油菜BnICE1的克隆及表达分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

张腾国  常燕  王娟  王宁  王圆圆  陈琼琼  孙万仓 《中国农业科学》2013,46(1):205-214

【目的】从超强抗寒油菜品种陇油6号中克隆抗寒转录因子BnICE1,并对其进行序列特征分析,研究BnICE1在低温胁迫下表达水平的变化,探讨BnICE1对油菜耐低温胁迫能力的影响。【方法】利用RACE技术获得油菜BnICE1全长的cDNA序列。对该序列进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR研究BnICE1低温及不同组织表达量。【结果】cDNA片段全长1 737 bp,包含1 500 bp完整的开放阅读框,该基因编码499个氨基酸残基,分子量53.2 kD,等电点5.0。序列比对表明,该蛋白C端含有一个典型的bHLH结构域,与其它植物的ICE1蛋白具有较高的同源性,因此命名为BnICE1（GenBank登录号为JF268687）。进化树分析表明,BnlCE1同羊草和白菜亲缘关系较近。实时荧光定量PCR结果表明,该基因在油菜茎、叶和下胚轴均有表达,下胚轴中表达量最高,同时该基因的表达受低温胁迫诱导。【结论】从油菜中克隆了抗寒基因BnICE1,实时荧光定量PCR分析表明其在油菜适应低温胁迫的过程中发挥作用。  相似文献   

含FMDV 2A序列PRRSV GP5和M蛋白重组腺病毒的构建与鉴定     

云涛  倪征  余斌 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2009,37(8):13-18

【目的】构建表达PRRSV GP5和M蛋白、且二者通过口蹄疫病毒(FMDV)2A序列连接的重组腺病毒,以期实现2个蛋白的同时表达,发挥GP5蛋白的病毒中和优势和M蛋白的细胞免疫优势作用。【方法】利用RT-PCR、间接免疫荧光和Western blot等方法,对获得的重组腺病毒(rAd-GP5-2A-M)进行检测。【结果】检测结果均证明,GP5-2A-M蛋白不仅获得了正确表达,而且能自我裂解为GP5和M蛋白。【结论】在GP5和M蛋白之间插入具有自我裂解功能的FMDV 2A策略是切实可行的,并为PRRSV多个蛋白的共表达奠定了基础,也为其他病毒基因工程疫苗的研制提供了全新思路。  相似文献   

断奶仔猪多系统衰竭综合症发病机理的研究进展     

云涛  倪征  刘光清  陈锦清 《中国农学通报》2005,21(11):19-19

断奶仔猪多系统衰竭综合症（PMWS）是由2型圆环病毒（PCV2）引起猪的一种疾病。PMWS的主要病理特征是淋巴细胞衰竭。目前认为PMWS的发病机理与免疫系统有关。在此,就目前关于PCV2—PMWS—免疫系统三者之间关系的研究进展和未来主要的研究方向作一综述。  相似文献   

鸭坦布苏病毒抗体间接ELISA检测方法的建立和应用     

余斌  华炯钢  刘跃生  赵灵燕  倪征  叶伟成  云涛  陈柳  徐辉  张存 《浙江畜牧兽医》2014,(5)

为建立特异性和敏感性较高的鸭坦布苏病毒(DTMUV)抗体检测方法,采用原核表达系统对DTMUV E蛋白的DⅢ结构域进行了双串联融合表达,SDS-PAGE电泳结果显示目的蛋白大小约25 Ku。Western blot结果显示,经亲和层析纯化的重组蛋白能与DTMUV阳性血清发生特异性反应。以纯化的重组DⅢ蛋白作为包被抗原,初步建立了检测DTMUV血清抗体的间接ELISA方法。采用梯度稀释法对ELISA各种反应条件进行优化,确定最适工作条件。重组抗原最适包被浓度为5μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶100,兔抗鸭酶标抗体最适稀释度为1∶1000;抗体临界值S/P≥0.336判定为阳性,S/P≤0.287判定为阴性,介于两者之间为可疑。该方法检测禽流感病毒、鸭源新城疫、鸭甲肝病毒、鸭圆环病毒、鸭细小病毒、经典呼肠孤病毒及新型鸭呼肠孤病毒等血清均为阴性,4个批次批内与批间重复试验的OD值变异系数分别为6.21%~7.27%和3.4%~7.2%,显示该法具有很好的特异性、稳定性和重复性。用建立的间接ELISA与中和试验分别对108份疑似鸭坦布苏病血清样品进行检测,两种方法的阳性符合率为83.3%。  相似文献   

咸菜未腌男童中毒     

云涛  步增 《中国果菜》2000,(1)

近日，浙江省宁波市郊区一名３岁男童，因贪吃未腌透的咸菜中毒，幸亏及时抢求才得以脱险。这名男孩于的父母是外地来甬打工人员。那大下午３时许，他们取出一大碗自己腌制的咸菜，随手放在桌上，便又忙别的去了。男孩看见桌上有碗咸菜，便吃了起来，并吃了一大碗。一个多小时后，家长发现小孩出现全身青紫、精神恍惚、呼吸急促等症状，忙把他送到妇儿医院。经仔细诊查，发现孩子系贪吃未腌透的咸菜而引起的亚硝酸盐中毒。咸菜未腌男童中毒@云涛@步增  相似文献   

