鹅源新城疫病毒分子特征的研究进展     

路学华  葛鑫  刘怀然  闫丽辉  刘培欣  孔宪刚  冯新畅 《黑龙江畜牧兽医》2008,(4):23-24

以往新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)不能引起鹅发病,但从1997年起,我国陆续出现鹅源新城疫的报道.该病是由鹅源NDV引起的以消化道病变为主要特征的急性、烈性传染病.经形态结构、理化性质、生物学特性和血清学研究,该病毒属于副黏病毒科副黏病毒亚科禽腮腺炎病毒属.  相似文献   

鸡源性沙门氏菌临床分离株的耐药性分析   总被引：4，自引：0，他引：4  

刘芳萍  佟恒敏  李昌文  陈洪岩  刘怀然  关云涛 《中国兽医杂志》2007,43(1):31-32

氟喹诺酮类药物在临床上被广泛使用。病原微生物对大多数喹诺酮类药物的耐药率达10％以上，有的甚至达到40％～70％。很多资料表明，沙门氏菌对氟喹诺酮类药物的耐药现象也很严重，且耐药率呈逐年升高的趋势。本试验对来源于不同地区的样本进行分离、鉴定，经过筛选，得到9株对氟喹诺酮类药物耐药水平较高的鸡源性沙门氏菌，分析了它们对10种抗菌药物的敏感性，为研究和探讨沙门氏菌的耐药机制打下了基础。  相似文献   

昆虫细胞表达免出血症VP60蛋白间接ELISA方法建立及评价     

刘怀然  曲连东  刘家森  单安山 《东北农业大学学报》2010,41(8)

采用Bac-to-Bac系统表达的兔出血症病毒(RHDV)结构蛋白VP60作为包被抗原,建立抗体检测间接ELISA方法,并对方法性能进行测定。试验以整合有VP60基因的重组杆状病毒接种Sf9昆虫细胞,感染细胞经裂解、离心初步纯化,作为包被抗原建立了检测RHD抗体的间接ELISA方法。经过对反应条件和试剂的优化选择,初步组装成间接ELISA试剂盒,并对其整体性能进行了评价。结果表明,含重组VP60蛋白的Sf9细胞裂解液最适包被稀释度为1:2000,换算为纯化VP60蛋白含量约为1.7μg·mL-1;待检血清最适稀释度为1:100;羊抗兔IgGHRP标记抗体最适使用浓度为1:30000。初步组装的ELISA试剂盒检测RHD阴性血清无假阳性反应,与其他常见兔病阳性血清无交叉反应,特异性良好;敏感性高于RHDV全病毒间接ELISA和血凝抑制试验,低于进口间接ELISA试剂盒;试剂盒批内和批间变异率在10%以内。37℃加速破坏试验和4℃保存期试验结果表明试剂盒保存期可以稳定在6个月。该方法可应用于兔出血症抗体水平监测及实验兔等级检测中。  相似文献   

一株野鸭源基因Ⅲ型新城疫病毒主要生物学特性及基因组序列测定分析     

石跃  刘怀然  刘培欣  李东伟  杨煦  华育平  孔宪刚 《中国预防兽医学报》2011,33(5)

为研究分离自黑龙江三江自然保护区的野生绿头鸭粪拭子中的一株新城疫病毒(命名为Mallard/CH/HLJ383/06)主要生物学特性及基因组序列,本实验对病毒F基因序列进行测定,结果表明该病毒分离株属于NDV基因Ⅲ型,病毒的1日龄雏鸡脑内致病指数(ICPI)为1.81,高于NDV中等毒力病毒株ICPI值,预示该病毒分离株毒力有增强趋势.15日龄SPF鸡致病性试验表明,该病毒分离株可导致雏鸡发病但不死亡,致病性仍低于与其ICPI值相近的基因Ⅶ型毒株.对该病毒分离株进行全基因组序列分析表明:该病毒分离株与Ⅰ系疫苗病毒Mukteswar、江苏2株基因Ⅲ型分离株(JS/7/05/Ch,JS/9/05/Go)结构蛋白氨基酸同源性高达99.0%～99.7%;与疫苗株Mukteswar相比,3株基因Ⅲ型病毒分离株在F蛋白中只有1个共同的氨基酸位点变异(A203T);HN蛋白中存在15个变异氨基酸,但位置各不相同;L蛋白中变异位点最多,为28个,其中有4个变异位点为3个分离株所共有.以上结果初步表明,Mallard/CH/HLJ383/06株可能是由疫苗株Mukteswar在野禽、家禽生态系统中传播进化而来,并由于宿主或免疫压力而发生毒力变异;分离株L蛋白氨基酸位点的变异,可能是导致病毒株毒力返强主要因素之一.  相似文献   

