多重PCR方法快速检测猪的5种呼吸道病原菌   总被引：3，自引：0，他引：3  

薛云  赵战勤  陈杨  邹浩勇  何启盖  李文洁  熊金凤  陈焕春 《畜牧兽医学报》2009,40(8)

猪胸膜肺炎放线杆菌(App)、副猪嗜血杆菌(Hps)、支气管败血波氏杆菌(Bb)、产毒性多杀巴氏杆菌(T+Pm)和猪肺炎支原体(Mhp)是最常见的几种猪呼吸道病原菌.笔者参照文献报道的基因序列设计针对App、Hps、Bb、T+Pm和Mhp的特异性引物,对单一PCR条件进行系统优化后建立5重PCR方法.该多重PCR方法能对同一样品中5种病原菌的DNA模板进行扩增,且在5种病原菌之间没有交叉反应;对大肠杆菌等其它6种常见猪细菌性病原的榆测结果均为阴性;对5种病原菌DNA模板检出的最小最均低于160 Pg,且能从攻毒小鼠(App、Hps、Bb和T+Pm)肺脏组织8 h增菌的培养物中快速检测出相应的病原菌.对中国华中地区269份临床样本的检测结果表明,5种呼吸道病原菌在华中地区猪群中普遍存在,且混合感染情况十分严重.这些试验结果表明该多重PCR方法可用于猪呼吸道病原菌App、Hps、Bb、T+Pm和Mhp的单一或混合感染的鉴别诊断及病原流行病学调查.  相似文献   

中国部分地区猪圆环病毒2型的基因型分析   总被引：6，自引：1，他引：5  

李文洁  李文涛  严伟东  陈焕春  何启盖 《畜牧兽医学报》2009,40(9)

对中国11个省(市)部分猪场收集的812份病料,应用ORF2-PCR进行检测,发现有235份为PCV2阳性病料.利用鉴别PCR方法从235份阳性病料中,检出10份PCV2a基因型和133份PCV2b基因型,检出率分别为4.2%、56.6%.进一步对ORF2-PCR检测阳性的部分模板进行全基因组扩增,构建阳性重组质粒,对插入质粒的片段进行测序鉴定,利用DNAStar进行同源性分析,同GenBank参考毒株绘制系统发育树,从系统发育树中也可分出PCV2a、PCV2b 2种基因型.鉴别PCR和测序结果说明,我国部分地区流行的猪圆环病毒2型以PCV2b基因型为主,少数为PCV2a基因型,也有既非PCV2a又非PCV2b的基因型(PCV2c?).  相似文献   

浅谈2009年“高热病”     

喻正军  何启盖  吴斌 《北方牧业》2009,(20)

秋风起,高热知多少?从今年6月份开始,编者了解到哈尔滨那边有高热症状的病比较多,在个别区域损失也比较大。然后是7、8月的海南、四川个别的县市,闹的一些猪场都被洗白了。9月前后,苏南的高热已经开始用省作为单位划分。10月安徽的高热在零星持续后,近半个月在南部暴发。河南的专家报平安的话音刚落,目前也开始"热"起来,山东亦不能置身事外。这些消息,是确实的,只是表述无法很准确。也许疾病还没有蔓延到北方,但是一些恐慌性抛售的行为在部分地区出现。作为猪版编辑,这些日子,也接到过数个求助电话。电话的那头,十分的焦虑,每次的意思都差不多,‘能想的办法都想了,可还是没有办法不死猪’。编者能何为,也只能尽可能的多告诉他们几个学院兽医、市场兽医、基层兽医的电话,希望可以帮帮他们。但是,其实是我们养猪人在某些环节没有做好,种下的因,造成了猪这种结果。这期的稿件,就是这种思路的纸面化。面对一个曾被号称"无名"的病,有实验室的教授的数据分析、有公司技术总监的总结、有一线兽医的真切实感。这个病很庞杂,同时因为受编者水平所限,文章亦有内容重叠和有待商榷的地方,敬请读者海涵,但是,作为在一线奔走的专家、技术人员他们的意见值得广大读者重视,并可因地制宜的检验和发挥。编者认为,只有读者参与一本刊物才可能办好,所以希望读者能就养猪生产一线的问题积极交流,踊跃投稿。编者小魏,手机13931178959邮箱weiyueming2222@163.com。先谢谢大家啦!  相似文献   

