猪繁殖与呼吸综合症病毒ORF5基因的融合表达     

陈勇军  苏鑫铭  高晓飞  郑其升  于春梅  曹瑞兵  周斌  陈溥言 《农业生物技术学报》2006,14(3):319-322

根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合症病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus , PRRSV)ORF5基因的核苷酸序列设计3对特异性引物，从重组质粒pMD- ORF5中扩增去除ORF5基因中包括全部信号肽在内的N端跨膜区(28 residues)和中部跨膜区(60 residues)。改造后的ORF5基因分别命名为ORF5-1和 ORF5-2。将2个基因片段定向克隆到原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-ORF5-1和pET-ORF5-2,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞，经IPTG诱导表达和SDS-PAGE电泳分析，ORF5-1和ORF5-2基因获得融合表达，表达量分别为12.2%和39%，证明删除双跨膜区能明显提高ORF5基因的表达量。经Western blot分析，融合蛋白具有一定的免疫学活性，表明摘除跨膜区对该蛋白的抗原性影响不大。  相似文献   

温室黄瓜霜霉病综合防治技术   总被引：1，自引：0，他引：1  

于春梅  王招友  帕提曼 《新疆农业科技》2009,(6):32-32

0 引言 反季节蔬菜生产经济效益较高,特别是冬春茬温室黄瓜生产倍受菜农青睐.但是在冬春季温室内,由于受低温、弱光、湿度的影响,霜霉病发生普遍,危害较重.在防治过程中,由于菜农没有准确把握黄瓜霜霉病发病原因,不能对症用药,盲目防治,结果造成防治困难.要想控制黄瓜霜霉病的发生,首先要从控制黄瓜霜霉病发病条件--温度和湿度入手,其中湿度是最主要的发病条件.  相似文献   

表达Cre重组酶的真核细胞系的建立及在重组伪狂犬病病毒研究中的应用     

苏鑫铭  徐亚林  于春梅  曹瑞兵  周斌  陈溥言 《农村．农业．农民》2007,(4):114-119

根据Cre基因序列设计并合成1对引物,PCR扩增出Cre基因编码区,克隆于pIREShyg载体,得到重组质粒pIREShyg-Cre,转染HEK-293A细胞后经400 μg·mL-1 Hygromycin B的筛选,将其中1个阳性克隆命名为293A-Cre.利用伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)S03109株(带有gfp报告基因表达盒及loxP位点)感染293A-Cre细胞,荧光显微镜观察、PCR及Western blot检测gfp基因的表达.结果表明,S03109感染293A-Cre二代后loxP位点间的gfp表达盒被删除,获得重组病毒S0419.将S0419感染已转染pBlulox的293A-Cre细胞,在RK13细胞上筛选得到表达LacZ的重组病毒S06293.S06293在293A-Cre细胞上传代2次,X-Gal原位染色表明LacZ的表达消失.测序结果证实,在Cre重组酶作用下,2个同向loxP序列之间的外源基因序列被正确除去.以上结果表明,本研究构建的稳定表达Cre重组酶的293A-Cre细胞系可以用于在包含有loxP位点的PRV基因组中外源基因的快速删除或整合.  相似文献   

谈企业理财投资策略的投资规模及其问题     

于春梅  李长虹  刘晓玲 《森林工程》2001,17(5):27-28

本对企业理财投资策略的投资规模及其方向进行了探讨，对其企业投资评价的基本要素、投资策略的选择应注意的问题等进行了探讨。以便企业能够对投资策略重视起来，从而尽量发挥资金的最大效益。  相似文献   

防治白蜡绵粉蚧药剂筛选试验   总被引：2，自引：0，他引：2  

于春梅 《青海农林科技》2005,(2):13-15

白蜡绵粉蚧phenacoccus fraxinus是危害西宁市白蜡树胁Fraxinu sp．的主要害虫，通过采用8种药剂试验，筛选出高效氯氢菊酯1500 500倍柴油，效果达95％以上，有效控制该虫的危害。  相似文献   

伪狂犬病病毒UL24基因的原核表达及抗UL24蛋白抗体的制备     

于春梅  李鹏  郑其升 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2007,35(9):10-14

为了给伪狂犬病病毒(PrV)UL24蛋白的细胞定位和功能研究提供参考依据,据GenBank公布的PrVUL24基因序列(登录号NC006151)设计1对引物,以质粒pUL24-GFP为模板,用PCR方法扩增出部分缺失的基因片段mUL24(modified UL24)。将mUL24片段定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建融合表达载体pET-UL24。阳性质粒转化宿主菌E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导,重组蛋白(His)6-UL24以包涵体的形式获得表达。用纯化后的pET-UL24融合蛋白免疫家兔,ELISA分析表明,在血清效价达到1∶2 560以上,Western-blot分析制备的抗体可以和pET-UL24表达产物发生反应,具有良好的免疫特异性。  相似文献   

大棚黄瓜白粉病的识别与防治     

温有学  于春梅  郑兰芬 《吉林农业》2006,(10):22-23

黄瓜白粉病是大棚黄瓜生产中重要病害之一，是我省发生比较普遍的一种病害。温室大棚内一旦发病，发展迅速，严重时可造成叶片干枯甚至提早死亡，对黄瓜产量影响很大。此病除为害黄瓜外，还为害西葫芦、甜瓜、南瓜、西瓜、冬瓜、丝瓜等。  相似文献   

探针检测鸭黄病毒的地高辛标记DNA的制备与应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

高绪慧  刁有祥  唐熠  于春梅  张大丙  岳澄滨 《兽医大学学报》2012,(4):525-528

利用RT-PCR方法扩增鸭黄病毒的NS3基因406bp的特异性片段,回收并纯化PCR产物,用地高辛标记,制备核酸探针。特异性试验结果表明,该探针仅与鸭黄病毒的核酸特异性杂交,而与鸭瘟病毒、H9N2禽流感病毒、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、减蛋综合征病毒的核酸杂交均为阴性。敏感性试验表明,该探针对鸭黄病毒的RNA最低检出限量为100μg/L。对疑似黄病毒感染鸭的肝脏、肺脏、脾脏、输卵管、卵泡膜和泄殖腔棉拭子进行检测,以卵泡膜的检出率最高。该研究为鸭黄病毒感染的诊断和流行病学调查提供了一种可靠的方法。  相似文献   

甜菜根腐病、丛根病的发病规律及防治措施     

马文俊于春梅  殷小芳 《中国农业信息》2014,(3):32

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甜菜膜下栽培技术     

马文俊殷小芳  于春梅 《中国农业信息》2014,(7):34

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