应用生物反应器培养ST细胞制备猪传染性胃肠炎病毒     

何锡忠  李春华  潘洁  张婉华  彭丽英  倪建平  张春玲  蒋凤英  徐伟林 《国外畜牧学(猪与禽)》2014,(6):48-50

通过生物反应器制备猪传染性胃肠炎病毒(TGEV),研究了感染复数(MOI)、微载体浓度、病毒感染时间(TOI)和病毒维持液对病毒效价的影响,结果表明,分别以1:500稀释种毒(8.0 LgTCID50/mL)后接种、接种72 h的ST细胞、5 mg/mL微载体浓度和维持液低糖DMEM+0.2%水解乳蛋白(LH)的参数培养方式效果最为理想。  相似文献   

猪轮状病毒感染和防治   总被引：1，自引：0，他引：1  

邹勇  唐永兰  苏万国  何锡忠  钱永清 《上海畜牧兽医通讯》2003,(1):30-31

轮状病毒是幼儿和多种新生动物重要的肠道病毒 ,为人兽共患病。我国猪轮状病毒感染极为普遍 ,几乎所有猪场的母猪血清中都可以查到猪轮状病毒抗体的存在。近年以来 ,由于蓝耳病等破坏免疫系统疾病的广为流行 ,使本来在猪病中不突出的疾病严重了起来 ,猪轮状病毒感染导致仔猪的死亡越来越多 ,就是突出的表现之一。1　病原在电镜下观察猪轮状病毒 ,病毒粒子没有被膜 ,呈清晰的车轮状 ,大小为 75ｎｍ左右。病毒对温度、ｐＨ和一般消毒药有抵抗力。在粪便中的病毒在常温下可保持 7～ 9个月 ,在清空的猪厩内也可存活 3个月。2　流行病学和临床症…  相似文献   

两株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒与猪霍乱沙门氏菌的分离及人工共感染猪的致病性试验     

张春玲  邹勇  周宗清  张婉华  李春华  蒋凤英  彭丽英  何锡忠  朱永军 《中国预防兽医学报》2013,35(7)

为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与细菌混合感染的情况,本研究采用RT-PCR方法对不同猪场采集的样品进行PRRSV检测,并进一步对PRRSV阳性样品进行细菌培养分离,经BIOLOG细菌鉴定仪鉴定,分离培养的细菌为猪霍乱沙门氏菌(S.cholersuis).利用分离获得的2株PRRSV和一株S.cholersuis进行动物回归试验,结果表明所有人工感染猪在感染后的第5d出现病毒血症;2份PRRSV分离株单独人工感染的发病率均为100％,死亡率分别为55.6％和100％;PRRSV与S.cholersuis共感染的动物死亡率均为100％.与单独的PRRSV感染组相比,PRRSV与S.cholersuis共感染后实验动物的发病和死亡时间大大缩短,进一步表明其混合感染具有协同致病性,导致发病率和死亡率的上升.  相似文献   

猪伪狂犬病毒gE基因缺失毒株的构建及其免疫原性的研究     

林鸷  何锡忠  李本强  潘洁  朱永军  赵本进  彭丽英 《上海农业学报》2018,(4)

通过CRISPER/Cas9编辑技术编辑实验室分离得到的PRV-SX株的gE基因,并利用蚀斑纯化等方法得到gE基因缺失的突变株。通过T7E1核酸内切酶及测序来鉴定gE基因的缺失,并对gE基因缺失毒株的免疫效果进行了研究。结果表明:应用CRISPER/Cas9编辑技术成功得到了gE基因缺失毒株,用这一毒株制备疫苗免疫仔猪,免疫后0 d、14 d、28 d、42 d、56 d PRV gE抗体均为阴性;PRV gB抗体呈阳性,在42 d时达高峰。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征GP5蛋白和N蛋白在大肠杆菌中的优化表达和纯化     

张春玲  张婉华  李春华  蒋凤英  周宗清  何锡忠  朱永军  苏万国  邹勇 《上海农业学报》2010,26(3)

采用不同的培养基、诱导温度、诱导时间、IPTG诱导剂浓度以及诱导菌浓度等大肠杆菌表达条件,进行了融合蛋白HIS-GP5和HIS-N的优化表达和纯化研究.结果表明:重组质粒转化菌E.coli BL21(DE3)在含0.3 mmol/L IPTG的TB培养基中,20℃诱导表达14 h时融合蛋白表达量最高,经纯化得到了HIS-GP5和HIS-N融合蛋白.SDS-PAGE电泳分析表明,纯化的蛋白纯度大于95%.  相似文献   

猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎和猪轮状病毒三联苗免疫试验   总被引：10，自引：0，他引：10  

邹勇  许宝华  钱永清  唐永兰  苏万国  何锡忠  周艺萍 《江西农业大学学报》2005,27(1):107-109

本研究采用猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和轮状病毒细胞培养物制备了三联灭活疫苗,实验室免疫结果表明,肉猪和妊娠母猪免疫后15d达到较高的免疫水平,免疫有效期超过6个月。妊娠母猪所产仔猪可获得高水平的被动免疫保护。试验场应用结果表明母猪保护率达98％,仔猪被动免疫保护达93％。  相似文献   

TGEV细胞培养物超速离心与RT-PCR扩增的研究     

蒋凤英  何锡忠  王英  李春华  钱永清  邹勇 《动物医学进展》2007,28(4):50-52

研究猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)细胞培养物的超速离心及鉴定方法.将TGEV的细胞培养物用饱和硫酸氨法浓缩后,用200 g/kg～500 g/kg蔗糖密度梯度离心分装,测定蛋白浓度并取峰值管进行RT-PCR,并设立15、25、35三个不同循环参数测定PCR产物volume值.结果表明,在35个循环条件下第14号样品PCR产物的volume值最大,表明该样品病毒核酸的含量最大,由此推算病毒粒子主要集中在360 g/kg～380 g/kg蔗糖区带处,这与理论值相符,证明猪传染性胃肠炎病毒经密度区带离心后,利用PCR产物量确定目的病毒区带效果显著.  相似文献   

PEG-6000浓缩圆环病毒2型的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

何锡忠  王英  蒋凤英  周宗清  邹勇 《上海农业学报》2008,24(4)

研究了PEG-6000浓缩圆环病毒2型的工艺,对PEG-6000浓度、浓缩时间和NaCl浓度进行了优化,最终参数分别为8%2、h和1%,最终沉淀效果分析表明不仅病毒沉降完全,而且沉淀杂蛋白含量低。  相似文献   

猪传染性胃肠炎病毒纯化方法的选择与优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

蒋凤英  邹勇  何锡忠  李春华  张春玲  王英  许宝华 《江西农业学报》2010,22(8)

利用超速离心、饱和硫酸铵、聚乙二醇-6000(PEG-6000)对猪传染性胃肠炎细胞毒进行纯化,收集纯化病毒测定蛋白含量,分别运用PCR方法和作为ELISA包被抗原方法对纯化的效果进行检测,并对最佳纯化方法进行优化。3种纯化方法获得的蛋白浓度分别为1.875、6.435、0.763 mg/mL。PCR检测结果显示PEG-6000纯化后在上清液中未检出病毒,其余2种上清中均检出病毒。3种纯化方法制备的包被抗原ELISA试验阴阳性比值(P/N)分别为2.21、1.27、2.25,最终选择PEG-6000作为纯化病毒的方法,其最佳优化参数为PEG-6000浓度8%、浓缩时间2 h、NaCl浓度1%。研究表明利用PEG-6000纯化TGEV是一种经济实用、操作简单、并有较高纯化效率的方法,纯化后的TGEV为后续建立特异、敏感、快速的ELISA检测方法奠定了良好基础。  相似文献   

PPV_(S-1)A株保存期研究及免疫原性测定     

张婉华  朱永军  张春玲  何锡忠  彭丽英 《山西农业大学学报(自然科学版)》2014,(3):213-215

为了确保疫苗质量,保证生产用种毒的稳定性,将猪细小病毒PPVS-1A株的干毒和湿毒分别在-20℃和-70℃保存,每12个月取样一次,分别进行病毒含量测定、红细胞凝集价测定、乳鼠安全试验和豚鼠抗体检测。结果病毒含量均大于107.25;红细胞凝集价为1∶1024;乳鼠接种未见不良反应;豚鼠抗体检测HI均不低于1∶32。确定猪细小病毒PPVS-1A株湿毒在-20℃的保存期为24个月,在-70℃的保存期为48个月;猪细小病毒PPVS-1A株冻干毒在-20℃的保存期为36个月,在-70℃的保存期为60个月。猪细小病毒PPVS-1A株毒保存期长,具有良好的安全性和免疫效力。  相似文献