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对应用重组N蛋白抗原检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的ELISA诊断方法的主要成分(抗原包被板、酶标二抗、阳性血清、阴性血清)及组装成的试剂盒的保存条件进行了摸索。分别用5种方法时抗原包被板处理,结果表明用真空包装机抽真空后充入氮气法处理效果最好;酶标二抗在酶标抗体保存液中保存,能很好地保持ELISA测定结果的稳定性。时其他试剂盒组成成分的保存期分别测定后,组装成试剂盒,测定试剂盒的保存期为12个月。 相似文献
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参照猪附红细胞体16S rRNA基因序列设计了1对引物,分别以标准株和分离株的基因组DNA为模板,采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法检测猪附红细胞体,确定特异性产物的Tm值,同时做普通PCR。试验结果表明,特异性产物的Tm值为88.5℃,最低能检测到含0.036fg/μL阳性质粒的标准品。以阳性质粒标准品10倍倍比稀释的模板进行实时荧光定量PCR,通过对反应体系和反应条件进行筛选和优化,建立了检测猪附红细胞体的标准曲线。建立的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法显示了较好的特异性、敏感性和广谱性,为猪附红细胞体病的临床检测和流行情况调查提供了新的技术手段。 相似文献
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重组N蛋白抗原检测PRRSV抗体ELISA的研究Ⅰ.ELISA方法的初步建立及其标化 总被引:10,自引:6,他引:4
以纯化的重组N蛋白作为包被抗原,对各种务件进行优化(如抗原的包被,作用时间及底物的选择),建立了检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的间接ELISA方法。研究结果表明.重组抗原最适包被质量浓度为1mg/L,最适包被条件为4℃过夜.血清稀释度为1:40,待检血清和酶标二抗的反应时间分别为37℃ 30min和40min.底物用TMB溶液,37℃显色10min。本研究对ELISA板的蛋白稳定剂、血清稀释液的显色系统和终止液进行了研究。用全病毒进行的阻断试验结果表明.全病毒能够阻断阳性血清与包被重组N蛋白抗原的结合反应。用此方法对几种繁殖障碍性疾病的阳性血清进行检测.均为阴性.无交叉反应.表明建立的ELISA具有很好的特异性。板内和板间重复性试验结果为.同1份血清板内各孔的变异系数和板间各次的变异系数均小于7%.表明本方法的重复性好。 相似文献
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试验对2005~2006年从宁夏地区分离到的6株新城疫病毒进行遗传学特性研究,采用RT-PCR扩增了分离株F基因主要功能区片段并进行序列测定,序列分析表明6株分离株扩增片段的长度均为535bp,与预期扩增片段长度大小一致.裂解位点的氨基酸组成均为112R-R-Q-K-R-F117,具有强毒株的典型分子特征.通过构建新城疫病毒F基因的遗传进化树,表明6株宁夏分离株在分类地位上均属于基因Ⅶd亚型,与我国近年来新城疫病毒主要流行优势基因型一致,同时表明在宁夏地区至少有2个不同来源的毒株同时流行. 相似文献
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1.世界现状1.1对鸡致病力弱的病毒在第四届国际禽流感研讨会上,Alexander和Pearson对现有的家禽及其他鸟类禽流感的发生现状的有关报告做了综述,并与十年前的文献资料进行了比较。大量事实证明流感病毒最早存在于野鸟(特别是水禽),家禽感染则是... 相似文献
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由于去年夏季持续高温和干旱,肉鸡球虫病的发病机会大增,且有许多病例与新城疫并发。若单纯利用球虫药物治疗或按新城疫进行治疗,效果并不理想,所以有人认为是坏死性肠炎或弧肠孤病毒感染,实则不然,主要还是球虫病,或并发新城疫。二者并发时须免疫新城疫弱毒苗,同时用青霉素及其它球虫药几个疗程才能达到彻底治疗目的。
1 发病特点和临床表现
不同日龄鸡都会发病,在蛋鸡以育雏和育成鸡为主,产蛋鸡也有发病,且会造成一定死亡和产蛋下降。球虫卵囊多通过尘土随风传播,也通过蚊蝇、野鸟等携带传播。农村的养鸡场(户)中,网上平养和舍内清洁干燥的发病较轻,而地面散养、卫生条件较差的发病较重。发病日龄多在15~45日龄,12日龄内的雏鸡由于有母源抗体的保护,很少发病。病鸡表现贫血,鸡冠苍白,精神不振,羽毛蓬乱,采食减少,有的鸡有瘫痪和点头的神经症状,发病率达80%以上,死亡率一般为5%~20%。出现神经症状有三种可能原因:①并发新城疫后遗症所致;②球虫本身损害肠道,同时也伤害鸡的神经系统所致;③由于损害肠壁后维生素等营养成份不能充分吸收,致使出现维生素缺乏引起的神经症状。由于使用球虫药进行治疗,典型的盲肠球虫(柔嫩艾美耳球虫)较少见,而主要为小肠球虫,所以粪便多为胡萝卜色(桔红色)粘液状,而少有鲜红血便或深红色血便。使用国产或进口球虫疫苗的鸡场发病情况相对较轻或不发病。常用的克球粉、盐霉素、球痢灵、痢特灵、马杜拉霉素、地克珠利、百球清、球杀死等药物对本病的疗效都不太理想,因此有的人认为是别的什么病,但按坏死性肠炎和弧肠孤病毒感染治疗也无效。 相似文献
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从患大肠杆菌病的肉鸡脑和肝混合组织中分离到一株病毒-L株,该病毒的1日龄雏鸡脑内接种指数为1.15,对10日龄鸡胚最小致死量的平均死亡时间为54.2小时,与发病鸡场较常用的疫苗株相比,L株与其具有较明显的差异,但至多属于中等毒力的病毒。L株与其具有较明显的差异,但至多属于中等毒力的病毒。L株与大肠杆菌混合感染可引起大肠杆菌,非典型新城疫混合感染症状,如各脏器的纤维素性干酷样炎症病变,腺胃肠头出血, 相似文献
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传染性腺胃炎病原学研究进展 总被引:4,自引:0,他引:4
自1994年以来,我国十多个省市先后流行了一种以腺胃肿胀,腺胃乳头溃疡为特征的传染病。关于本病的病原众说纷纭,但大多数学者认为是由冠状病毒引起的,作者结合实验室工作,并综述国内外在有关类似症候的传染病后,认为:本病的主要病原应当是网状内皮增生症病毒,但冠状病毒,呼肠孤病毒也在本病的发生中起到重要的协同作用。根据本病的共同性的症状,将该病定名为传染性腺胃炎。 相似文献
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