猪源冠状病毒ORF3和ORF7的克隆及特性分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

李建强  柳纪省  程杰  兰喜  胡永浩  吴润  殷相平  李宝玉 《甘肃农业大学学报》2007,42(6):1-7

参照GenBank中Purdue株全序列对TGEV(猪传染性胃肠炎病毒)TS株的ORF3和ORF7各设计1对特异性引物,经RT-PCR扩增分别获得了1 487 bp和516 bp大小的两个片段,与预期结果大小相符.TS株与CHV株、Puedue株、BW021898B株和KT2株的ORF3a核苷酸序列同源性分别为99.1%、93.0%、95.9%、94.4%,相应的氨基酸同源性分别为97.3%、87.8%、93.2%、91.8%,TS株与CHV株、Puedue株、BW021898B株和KT2株的ORF3b核苷酸序列同源性分别为99.5%、98.5%、97.0%、97.8%,相应氨基酸的同源性分别为98.4%、96.3%、94.3%、95.8%,而TS株与PRCVIA1894株的ORF3b核苷酸和氨基酸同源性分别为96.6%和93.9%.TS株ORF7没有发生缺失且和其他毒株有很高的同源性.结果表明:TGEV非结构蛋白高变区在ORF3a第192个碱基至终止密码子之间,TGEV和PRCV在编码ORF3b氨基酸的数量和RNA酶结合位点上有一定的差异.  相似文献   

经济动物的空肠弯曲菌带菌调查和细菌分离培养研究   总被引：8，自引：1，他引：8  

吴润  方永祥 《甘肃农业大学学报》1993,28(2):105-111

本文对伊沙褐蛋鸡、乌骨鸡、锦鸡、蓝马鸡及银黑狐等动物的空肠弯曲菌带菌率进行了调查,其结果分别为66.19％、13.33％、20％、10％和6.19％。同对对微需氧培养方法和培养时间、TTC琼脂平板、蛋鸡采样时机、样品运送以及增菌培养等一系列影响检出率的因素进行了研究。结果认为该菌微需氧培养时间以48小时为宜;TTC琼脂平板不宜做该菌的初次分离培养;产蛋前采样要比产蛋后采样的检出率高,差异极显著(P<0.01);样品运送时间、Cary-Blair运送培养基以及增菌培养等对检出率影响不显著(P>0.05),但同一样品的重复分离培养,明显提高了该菌的检出率。  相似文献   

原核表达牦牛朊蛋白的纯化及其活性测定     

伍志伟  吴润  刘湘涛  陈豪泰 《甘肃农业大学学报》2005,40(2):133-137

以原核表达的GST-BoPrP(23～242)融合蛋白为抗原,免疫BALB/C小鼠,制备抗牦牛朊蛋白的特异性抗血清。经Western blotting和间接ELISA鉴定,该抗血清可与牦牛重组成熟PrP(23～242)和牛脑组织提取物发生反应,蛋白酶K消化各抗原可消除免疫反应,但不与GST蛋白和E.coli BL21(DE3)的菌体蛋白发生反应,表明该抗血清为抗牦牛重组成熟PrP(23～242)的抗血清,其效价高达1∶12800,并能识别黄牛脑组织中的天然朊蛋白。原核表达的GST-BoPrP(23～242)融合蛋白能有效地刺激免疫动物产生PrP特异性抗体,所制备的抗血清可适用于天然朊蛋白的检测。  相似文献   

一种新型酵母菌制剂的耐受性分析     

梁红雁  蒲万霞  吴润 《广东农业科学》2015,42(3):110-114

为研究以一种新型活性酵母为主要成分的微生态制剂在模拟动物胃肠道环境下的耐受情况,运用直接计数法对酵母菌在一定时间内的生长曲线、pH值变化以及凝聚性进行测定,分析该活性酵母的生长特性,同时测定其在模拟胃肠道的酸性环境及高渗环境和不同温度环境中的活力.结果表明,该酵母具有耐受酸性pH2、胆盐浓度1％、盐浓度22％等特殊环境的能力,且可在水温64℃短时间内的情况下生长,同时在规定的耐受范围内有较高存活率且符合益生菌制剂在肠道发挥益生功能所需的菌含量,为其以后的临床应用及规模化生产提供理论依据.  相似文献   

猪圆环病毒同义密码子的使用模式及其影响因素     

牟一娇  吴润  王永录 《安徽农业科学》2013,41(1):149-151

[目的]揭示猪圆环病毒(PCV)基因组的进化特点和遗传多样性。[方法]通过计算PCV基因组的相对同义密码子使用频率(RSCU)、有效密码子数目(ENC)和核苷酸含量等指标,对PCV基因组的密码子使用模式进行了综合分析。[结果]PCV基因组具有较低的GC含量和低的密码子偏好性,不同基因型的PCV在密码子使用上具有显著差异,并且PCV与圆环病毒科中的其他病毒的密码子使用模式也存在差异。PCV与其宿主的密码子使用模式存在一定程度的相似性。此外,地理因素、蛋白质总的平均疏水性和芳香性等可能与PCV的密码子使用模式的形成有关。[结论]PCV基因组的密码子使用模式的形成是突变压力与自然选择相互作用的结果。该研究对阐明PCV的密码子使用规律以及分子进化过程提供了最新的信息。  相似文献   

