率介于50%~100%之间。序列比对分析表明,克隆得到的RhPV基因片段在不同种群中非常保守,所有分析的蚜虫个体中仅得到6条不同的基因序列,这些序列与其他国家已经报道的RhPV序列相似性都在98%以上;系统发育分析表明,6条不同的RhPV基因序列可以分为2个亚进化枝,国外报道的两条RhPV相应序列构成其中的一个进化枝,本研究获得的6条序列构成另外一个进化枝。本研究所选用的基因片段能够准确检测RhPV在禾谷缢管蚜中的感染率,为进一步分析RhPV对禾谷缢管蚜的发育繁殖、行为、种群动态和种群微进化的影响奠定了基础。  相似文献   

表达人血清白蛋白转基因猪的研究   总被引：4，自引：0，他引：4  

郑新民  魏庆信  乔宪凤  华文君  李莉  杨在清  肖作焕 《西南农业学报》2003,16(1):119-121

本研究采用显微注射法，使含有猪血清白蛋白侧翼序列的微小人血清白蛋白导入猪的基因组中，生产出转入血清白蛋白（HSA）基因猪，经PCR和Southern杂交检测，有4头活仔整合有HSA基因，其中的3头不同程度的表达了人血清白蛋白。  相似文献   

细胞和个体水平沉默效应的差异     

郑新民  刘中华  程妮  肖红卫  乔宪凤  毕延震 《安徽农业科学》2011,39(29):17792-17794,17832

[目的]研究3种不同长度的四联shRNA载体及其在细胞与个体水平的沉默效应差异。[方法]以EGFP为靶标基因,用hU6、mU6、h7SK、hH1 4种启动子,构建21、27、29 bp的3种四联沉默载体,通过转染Vero细胞和注射小鼠肌肉,以实时荧光定量PCR的方法检测绿色荧光蛋白基因的mRNA水平。[结果]3种载体都有很强的沉默效应,其在细胞水平上的沉默效应远高于个体水平上,可以通过未成年鼠的肌肉注射进行转基因。[结论]多位点串联表达shRNA是一种可以达到较好干扰效果的方法,肌肉注射将是一个简便的转基因途径。  相似文献