离心参数对猪卵母细胞早期去脂效果的影响     

刘凤娟  刘晋冀  李小兵  李思  潘伟荣  成文敏  贾宝瑜  赵红业  卿玉波  魏红江 《云南农业大学学报(自然科学版)》2018,(2)

【目的】卵母细胞脂肪含量较高是影响猪卵母细胞和胚胎冷冻效果不佳的主要原因,离心去脂可以提高冷冻成功率。本研究选用不同离心参数对猪卵母细胞进行离心去脂,通过研究其对卵母细胞早期去脂效果及其去脂后克隆胚胎的体内外发育和冷冻的影响,筛选最适离心参数。【方法】设定不同离心参数对猪卵母细胞进行早期去脂,利用体细胞克隆技术构建重构胚,通过离心后卵母细胞脂肪层的分离、重构胚的卵裂率和囊胚率、冷冻—解冻后的存活率以及代孕母猪妊娠等分析重构胚玻璃化冷冻前后体内外的发育效果。【结果】离心转数为10 000 r/min、离心时间为20 min时,卵母细胞的早期去脂效果最好。早期去脂重构胚的卵裂率和囊胚率分别是65.38%和13.46%;冷冻—解冻的2~4细胞、5~8细胞、9~16细胞的重构胚的存活率和囊胚率分别为49.09%、52.75%、78.57%和12.72%、2.20%、21.42%,而且冷冻胚胎移植到代孕母猪体内后成功妊娠。【结论】本研究证明了猪卵母细胞早期去脂可直接用于胚胎冷冻,最适离心参数为10 000 r/min×20 min。  相似文献   

澳洲鸵鸟的随机扩增多态DNA研究     

霍金龙  苗永旺  霍海龙  陈涛  伍革民  刘丽仙 《西南农业学报》2008,21(1):208-212

采用随机扩增多态性DNA标记技术对澳洲鸵鸟20个个体进行了遗传变异分析,从60个随机引物中筛选出17个多态性丰富的引物,并对其所有个体的总基因组DNA进行了PCR扩增,结果17条引物共产生103种扩增片段,其中共有片段13条,多态片段90条,平均每条引物的扩增带数为6．06,各引物多态性片段范围在2—9,多态频率在40％-100％。表明澳洲鸵鸟的遗传多样性较丰富。  相似文献   

版纳微型猪近交系新生猪成纤维细胞的体外培养及其生物学特征研究     

许成盛  魏红江  李红  汪霞  杨朝霞  卿玉波  潘伟荣  信吉阁  曾养志 《云南农业大学学报(自然科学版)》2011,5(3):323-328

 试验以版纳微型猪近交系新生猪耳部皮肤组织为材料,采用胰蛋白酶消化法培养成纤维细胞,并对其进行细胞形态观察、细胞冻存前和复苏后存活率测定、生长曲线绘制和染色体核型分析等生物学特征检测。结果表明：版纳微型猪近交系新生猪成纤维细胞呈典型的成纤维细胞形态;细胞冻存前和复苏后存活率分别为980%和9407%;生长曲线呈“S”型,倍增时间为33h;对所制备的染色体核型分析显示2n=38（XY）,并在体外培养14代后仍能保持正常核型。本研究建立了稳定的版纳微型猪近交系新生猪成纤维细胞的培养方法,将为体细胞克隆、转基因和异种器官移植等相关的研究提供技术基础  相似文献   

三个鸡品系遗传关系的RAPD分析^*   总被引：2，自引：0，他引：2  

霍金龙  苗永旺  李莲军  王荣平  叶朗惠  娄义洲  赵平  刘丽仙  潘伟荣  毕保良 《云南农业大学学报(自然科学版)》2006,21(2):222-227

 为了从分子水平上阐明快羽系、绿壳蛋系和合成系3个鸡品系之间的遗传差异及其遗传关系,为进一步开展这3个鸡品系的杂交配套利用提供依据,本文采用RAPD标记对3个品系的血样进行了群体遗传关系分析。实验共筛选出27条随机引物,对3个鸡品系的池DNA进行了RAPD分析。27条引物共产生235种扩增片段,扩增产物片段的长度大小在277~2441bp范围内。利用电泳分析数据分别计算了3个品系群体之间的遗传相似系数和遗传距离指数。结果表明:快羽系与绿壳蛋系间的遗传关系最近;而快羽系与合成系间的遗传关系最远。  相似文献   

微卫星标记技术在家禽遗传检测中的应用     

霍金龙苗永旺  刘丽仙潘伟荣 《中国禽业导刊》2005,22(6):37-37

自从微卫星被发现以来，就一直倍受遗传育种专家的重视，微卫星标记应用于家禽品种的基因组研究，具有十分诱人的前景。现已广泛地运用于家禽的遗传连锁图谱的构建、基因鉴定(基因诊断)、种群研究、数量性状基因座位(Quantitative Trait Locus，QTL)的定位、标记辅助选择以及系谱确证(亲子鉴定)等许多方面。  相似文献   