2003年～2006年东北地区新城疫病毒部分分离株分子遗传学特征   总被引：2，自引：1，他引：1  

孙敏华  刘怀然  孔宪刚  刘培欣  刘胜旺 《中国预防兽医学报》2008,30(5):354-358

本研究从2003年-2006年我国东北地区收集的疑似新城疫病毒感染的鸡源病料中,分离鉴定出12株可在鸡胚成纤维细胞上产生病变的新城疫病毒,并对其进行了蚀斑纯化。应用RT-PCR方法扩增含病毒融合蛋白基因47nt～420nt片段,并进行序列测定及分析。结果表明,12株NDV分离株F蛋白裂解位点序列均为^112R-R-Q-K-R-F^117。重要中和位点、糖基化位点及半胱氨酸残基高度保守。与GenBank中30株NDV参考毒株F基因序列比较和分析后,发现12株NDV分离株均为基因VIId亚型毒株,为我国目前优势流行毒株;与不同地区及宿主来源的参考毒株比较的结果表明本次分离于东北地区的毒株没有明显宿主及地域特征。  相似文献   

新城疫疫苗的研究进展   总被引：2，自引：0，他引：2  

葛鑫  路学华  刘怀然  闫丽辉  刘培欣  孔宪刚  冯新畅 《黑龙江畜牧兽医》2008,(2):23-24

新城疫(Newcastle Disease, ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的一种能导致大多数禽类消化道、胃肠道和中枢神经系统损伤的急性、高度接触性传染病.ND是病毒类疾病,目前在世界范围内没有行之有效的治疗药物,因此控制并根除ND的唯一措施就是搞好疫苗接种工作.  相似文献   

NDV La Sota株三个病毒克隆株间生物学特性的比较研究     

张晓东  刘怀然  刘培欣  刘胜旺  孔宪刚 《中国预防兽医学报》2010,11(9)

为比较新城疫病毒(NDV)La Sota株不同克隆株之间的生物学特性,本研究通过挑取细胞病变区对LaSota株病毒进行纯化,并获得了3个病毒克隆株。通过血凝素热稳定性试验、病毒复制动力学试验和免疫原性试验,对3个病毒克隆株进行分析比较。结果显示,不同的病毒克隆株间在这些生物学特性上存在着不同程度的差异,表明为了获得性质均一、稳定的病毒,有必要进行病毒的纯化,并根据实验目的进行比较取舍。  相似文献   

兔出血症病毒VP60蛋白的原核表达及检测方法初步应用   总被引：1，自引：2，他引：1  

刘怀然  胡迎东  陈洪岩  张龄  李昌文  关云涛  曲连东 《中国预防兽医学报》2006,28(2):201-204

VP60是免出血症病毒（RHDV）的主要结构蛋白，也是免疫原性蛋白，与诱导抗病毒免疫反应直接相关，因而也是检测用首选抗原。本实验在原核系统pPRoEX^TMHTa中表达了VP60基因，经SDS—PAGE电泳中可见表达带。Western blot鉴定结果表明，重组蛋白可被RHD阳性血清特异性识别，具有相应的抗原性。将表达蛋白经SDS—PAGE电泳切胶纯化后免疫BALB／c小鼠，免疫血清经全病毒ELISA检测，效价可达1：3200-1：6400，经琼脂扩散试验检测效价为1：16。重组蛋白纯化、复性后，作为包被抗原初步建立了间接ELISA方法，并检测了48份免血清样品，与全病毒间接ELSIA试剂盒检测结果相同。实验结果表明．用原核系统表达的VP60蛋白．可以作为RHD新型诊断试剂的候选抗原。  相似文献