PCR鉴定沙门氏菌血清分型方法的建立与应用     

赵建梅  李月华  宋传周  赵格  曲志娜 《中国动物检疫》2018,35(1):73-77

为建立快速有效、经济适用的沙门氏菌血清型鉴定方法,利用Primer Plex软件设计畜禽中常见沙门氏菌的菌体(O)抗原和鞭毛抗原(H)的引物,优化引物比例和退火温度等反应条件,建立沙门氏菌血清型鉴定的PCR法,并对46株沙门氏菌分离株进行血清型鉴定,同时与传统玻片凝集法和美国CDC的液相芯片(Luminex-x MAP)法进行比较。优化后获得了O抗原中B、C1、D和E1群的多重PCR引物,以及鞭毛抗原H1相抗原基因(fli C)和H2相抗原基因(flj B)的2对引物;建立了一套基于沙门氏菌O和H抗原的多重PCR血清型鉴定法;PCR法和Luminex-x MAP法鉴定出7种沙门氏菌血清型,传统玻片凝集法鉴定出6种血清型;PCR法与传统玻片凝集法和Luminex-x MAP鉴定结果的符合率均为95.65%。本研究建立的PCR沙门氏菌血清型鉴定法简便、快速,预期可在沙门氏菌的血清分型研究中发挥作用。  相似文献   

肉鸡屠宰加工过程中沙门菌污染定量风险评估   总被引：1，自引：0，他引：1  

赵格  刘娜  赵建梅  李月华  王娟  曲志娜  盖文燕  黄秀梅  王玉东  王君玮 《中国动物检疫》2018,35(4):26-31

为了构建肉鸡屠宰加工过程中沙门菌污染定量风险评估模型,分析鸡肉中沙门菌的消长变化规律,明确关键风险防控点,采用2015年部分肉鸡屠宰场沙门菌污染监测和调研数据,构建以烫煺后为评估过程起点,包括净膛、清洗预冷和分割传送的模块化过程风险评估模型,以不同分布描述各变量,并通过@RISK软件模拟运行。结果显示,通过构建的模型模拟屠宰加工后终端鸡肉产品中的沙门菌污染量,90%的可能分布在0~9MPN之间,而依据实际监测数据换算为5.3 MPN,说明模型可信。根据过程中各环节的模拟数据,分析了肉鸡携带的沙门菌消长变化,发现预冷后沙门菌污染总量明显下降,但分割传送后污染总量又有所回升。通过拟合的相关系数分析,明确了传送带上的沙门菌是影响终端鸡肉沙门菌污染的最关键风险点。本研究构建的肉鸡屠宰加工全过程沙门菌定量风险评估模型,可为肉鸡屠宰场沙门菌污染的卫生监管和风险管理提供理论依据。  相似文献   

应用液态悬浮芯片技术建立17种大肠杆菌耐药基因多重快速检测方法     

韩天飞  赵建梅  刘娜  张青青  王娟  张喜悦  刘俊辉  李月华  黄秀梅  王君玮  曲志娜  祁克宗 《中国动物检疫》2021,38(10):120-126

为建立一种快速、高通量的多重耐药基因检测方法,利用Luminex液态芯片平台,建立了可同时检测17种耐药基因的液态芯片检测方法。该方法对大肠杆菌常见的七大类抗菌药物所对应的17种耐药基因（blaSHV、blaCMY-1、Aph3-IIa-1、aac(6)-Ib-cr、aadA-1、cmlA-1、gyrA、mcr-1、NDM-1、parC、qnrS-1、sul-1、sul-2、sul-3、tetA、tetB、tetX）进行序列分析,随后依次对其设计多重PCR特异性引物,构建特异的阳性质粒作为阳性参比品进行液态芯片检测条件优化,从而进行多重耐药基因液态芯片检测方法的研发。结果显示：成功构建了17种耐药基因的阳性质粒,并建立了两套体系用于检测17种耐药基因。在特异性试验中,两套体系中的检测信号无干扰,具有较高的特异性数值;敏感性试验中,体系一的单一质粒最低检测量为102~104 copies/μL,混合质粒为103~105 copies/μL;体系二的单一质粒最低检测量为102~105 copies/μL,混合质粒为104~106 copies/μL;有效性试验中,液态芯片法与PCR检测结果的Kappa值多在0.60以上,具有高度一致性。结果表明,本研究建立的2套液态芯片检测体系具有高通量、高灵敏和高特异性的优点,可同时对17种耐药基因进行检测,能够达到快速检测的目的。  相似文献   

畜产品中盐酸克伦特罗残留的风险评估   总被引：2，自引：1，他引：2  

古艳丽  曲志娜  郑增忍  陈德坤  路平  刘爽 《畜牧与兽医》2006,38(2):35-38

为了提高我国畜产品的质量,严禁盐酸克伦特罗在畜牧业生产中的应用,本文从危害识别、危害描述、暴露评估、风险描述等方面对盐酸克伦特罗进行了风险评估;并根据我国目前盐酸克伦特罗的使用情况和管理情况,提出了风险管理的建议,为管理部门制定管理措施提供依据。  相似文献   