免疫组织化学方法诊断猪圆环病毒病     

林涛  汪开毓  邓桦  何启盖  马春全 《四川农业大学学报》2009,27(4):475-478

以猪圆环病毒Ⅱ型ORF2(PCV2-ORF2)重组蛋白为抗原,按常规免疫方法免疫家兔,制备兔抗猪圆环病毒Ⅱ型ORF2重组蛋白的IgG,以此IgG为第一抗体,采用免疫组织化学二步法,对临床疑似猪圆环病毒病例及RT-PCR确诊为阳性猪圆环病毒病例的肺脏组织切片进行检测。试验结果证明,该免疫组织化学方法具有良好的特异性、直观性,简单易行,可以对猪肺巨噬细胞中的存在的PCV2病毒抗原进行准确的定性和定位诊断。  相似文献   

规模化猪场猪瘟免疫状况调查及仔猪首免日龄的优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

罗勇  吴斌  黎作华  黄刚  梅力  李腾  满晓营  何启盖 《中国兽医杂志》2010,46(3)

为了调查规模化猪场猪瘟的免疫方案,比较及评价其免疫效果,本研究将湖北省7个规模化种猪场作为研究对象,将猪群分为经产母猪、种公猪、后备母猪、哺乳仔猪(0~30日龄)、保育仔猪(30~60日龄)和生长猪(61日龄以上)6个群体,并按各猪群5%~8%的比例采血,检测猪瘟抗体。结果表明,各猪群猪瘟免疫合格率分别为99.55%、96.43%、99.22%、89.88%、81.68%及78.64%,不同免疫方案下,各场猪群表现出不同免疫效果。而从总体上看,保育仔猪的猪瘟抗体水平是各个猪群中最为薄弱的环节。因此本研究在调查的基础上,继续探索了一个规模化猪场的仔猪猪瘟母源抗体消退规律,并且分别设置了14、21、28、35日龄猪瘟疫苗免疫组,于免疫后1周及2周后采血检测猪瘟抗体。结果表明,该场猪瘟免疫最佳首免日龄为28日龄,并根据研究结果将该场原来的首免21日龄调整到28日龄。本研究的开展对规模化猪场制定合理的猪瘟免疫方案具有较好的参考价值。  相似文献   

猪细菌性呼吸道传染病懿鉴别诊断与防控     

何启盖 《今日畜牧兽医》2010,(8):3-6

猪呼吸系统疾病是规模化养猪场常见的疾病．主要影响断奶以后不同阶段的猪群。共同的症状多见于肺炎、鼻炎,表现为咳嗽、打喷嚏、呼吸困难、生长缓慢、饲料报酬下降。  相似文献   

当前养猪业中主要细菌病的研究现状     

何启盖 《现代畜牧兽医》2010,(3):42-43

目前,在规模化养猪场中,细菌感染十分普遍,尤其是在免疫抑制疾病发生的地区较为常见。当前,猪链球菌、副猪嗜血杆菌和猪传染性胸膜肺炎是最主要的细菌病,而且由于这三种细菌均具有多血清型,加上耐药性产生频繁,给临床免疫防治带来了困难。猪支原体肺炎依旧是猪场中常见的呼吸道疾病,也是猪呼吸道综合征的原始病原,并可造成一定程度的免疫抑制,降低机体的免疫力。此外,肠外大肠杆菌的出现,使猪大肠杆菌病的临床表现和流行更加复杂。  相似文献   

猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒和乙型脑炎病毒多重RT-PCR检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘辉  熊金凤  邹浩勇  陈杨  杨维红  何启盖 《华中农业大学学报》2008,27(1):12-18

根据猪瘟病毒(CSFV)的E2基因保守序列、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的ORF7基因及部分ORF6和3-UTR基因序列和猪乙型脑炎病毒(JEV)的E基因保守序列,设计了3对引物,扩增大小分别为288 bp、430 bp和1 015 bp目的片段.以纯培养病毒抽提RNA,制备cDNA模板,利用3对引物,通过条件的优化,建立了同时检测这3种病毒的多重RT-PCR.CSFV、PRRSV和JEV的RNA最小检出量分别为0.270 ng、0.049 ng、0.067 ng,其它的RNA病毒如TGEV以及DNA病毒如PPV、PrV、PCV-2检测结果为阴性.以β-actin为对照,利用本方法检测了174份临床样品(血清、肺脏和胎儿),其结果为:PRRSV、CSFV和JEV的阳性率分别为30.4%、4.6%和1.7%;CSFV和PRRSV混合感染阳性率为1.7%.同时对临床样品中CSFV、JEV和PRRSV阳性PCR产物进行测序分析,发现CSFV、PRRSV和JEV的PCR产物序列和NCBI数据库中目标基因的同源性分别为92%、90%和89%,这证实了多重PCR的阳性结果为上述3种病毒.结果证明,所建立的多重RT-PCR可用于临床检测.  相似文献   