小尾寒羊PRNP等位基因密码子136、154和171的多态性研究     

赵春林  吴润  李发弟  柳纪省  王川  王芳 《中国预防兽医学报》2010,32(1)

为研究小尾寒羊PRNP等位基因密码子多态性,本研究以绵羊全血基因组DNA为模版,通过PCR,扩增绵羊PRNP等位基因目的片段,并将其克隆于pMD-18T载体。经SSCP法筛选出阳性克隆后测序,确定各绵羊PRNP136位、154位和171位密码子等位基因型及频率分布。在104只绵羊中共检出15个PRNP136位、154位和171位密码子等位基因型,痒病易感基因型占优势(53.85%,56/104)。本研究证明,该绵羊群属于痒病易感/易发群体,一旦痒病传入具有罹患痒病的极大可能性。  相似文献   

宁夏部分地区副猪嗜血杆菌病的血清学调查     

白刚  贺英  赵萍  储岳峰  高鹏程  张念章  冯小明  郭晗  樊祜卿  吴润  逯忠新 《甘肃畜牧兽医》2010,40(4):3-6

为了了解宁夏部分地区副猪嗜血杆菌病感染情况,采用副猪嗜血杆菌间接血凝对宁夏4个不同地区猪场的403份血清样品进行了血清学调查,结果为该菌阳性检出102份,阳性检出率25.31%,该病的发生与季节,猪的日龄和地区有关,本研究表明宁夏部分地区副猪嗜血杆菌病存在不同程度的感染,统计结果为该地区防治本病提供理论依据。  相似文献   

兔出血症病毒感染性克隆的优化     

杨宗伟  张伟伟  陈宗  李传峰  吴润  刘光清 《甘肃农业大学学报》2011,46(3)

为避免细胞外转录步骤,使RHDV感染性克隆的转录和病毒拯救过程一步化,试验通过PCR反应在RHDV cDNA序列的5′端添加T7启动子核心序列,3′端添加具有自身切割功能的核酶核心序列.然后,将RHDV基因组的不同cDNA片段装配到pTVT转录载体中,构建了含有RHDV全长cDNA序列的重组质粒pTVT-RHDV.在转染能稳定表达T7RNA聚合酶的BHK细胞后,将收获的细胞培养物感染MA104细胞.分别用逆转录PCR、间接免疫荧光检测以及一步生长曲线等方法对拯救病毒进行了鉴定.结果表明,试验成功拯救出了RHDV,优化了RHDV感染性克隆的构建过程.  相似文献   

优良抑菌活性乳酸菌对玉米青贮及有氧暴露期微生物数量和pH的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

万学瑞  吴建平  雷赵民  何轶群  吴润 《草业学报》2016,25(4):204-211

为了探讨乳酸菌对全株玉米青贮及有氧暴露后青贮饲料中乳酸菌、好氧细菌、酵母菌和霉菌数量及其pH的影响,进一步筛选出可提高青贮饲料品质和有氧稳定性的乳酸菌接种剂,将实验室前期从甘肃各地玉米秸秆青贮饲料中分离筛选获得的5株产酸快、多且具有抑菌活性的优良乳酸菌分别添加全株玉米进行青贮,分析青贮过程和有氧暴露后青贮饲料中乳酸菌、好氧细菌、酵母菌和霉菌数量的动态变化及pH。结果显示,在青贮过程和有氧暴露后,分别添加肠膜明串珠菌肠膜亚种B1-7、戊糖片球菌B2-3、植物乳杆菌B3-1、屎肠球菌B5-2和发酵乳杆菌E2-3的各处理组乳酸菌总数均显著高于对照组,而好氧细菌、酵母菌和霉菌数量均显著低于对照组,pH亦低于对照组。其中B1-7和B5-2处理组在青贮初期乳酸菌总数最多,从青贮第7天开始到有氧暴露的30 d内,始终是B3-1处理组乳酸菌总数最多,好氧细菌、酵母菌和霉菌数量最少、pH最低。以上结果表明这5株乳酸菌具有提高青贮饲料品质和有氧稳定性的潜力,其中植物乳杆菌B3-1的效果最好。  相似文献   

鸡新城疫病毒感染不同细胞的病变特性研究   总被引：2，自引：1，他引：1  

豆艳丽  吴润  刘磊 《甘肃农业大学学报》2012,47(2):1-5,11

为了探讨鸡新城疫病毒(Newscastle disease virus,NDV)感染不同细胞的病变特性,选用NDV强、弱毒株感染鸡胚成纤维细胞(DF-1)、仓鼠肾细胞(BHK-21)和人宫颈癌细胞(HeLa).结果表明:NDV强毒株在DF-1、BHK-21、HeLa上均能增殖,在DF-1、BHK-21、HeLa上产生的细胞病变(cytopathic effect,CPE)以发生细胞融合和形成合胞体为主要特征,在DF-1上增殖速度较快,HA效价也高;NDV弱毒株含10μg/mL胰蛋白酶的DMEM培养基上,DF-1、BHK-21、HeLa可引起细胞变圆、脱落,没有典型的CPE,盲传15代CPE特征未发生改变,血球凝集(HA)效价较低.可见,NDV在其种属来源相同的DF-1中更适宜增殖,DF-1可用作NDV感染的最佳细胞模型.  相似文献