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81.
为建立测定血清中猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)外毒素ApxI中和抗体的方法,本研究采用(NH4)2SO4沉淀法从血清10型APP培养液中经盐析浓缩提取具有溶血活性的天然毒素ApxI,将毒素与待检血清在37℃孵育2 h,加入4％猪红细胞悬液并反应0.5 h,利用酶标仪测定反应混合物上清液的OD540nm值判断溶血程度,计算... 相似文献
82.
伪狂犬病病毒鄂A株TK—／LacZ＋突变株的构建 总被引：3，自引：0，他引：3
本研究以地高辛标记的含TK基因的BamHI/KpnI片段为探针，通过Southern杂交确定伪狂犬病病毒鄂A株基因组中一大小约5．9kb的KpnI片段中含有TK基因，回收该片段并克隆于PUC18铁KpnI位点，然后进一步克隆其中含TK基因的PstI/KpnI片段，并将LacZ表达盒插入到该片段中的BamHi位点，构建转移质粒pUEKPZ，该将质粒与伪狂犬病病毒鄂A株基因组共转染PK－15细胞，待完全病变后在X－gal存在下筛选蓝斑，蓝斑纯化3次后，经PCR扩增，Southern杂交证实获得的病毒为伪狂犬病病毒鄂A株TK－／LacZ 突变株。 相似文献
83.
84.
伪狂犬病病毒Ea株gE基因的克隆、序列分析及其表达 总被引：1，自引：1，他引：0
对含伪狂犬病病毒（Pseudorabies Virus,PrV）Ea株gD基因部分编码序列，gI、gE和11k基因全序列、28k基因部分序列的质粒pSKB4.5进行亚克隆，构建了只含完整gE基因（长1.78kb）的重组质粒pSDM1.78 ，并采用双脱氧末终止法对全序列进行了分析，发现同国外标准毒株Rice株相比较，在核苷酸和氨基酸水平均存在一定程度的差异。进一步将gE基因克隆到高效真核表达载体pcNDA3.1 的Kpn1和BamH1位点之间，构建了gE基因的真核表达质粒pcDNA-gE。体外转染IBRS-2细胞，经间接免疫荧光法检测证实了gE基因在IBRS-2细胞中得到了表达，表达的蛋白具有生物学活性。 相似文献
85.
伪狂犬病病毒Ea株糖蛋白gD基因的表达及基因免疫 总被引：2，自引：0，他引：2
构建了2个利用人类巨细胞病毒（HCMV）的启动子启动表达伪狂犬病病毒Ea株糖蛋白gD基因的真核表达质粒pCIDI和pcDDI，体外转染BHK－21细胞，用间接免疫荧光法检测，证实糖蛋白gD在细胞中得到表达。用表达质粒pCIDI和pcDDI作为核酸疫苗免疫BALB/c小鼠，ELISA检测小鼠血清中抗伪狂犬病病毒的抗体，结果其滴度为1：128－1：1512。初步证实，用gD基因作为核酸疫苗免疫动物，可以激活机体的免疫应答反应。 相似文献
86.
分泌抗猪伪狂犬病毒(鄂A株)单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 总被引：5，自引：1，他引：4
将本室分离鉴定的猪伪狂犬病毒（Ｐｒｖ）鄂Ａ株纯化后免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,取免疫鼠脾细胞与经８氮鸟嘌呤（８－ＡＧ）驯化的ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合。经间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）筛选,挑选强阳性孔进行亚克隆,获得５株能稳定分泌伪狂犬病毒单克隆抗体（Ｐｒｖ－ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株,分别命名为４１８、４８３、５７６、６０３、７４４。经体外连续传代及反复冻存、复苏,杂交瘤细胞均能稳体地分泌ＭｃＡｂ。培养上清液及小鼠腹水ＥＬＩＳＡ效价分别为２－５～２－７和１０－５～１０－１０。各株分泌的ＭｃＡｂ不与疱疹病毒科中的ＤＰＶ、ＩＬＴＶ、ＩＢＲＶ及ＰＰＶ发生交叉反应。阻断试验结果显示阻断率均大于５０％。其中６０３、７４４分泌的ＭｃＡｂ对用ＰＲＶ致敏的乳胶具有凝集特性。相加ＥＬＩＳＡ测定证实６０３、４８３、７４４特异性作用同一抗原位点或作用相关极为密切的抗原位点,另４种ＭｃＡｂ作用位点有部分相关性。 相似文献
87.
88.
参考GenBank中单核细胞增多性李斯特菌（LM）第I毒力岛（LIPI-1）有关基因序列设计引物,分段扩增、克隆了分离菌株XFL0605LIPI-1毒力岛全基因序列,序列全长8 558 bp,包括完整的prfA、plcA、hly、mpl、actA和plcB6个基因。对LIPI-1编码的6个毒力基因进行序列分析,各毒力基因反映的进化关系不尽一致,表明李斯特菌株在获得外源性毒力基因方面具有不同步性,各毒力基因来源也不尽相同。应用相应软件对各毒力基因编码蛋白的信号肽、跨膜区进行预测,确定了基因序列中调控蛋白PrfA结合区核苷酸序列。分析并确认了hlyA基因及推导氨基酸序列PEST基序和C端保守11肽序列。研究还发现LM菌株XFL0605actA基因编码604个氨基酸,缺失了105 bp富脯氨酸重复片段编码碱基,只有2个E/DFPPPPXD/E重复序列。 相似文献
89.
由于我国的养殖模式仍然较为落后，生物安全防控体系也很不健全，给病毒的传播留下了隐患，因此猪场中的病毒病依然潜藏在表面看似健康的猪群之中，一旦形成应激或环境因素的改变，都会引发疲病的流行，对于猪群病毒病的防控，我们势在必行。在当前众多的病毒病当中，圆环病毒病由于存在对猪体的免疫抑制作用而首当其冲；其次是母猪繁殖障碍疾病给养殖户造成了巨大的经济损失，也名列榜单之中；最后，在近两年来流行范围广泛，且严重影响仔猪成活率的猪病毒性腹泻病也成为了我们关注的焦点。 相似文献
90.
一、常见的腹泻病病因1.气候因素(诱因)。主要是温度,据报道,我国2011年至2012年的冬季平均气温创27年来最低。2.细菌性腹泻。大肠杆菌可引起黄白痢;沙门氏菌可导致慢性型副伤寒;魏氏梭菌导致红痢;痢疾密螺旋体引起血痢;胞内劳森氏菌引发增生性回肠炎。3.病毒性腹泻。主要是传染性胃肠炎病毒、流行性腹泻病毒、轮状病毒、猪圆环病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征等。4.寄生虫因素。主要是球虫病。 相似文献