猪源支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究   总被引：6，自引：0，他引：6  

赵战勤  裴洁  薛云  汤细彪  吴斌  何华  周学利  程相朝  何启盖  陈焕春 《中国农业科学》2008,41(12):4209-4217

 【目的】探讨2003～2006年间支气管败血波氏杆菌（Bordetella bronchiseptica,Bb）在中国湖北等十余省市猪群中的流行病学分布和协同感染特性并对部分菌株进行生物学特性研究。【方法】采用病原菌的形态学观察、生化鉴定和PCR鉴定,从2 057份有肺炎或萎缩性鼻炎症状猪的肺脏等病料组织中分离出190株Bb和不同数量的其它共感染菌。经生化鉴定,药敏试验、血凝试验及动物试验等方法进行检测和分析。【结果】在中国湖北等十余省市的猪群中,不同省份Bb的总分离率介于7.3%～14.1%之间;不同年份Bb的总分离率介于7.3%～11.8%之间;2003～2006年间的Bb总分离率为9.2%;Bb的分离率与猪日龄有一定的关系。Bb最常见的共感染菌依次是链球菌（55.9%）、副猪嗜血杆菌（50.0%）、大肠杆菌（43.1%）、巴氏杆菌（25.5%）、绿脓杆菌（17.6%）和沙门氏菌（11.8%）。在43份有典型萎缩性鼻炎症状猪的病料中,分离出22株Bb、7株产毒素巴氏杆菌和6株绿脓杆菌;在分离出产毒素巴氏杆菌的7份病料中均同时分离出了Bb,而其中6份又同时分离出了绿脓杆菌。对2003年分离的31株Bb进行药敏试验、红细胞凝集试验和乳鼠皮肤坏死试验。结果表明：各菌株对15种药物的耐药谱不同,但对卡那霉素、庆大霉素、多粘菌素B、环丙沙星和舒普深高度敏感;各菌株均可凝集猪和羊的红细胞且能不同程度导致乳鼠皮肤坏死。【结论】在中国湖北等十余省市的猪群中,Bb与其它病原菌的共感染情况非常严重,且在萎缩性鼻炎的病猪中检出率最高。  相似文献   

基于PCV3-Cap蛋白间接ELISA检测方法的建立及临床应用     

王俊伟  陈芳洲  库旭钢  李畅  何启盖 《畜牧兽医学报》2019,(2):454-460

为了建立一种敏感和特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法,对PCV3-Cap蛋白抗原表位预测发现其抗原表位多聚集在C端(羧基端),而N端前33氨基酸为核定位序列。以截断N端前120个氨基酸后的PCV3ORF2序列为靶基因,设计引物。以PCV3阳性病料为模板,PCR扩增截短的ORF2基因,并将其克隆至pET-30a载体构建重组质粒,并转染至大肠杆菌E.coli BL21感受态细胞,获得重组菌后选择最佳诱导表达条件,采用Ni-NTA亲和层析柱纯化表达产物。以纯化后的重组Cap蛋白作为包被抗原,建立PCV3间接ELISA (indirectELISA)诊断方法,并初步用于临床样品检测。结果:从阳性病料中扩增出大小为285bp的PCV3ORF2基因片段,重组质粒经双酶切和测序鉴定构建成功。采用1mmol·L-1 IPTG诱导,在37℃条件下培养6h重组菌,重组蛋白获最佳表达。Western blot结果表明,该重组蛋白与PCV3阳性血清具有较好的反应原性。ELISA的最佳包被抗原质量浓度为1μg·mL-1,待检血清最佳稀释度为1∶20,酶标抗体最佳工作浓度为1∶5 000。阳性判定值为S/P≥0.273。批内和批间系数均小于10%,表明该方法具有较好的重复性。PCV2阳性血清用本方法检测为阴性,表明该方法有较好的特异性。检测采集的439份临床猪血清,PCV3抗体阳性检出率为60.59%(266/439)。结果表明,本研究建立了一种快速、简便、敏感、特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法。  相似文献