鸡传染性支气管炎病毒疫苗株和中国流行株鉴别诊断的研究   总被引：3，自引：1，他引：2  

刘思国  刘明春 《中国预防兽医学报》1999,21(3):161-163

根据国外已发表的ＩＢＶ核蛋白基因序列设计一对特异性引物，引物跨度为１５Ｋｂ，包括整个开放阅读框架。由于疫苗株Ｍ４１在核蛋白基因３′末端非编码区缺失近０２Ｋｂ的基因片段，因此ＲＴＰＣＲ扩增将得到１３Ｋｂ的基因产物。我们应用这对引物扩增９株ＩＢＶ的核蛋白基因，结果表明，除８株ＩＢＶ扩增出１５Ｋｂ的预计大小的基因产物外，疫苗株Ｍ４１则扩增出１３Ｋｂ的基因产物，与实际设计相符。经酶切分析、分子杂交及序列分析鉴定证实我们获得的ＰＣＲ产物为ＩＢＶ的核蛋白基因。  相似文献   

hLF转基因羊繁殖、遗传与表达稳定性     

乔娜  徐旭俊  刘思国  王学斌  俞慧清  童永星  陈建泉  成国祥 《中国农业科学》2012,45(13):2737-2742

【目的】分析转基因对人乳铁蛋白（human Lactoferrin,hLF）转基因羊繁殖性能的影响,及转基因在不同世代中的遗传与表达稳定性。【方法】应用自主研发的原代hLF转基因山羊（G0代公羊）建系,与普通奶山羊常规交配获得F1代;F1代公羊与F1、F2代母羊或普通奶山羊（N）交配获得F2代;F2代公羊与F2代母羊交配获得F3代。分别采用PCR和ELISA方法对其后代个体进行整合与表达鉴定;统计各世代不同配种方式所获得的后代数量、转基因整合率、母羊受胎率、羔羊异常率等繁殖性能数据。【结果】经过多个繁殖周期,各世代转基因羊受胎率、产羔率等繁殖性状均正常。获得F1代hLF羊19只,转基因整合率为24.7%（19/77）;F2代hLF羊86只,其中通过（F1♂×N♀）交配方式获得的是62只,转基因整合率为33.2%（62/187）;通过（F1♂×F1♀）交配方式获得hLF羊16只,转基因整合率为76.2%（16/21）;通过（F1♂×F2♀）交配方式获得hLF羊8只,转基因整合率为34.8%（8/23）;获得F3代hLF羊9只,转基因整合率为52.9%（9/17）。ELISA方法测定F1、F2、F3代羊泌乳20周乳汁中hLF的表达发现,hLF在转基因羊乳汁中稳定表达,3个世代hLF羊乳中的平均表达量分别为351.75、340.00和326.25 μg•mL-1。【结论】hLF基因的转入未对转基因羊群的繁殖性能产生显著影响,hLF基因能在山羊群体世代间稳定遗传和表达。  相似文献   

大肠杆菌“菌影”的制备     

彭玮  王聃  刘思国  常月红  王春来  刘慧芳  司薇  赫明雷  杜艳芬 《东北农学院学报》2009,40(6):85-88

通过PCR扩增噬菌体PhiX174的裂解基因E,将该基因连接到含有Ps／cI启动阻遏系统的pBV220载体中,从而使裂解基因E和启动阻遏系统λPI／PR—cI857串联成为温度敏感的裂解盒,构建溶菌质粒pBV—E。采用CaCl2法将其转入大肠杆菌BL21（DE3）,含有裂解质粒的大肠杆菌在28℃条件下生长到对数生长期,然后升温到42℃诱导其溶解,制成了大肠杆菌菌影。电镜观察发现菌影形态完整,内容物全部被释放到胞外。  相似文献   

鸡传染性支气管炎病毒SY毒株S1基因的RT-PCR扩增与克隆   总被引：2，自引：0，他引：2  

刘明春  江国托  刘思国  康丽娟  赵玉军  马兴元 《中国预防兽医学报》2000,(Z1)

利用 ＩＢＶ Ｓ１基因特异性寡聚核苷酸引物,经 ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增鸡传染性支气管炎病毒 ＳＹ毒株 Ｓ１基因,得到预期的１．７ｋｂ片段。并将扩增所得ｃＤＮＡ插入克隆质粒载体ｐＵＣ１９的ＥｃｏＲⅠ／ＢａｍＨⅠ酶切位点,在大肠杆菌ＤＨ_(5a)中实现目的基因的克隆,获得ＳＹ毒株Ｓ１基因重组质粒。  相似文献   