新型鸭呼肠孤病毒弱毒株在雏番鸭体内的分布和排毒规律     

华炯钢  叶伟成  刘可姝  云涛  倪征  陈柳  朱寅初  张存 《浙江农业科学》2021,62(11):2295-2298

为了解新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)弱毒株感染雏番鸭后在体内的分布和排毒规律,本研究采用传代致弱的NDRV JDm10-150毒株接种1 d龄雏番鸭,对接毒后6 h~35 d雏番鸭的血液、脑、胸腺、心、肝、脾、肺、肾、胰腺、法氏囊、盲肠扁桃体、咽拭子和泄殖腔拭子采用qRT-PCR方法检测病毒分布情况。结果显示:接6 h后,在各组织脏器及血清中可检到NDRV核酸,且肝和脾病毒含量最高。随后,各组织脏器及血清中NDRV核酸含量逐渐减少。接毒后9 d,各组织器官及血液均检测不到NDRV核酸或NDRV核酸检测为阴性(Ct>35)。接毒后第13~35 d,除脑和血清外,大部分的组织脏器中均又检测到NDRV核酸,且NDRV核酸含量基本稳定,其中脾脏和法氏囊组织中NDRV核酸含量始终保持较高水平。对不同时间采集的咽拭子和泄殖腔拭子进行检测,发现雏番鸭在接毒后6 h开始向外界排毒,之后通过泄殖腔排毒,直至攻毒后28 d停止排毒。以上检测结果表明,NDRV JDm10弱毒株感染雏番鸭后快速侵入各组织脏器和血液,脾脏和法氏囊为主要侵染和定殖场所,主要通过泄殖腔分泌物向外界排毒。  相似文献   

猪瘟病毒对新城疫病毒激活的IFN-β启动子的抑制研究   总被引：1，自引：1，他引：0  

陈柳  张楚瑜  夏燕华  余斌  云涛  倪征  华炯钢  李双茂 《畜牧与兽医》2011,43(5)

为了研究猪瘟病毒(CSFV)对IFN-β产生的影响,我们利用荧光素酶报告基因系统测定了CSFV Shimen株感染猪肾细胞PK15后人源IFN-β启动子的诱导情况,以及以新城疫病毒(NDV)作为诱导剂建立了细胞内IFN-β诱导的模型,基于该模型,我们探讨了CSFV对病毒活化的IFN-β启动子的影响。研究表明,不管条件如何改变,CSFV Shimen株都不能诱导活化IFN-β启动子。NDV可以有效诱导激活IFN-β启动子,且能与CSFV共感染同一个PK15细胞。深入研究发现,CSFV Shimen株能很好地抑制NDV对IFN-β启动子的活化,尤其是CSFV先于NDV感染或两病毒同时感染PK15细胞时,抑制效果最为明显。CSFV的这种抑制IFN-β启动子激活的特性在一定程度上解释了猪瘟病毒持续感染的机理,为抗病毒药物的设计和新药的开发以及病毒病的治疗提供了一定的借鉴。  相似文献   

内蒙古地区牛传染性鼻气管炎血清学调查   总被引：2，自引：0，他引：2  

希尼尼根  云涛  党娟  陈玉惠  李平安  关平原 《内蒙古农业大学学报(自然科学版)》2012,33(3):13-15

本文应用ELISA方法对内蒙古自治区13个盟市457头牛进行了牛传染性鼻气管炎血清流行病学调查.结果显示,除兴安盟、巴彦诺尔市、乌海市和阿拉善盟以外,其他盟市均查出牛传染性鼻气管炎感染阳性牛,最低感染率仅为5％,最高感染率达100％,中东部地区疫情较严重.本研究结果,为内蒙古地区牛传染性鼻气管炎的防制提供可参考数据.  相似文献   

大型家畜急腹症的中兽医治疗原则及方法     

和云涛 《新农业》2023,(22):52-53

<正>1大型家畜急腹症概述急腹症是指腹腔内、盆腔、腹膜后组织和脏器发生了急剧的病理变化,从而产生以腹部为主要症状和体征,同时伴有全身反应的临床综合征。在大型家畜急腹症中,大型家畜的具体表现常常为患病家畜难以正常站立,只能进行起卧动作,因此,大型家畜急腹症也叫做“起卧症”。  相似文献   

鸭坦布苏病毒一步法RT-PCR检测方法的建立和应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

张帅  云涛  叶伟成  邓晓辉  崔言顺  华炯钢  张存  张燕 《浙江农业学报》2012,24(1):37-40

鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)是一种新发现可引起鸭产蛋下降的新型黄病毒,建立一种病原学检测方法对于疫病的诊断和流行病学研究具有重要意义。在对DTMUV序列的比对分析的基础上,设计了1对特异性引物,通过优化PCR反应条件,建立了DTMUV的一步法RT-PCR检测方法。该方法具有特异、快速、敏感、准确等特点,可以检出1.82个TCID50的病毒核酸。对2010年至2011年6月份前的106份产蛋下降鸭群临床病料进行了检测,结果显示样品阳性率为46.2%,表明DTMUV在浙江及其周边省份的产蛋鸭群具有较高的感染率。  相似文献