气相色谱-质谱法测定猪肝中氯丙嗪残留的研究   总被引：7，自引：0，他引：7  

路平  曲志娜  谭维泉  郑增忍  蒋正军 《中国动物检疫》2006,23(7):30-31

气相色谱—质谱法(GC-MS)检测猪肝中氯丙嗪的残留量,试样中残留的氯丙嗪经乙酸乙酯提取,用正己烷和C18柱净化后,用氨化乙酸乙酯洗脱。采用EI电离源方式进行选择离子扫描(SIM),选择离子包括86,233,272,318。方法的检测限为1μg/kg(S/N>3),线性范围为1-200μg/kg,加标回收率为68.00%-92.10%,相对标准偏差(n=5)为5.92-9.35%。该法具有灵敏度高,实用性强和操作简单等优点。  相似文献   

青岛地区空肠弯曲菌的分离鉴定及Jej基因序列分析     

张维  盖文燕  王娟  王君玮  范红结  曲志娜  黄秀梅  翟海华 《河南农业科学》2014,43(7)

为调查青岛地区空肠弯曲菌(C.jejuni)的流行状况,采集青岛地区不同分离地点的鸡盲肠棉拭子及内容物98份,经分离鉴定得到23株C.jejuni,分离率达到23.47％.应用C.jejuni的马尿酸酶(Jej)基因作为分子标记,对分离到的23株C.jejuni分离株和4株C.jejuni上海分离株进行分析,并与8株已知的C.jejuni序列进行相似性比较,构建系统进化树,对其系统进化关系进行分析.结果表明,分离菌株及已知菌株均能扩增出774 bp的Jej基因片段,得到11个不同的序列,有11个核苷酸变异位点,变异率为0.13％～1.42％;基于Jej基因构建的进化树表明,分离株分为2个分支,其中4株分离株与C.J-NCTC11168和C.J-IA3902亲缘关系近,1株与C.J-RM1221、C.J-S3亲缘关系近,2株与上海分离株亲缘关系比较近;2株与C.J-81116、C.J-M1组成另外一个分支.  相似文献   

肉毒杆菌及肉毒毒素研究进展   总被引：1，自引：0，他引：1  

赵思俊  李雪莲  曹旭敏  王娟  王玉东  王君玮  曲志娜 《中国动物检疫》2013,30(8):36-39

肉毒杆菌是一种致命病菌,能引起肉毒中毒症。肉毒杆菌作为影响食品安全的一个重要风险因素,尤其是在新西兰恒天然公司部分产品受到肉毒杆菌污染事件发生后,肉毒杆菌及肉毒毒素受到了普遍关注。现就肉毒杆菌及肉毒毒素的生物学特性、中毒机制、诊断及治疗研究进展进行综述。  相似文献   

我国主要动物源性寄生虫病检测技术研究进展   总被引：2，自引：0，他引：2  

盖文燕/王君玮/王娟/曲志娜  黄秀梅  李玉清  洪军 《中国动物检疫》2013,30(12):15-18

  相似文献   

我国部分地区鸡、猪源沙门氏菌血清型与耐药性比较     

李月华  赵建梅  张青青  曲志娜 《中国动物检疫》2018,35(6):30-36

本研究将2012—2017年分离自山东等6省份的194株鸡源和89株猪源沙门氏菌进行了血清型鉴定和9大类13种药物的药敏试验。血清型鉴定结果显示:鸡源沙门氏菌血清型以肠炎(59.69%)、婴儿(13.61%)和鸡白痢(8.90%)为主,猪源沙门氏菌血清型以鼠伤寒(58.43%)、肠炎(12.36%)、印第安纳(11.24%)和德尔卑(7.87%)为主,两者优势血清型差异极显著(P0.01)。最小抑菌浓度(MIC)分布结果显示:沙门氏菌对氨苄西林、头孢噻呋、庆大霉素、大观霉素、四环素、多西环素、氟苯尼考、磺胺甲基异噁唑、复方新诺明、恩诺沙星和氧氟沙星耐药的问题较为突出,对黏菌素E的耐药率相对较低;猪源菌株比鸡源菌株耐药严重,对11种药物的耐药率均高于鸡源菌株。2种来源的分离菌株对阿莫西林/克拉维酸钾、头孢噻呋、庆大霉素、大观霉素、四环素、多西环素、氟苯尼考、恩诺沙星、氧氟沙星的耐药率差异均极显著(P0.01),对黏菌素E的耐药率差异显著(P0.05);猪源分离菌株的耐药问题较欧盟国家突出,与鸡源菌株5耐以上的菌株比例差异极显著(P0.01)。肠炎和鼠伤寒沙门氏菌对阿莫西林/克拉维酸、庆大霉素、大观霉素、四环素、氟苯尼考、磺胺异噁唑和黏菌素E的耐药率差异极显著(P0.01),对氨苄西林耐药率差异显著(P0.05)。不同年份间沙门氏菌分离株对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢噻呋、庆大霉素、大观霉素、四环素、氟苯尼考、复方新诺明、恩诺沙星和黏菌素E的耐药率差异极显著(P0.01),对多西环素和氧氟沙星耐药率差异显著(P0.05)。结果表明:肠炎、鼠伤寒分别是我国部分地区鸡、猪源沙门氏菌的优势血清型;沙门氏菌耐药性与动物来源、血清型和分离年份相关,且鸡、猪源沙门氏菌耐药情况比欧盟国家严重。  相似文献   

病毒性呼吸道传染病的研究进展     

曲志娜等 Alex.  DJ 《山东家禽》1998,(5):35-37

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