结核分枝杆菌rv0199基因在耻垢分枝杆菌中的表达及检测     

崔保亮  陈利苹  张娈娈  李华芳  刘思国 《中国畜牧兽医》2014,41(7):9-13

为研究结核分枝杆菌（M.tb）rv0199基因在该病原致病性中可能发挥的作用,本研究克隆了rv0199基因,在耻垢分枝杆菌（Ms）中异源表达,并对其表达进行检测。将大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV261进行改造,向载体中引入常用的6His和Strep Ⅱ重组蛋白标签,命名为pMV262。使用Ms/pMV262表达系统对rv0199基因进行超表达,用抗6His标签抗体和抗Strep Ⅱ标签抗体均能特异的检测到重组蛋白。本试验改造的pMV262穿梭表达载体可很方便的检测M.tb的基因在Ms中的异源表达,不用制备针对蛋白的多克隆抗体或单克隆抗体。构建的重组菌Ms/262-99为进一步研究rv0199基因的功能提供了材料,奠定了基础。  相似文献   

抗牛γ-干扰素特异性单克隆抗体的制备     

林靖凯  李广兴  赵海玲  杜艳芬  王春来  刘慧芳  司微  王聃  刘思国 《黑龙江畜牧兽医》2010,(1)

为了制备抗牛γ-干扰素(IFN-γ)的单克隆抗体(McAb),并对其部分生物学特性进行初步研究,试验用重组牛IFN-γ蛋白免疫小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术和间接ELISA方法进行试验.结果表明:共获得5株抗IFN-γ的单克隆抗体,Ig亚类鉴定均为IgGI,轻链为k链;经Weatern-blot试验证实5株McAb均能与IFN-γ发生特异性反应,而与其他蛋白不发生反应,特异性好;以5株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株制备腹水,效价均达到1:50 000以上.  相似文献   

禽源多杀性巴氏杆菌ompH基因序列分析     

吴洁  刘强  侯宇成  刘思国  康立超 《中国畜牧兽医》2010,37(10)

根据NCBI登录的序列(PMU50907)合成1对引物,用PCR方法扩增了郎德鹅多杀性巴氏杆菌ompH基因,预计扩增片段大小为1544 bp(ORF 1062 bp),但是分离菌实际测序片段大小为1537 bp(ORF 1056 bp)。结果分离株与参考株外膜蛋白的ORF存在6个碱基的缺失,蛋白质序列有变化。  相似文献   

产蛋鸡大肠杆菌病的诊治     

刘思国  陈虹 《上海畜牧兽医通讯》1995,(5):13-13

新疆石河子148团某个体养鸡户,笼养2568羽海兰商品蛋鸡,前期生长情况良好.6月龄时开始发病,到就诊时已发病7天,累计发病鸡126羽,累计死亡35羽,发病率为4.91%,致死率为27.78%.综合诊断为产蛋鸡大肠杆菌病,经合理用药,控制疫情.现报告如下.  相似文献   

DNA探针,粪检菌和ELISA三种方法在诊断副结核病中的比较研究     

刘思国  袁吉 《中国畜禽传染病》1997,(5):11-13

本研究已在构建的副结核分枝杆菌Ｃ２株ＤＮＡ基因文库的基础上升应用正，反向杂交试验从基因文库中筛出选出特异性片段ＰＴＰ３１，以光敏生物素标记制成ＤＮＡ探针。用此ＤＮＡ探针以及粪检菌和ＥＬＩＳＡ三种方法分别对３２份副结核菌素（ＰＰＤ）变态反应阳性牛粪便及相应血清样品进行检测，其检出率分别为４７％（１５／３２），５６％（１８／３２）和３４％（１１／３２），对随机采集的２７６份牛粪便及血清样品，３种方法的  相似文献   

Ⅱ系疫苗二次点眼引发新城疫     

刘思国  杨祎 《上海畜牧兽医通讯》1992,(4)

1991年5月27日对新疆石河子某鸡场的8800只10日龄依沙鸡,用鸡新城疫Ⅱ系疫苗点眼,共用12600羽份,接种后雏鸡生长良好.32日龄又用Ⅱ系苗点眼,共用9500羽份,次日早上隔离饲养的200只鸡发病,发病率100%,致死率96.5%.剖检病死鸡,见腺胃乳头出血,盲肠扁  相似文献