武定鸡绿壳蛋系的蛋品质分析^*     

刘丽仙  霍金龙  杨晓花  王关跃  王荣琼  苗永旺 《云南农业大学学报(自然科学版)》2007,22(4):551-554

 以武定鸡快羽系（产白壳蛋）作对照，对武定鸡绿壳蛋系进行了蛋品质分析。结果显示，绿壳蛋系的蛋重极显著低于快羽系（P<0.01），而蛋壳重极显著高于快羽系（P<0.01）；绿壳蛋系蛋的蛋壳厚度、蛋白高度、哈夫单位、蛋黄相对重以及蛋中蛋白质、脂肪、维生素D、维生素B1和镁、锌、磷、钙的含量显著高于快羽系（P<0.05）；其氨基酸总量以及天门冬氨酸、苏氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、精氨酸的含量也显著高于快羽系（P<0.05）。表明武定鸡绿壳蛋系具有很高的营养价值，蛋品质优良。  相似文献   

基于CAE技术的轮边减速器行星架结构强度分析     

潘伟荣 《农机使用与维修》2011,(4):35-37

传统的齿轮设计是根据齿轮所受到的齿根弯曲和齿面接触疲劳应力,计算得到齿轮的参数,这种设计方法时间长,工作量大。而现代设计重把优化设计算法和可靠性理论引入,可以利用计算机工具,寻求最佳设计参数。本文对传统设计方法设计的行星轮架应用Pro/E软件为一级行星架建立三维实体模型,并将该模型导入AN-SYS软件进行有限元分析,进行强度校核,参数优化,为设计减速器提供了新的思路和方法。  相似文献   

猪胎儿成纤维细胞和耳皮肤成纤维细胞培养方法的研究     

信吉阁  成文敏  潘伟荣  卿玉波  查星琴  富国文  魏红江  曾养志 《黑龙江畜牧兽医》2013,(9):1-4,180

为了研究猪胎儿成纤维细胞和耳皮肤成纤维细胞的分离培养体系,根据取样组织的不同,筛选出最佳的培养方法,试验以猪胎儿和耳皮肤为试验材料,用4种不同的培养分离方法,即胰酶热消化法、胰酶冷热结合消化法、胰酶室温消化法和组织块培养法,分离培养猪胎儿成纤维细胞和耳皮肤成纤维细胞,对比培养效果,筛选出最佳的培养方法。结果表明:胰酶室温消化法分离的猪胎儿成纤维细胞存活率显著高于胰酶热消化法和胰酶冷热结合消化法(P<0.05),细胞贴壁效果好,且操作简单;猪耳皮肤成纤维细胞原代培养中,胰酶热消化法和胰酶室温消化法分离的细胞数量少,组织块培养法所需的组织量少,且较胰酶冷热结合消化法操作简单。试验中培养的细胞呈典型的成纤维细胞形态,生长曲线呈"S"型,经冻存复苏后生长状态良好,说明胰酶室温消化法是猪胎儿成纤维细胞较好的培养方法,胰酶热消化法和胰酶室温消化法是猪耳皮肤成纤维细胞原代培养的理想培养方法。  相似文献   

微卫星DNA标记及其应用   总被引：5，自引：0，他引：5  

瞿陆峰  潘伟荣  曾养志 《畜牧与饲料科学》2010,31(4):6-8

微卫星DNA存在于大多数生物的基因组中,一般由1～6个核苷酸的串联重复片段构成,由于重复单位的重复次数在个体间呈高度变异性并且数量丰富,所以微卫星DNA标记的应用范围非常广泛。笔者就微卫星DNA标记在基因组连锁图构建、基因定位、QTL分析、标记辅助选择、杂种优势预测、亲缘关系鉴定、近交动物以及医学等方面的应用作逐一概述。  相似文献   

血管内皮生长因子（VEGF）实时荧光定量PCR质粒标准品的构建     

刘丽仙  霍金龙  李颖  赵跃  霍海龙  曾养志 《云南农业大学学报(自然科学版)》2011,5(3):328-334

 应用SYBR Green荧光染料检测方法构建VEGF基因质粒标准品,能快速、灵敏、可靠的检测与临床多种疾病密切相关的重要候选基因血管内皮生长因子（VEGF）的表达情况。本研究利用版纳微型猪近交系4~6月龄猪,提取皮肤创面总RNA,设计特异引物,进行RT PCR扩增。纯化目的片段并与pMD18 T载体连接,转化宿主菌DH5α,提取重组质粒DNA,并经酶切、PCR和测序鉴定,计算重组质粒原液拷贝数浓度并制备梯度浓度标准品,进行实时荧光定量PCR。建立的VEGF基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法特异性较好,检测灵敏度可达1.0×103拷贝,线性范围达1.0×103~1.0×108拷贝,阈值循环数(Ct)与PCR体系中起始模板量的对数值之间存在良好的线性关系(r2=0.982),扩增效率高(E=96.92％)。通过构建版纳微型猪近交系VEGF基因质粒标准品,为探讨VEGF基因在临床多种疾病中所发挥的分子机理奠定基础。  相似文献