猪群中7种高发传染病多重PCR诊断方法的建立   总被引：4，自引：0，他引：4  

贺显晶  孙东波  周玉龙  林云成  韩旭  王越强  郭婷婷  武瑞 《畜牧与饲料科学》2010,31(9)

[目的]建立猪瘟、蓝耳病(又称猪繁殖与呼吸综合征)、圆环病毒2型感染、猪链球菌病、副猪嗜血杆菌病、猪多杀性巴氏杆菌感染和猪支原体感染7种猪病的多重PCR诊断方法.[方法]根据GenBank发表的核苷酸序列设计了分别针对猪瘟、蓝耳病、圆环病毒2型感染、猪链球菌病、副猪嗜血杆菌病、猪多杀性巴氏杆菌感染和猪支原体感染的2套多重PCR特异性引物,优化多重PCR反应条件后进行敏感性与特异性评价.[结果]建立的2套多重PCR诊断方法对其他常见猪病痛原的基因组无特异性扩增,检测病原基因组最低浓度可达到pg级.[结论]该研究建立的2套多重PCR诊断方法可以用于猪群中上述7种猪病痛原的单一感染或混合感染的鉴别诊断.  相似文献   

抗牛边缘无浆体MSP5单克隆抗体的制备   总被引：1，自引：1，他引：1  

倪宏波  姜海芳  周玉龙  王春仁  辛九庆  宫大庆  钱爱东 《中国预防兽医学报》2009,31(10)

为制备抗牛边缘无浆体膜表面蛋白(MSP5)单克隆抗体(MAb),以原核表达的重组MSP5蛋白(rMSP5)免疫BALB/c鼠,应用常规杂交瘤技术获得2株能稳定分泌特异性MAb的杂交瘤细胞株(1D8和2F3).间接ELISA检测腹水效价分别为5.49×105和7.83×104,亚类鉴定其重链为分别为IgG2b和1gG2a,轻链均为K型;ELISA叠加试验表明这2株MAb识别的抗原位点相同或相近;Western blot结果显示2株MAb均能与rMSP5发生反应.特异性抗MSP5的MAb的获得,为牛边缘无浆体检测奠定了基础.  相似文献   

牛冠状病毒S基因的序列分析及原核表达     

高国强  王梦心  刘明明  于仁冬  侯喜林  周玉龙  武瑞  张国华  刘琳珊  任德强 《中国畜牧兽医》2018,45(7):1740-1749

为了解牛冠状病毒（bovine coronavirus,BCoV）的S基因变异情况并建立ELISA检测方法,本研究对采自不同牛场的新生犊牛腹泻（CD）和成年牛冬痢（WD）腹泻样本提取总RNA,反转录合成cDNA,利用PCR扩增S全基因和S1基因。将S1基因目的片段连接表达载体pET-32a （+）,并转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,经PCR、双酶切及测序验证正确后,进行IPTG诱导表达。结果显示,CD与WD分离株S基因核苷酸为98.4%,CD和WD分离株与参考毒株BCoV-ENT株核苷酸同源性最高,分别为98.4%和98.5%,CD分离株与参考毒株SUN5株的同源性最低,为97.5%,WD分离株与FRA/EPI/Caen/2003/13同源性最低,为97.3%。通过比对可知,分离株与已知毒株之间存在较大差异,为疫苗候选毒株筛选提供依据。本试验同时构建了pET-32a-S1表达载体,在0.2 mmol/L IPTG诱导5 h时,重组菌能在大肠杆菌BL21感受态细胞中产生大量的S1融合蛋白,获得约58 ku表达产物。本试验成功表达了S1蛋白,并对BCoV进行了核苷酸进化分析,为疫苗免疫效果评价方法的建立奠定了基础。  相似文献   

灰色关联度法在烟叶化学成分综合评价中的应用     

邓君  ;曹建昌  ;周玉龙 《作物研究》2014,(5):509-512

以云南省文山烟区3个主栽品种K326、云烟87和KRK26的烟叶主要化学成分为分析数据,应用灰色关联度法对烟叶主要化学成分进行综合评价.结果表明,加权关联度法的结果比等权关联度法的结果更接近实际,权重对于灰色关联度法在烟叶化学成分综合评价中有重要作用,加权灰色关联度分析法可应用于烟叶主要化学成分综合评价.  相似文献   

不同品种烟叶化学成分的DTOPSIS综合评价     

朱德斌  ;蒋福昌  ;张四伟  ;周玉龙 《湖南农业科学》2014,(6):8-10

以云南省文山烟区3个烤烟品种K326、KRK26和云烟87的烟叶主要化学成分为分析数据,应用DTOPSIS法对烟叶主要化学成分进行综合评价。结果表明：K326和KRK26两个品种的C3F等级烟叶主要化学成分综合评价最高,与实际情况基本一致。这说明DTOPSIS法对烟叶主要化学成分综合评价的结果可靠。  相似文献   

猪产气荚膜梭菌的分离鉴定     

王国良  夏成  周玉龙  吴凌 《甘肃畜牧兽医》2009,39(3):5-7

产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）是一种革兰氏阳性梭状杆菌,能产生芽孢,并能形成特殊荚膜的专性厌氧菌。在自然界中广泛分布,可见于土壤、污水、饲料、粪便以及人畜胃肠道内,是一种条件性致病菌。该菌至少可以产生15种以上的毒素,能对人和多种动物致病,  相似文献   

早春拱棚马铃薯栽培技术     

周玉龙  秦国华 《油气储运》2000,(1):23-24

  相似文献   

奶牛无浆体病PCR诊断及msp5基因序列分析     

邵红  李春龙  周玉龙  李娜  侯喜林  朴范泽 《畜牧与兽医》2008,40(4):73-76

本研究应用PCR方法鉴定出1例无浆体病牛,将扩增的DNA片段进行克隆测序鉴定并进行同源性分析。结果发现目的基因与边缘无浆体(Anaplsma marginale)LZ株和HN株msp5基因的同源性是100%,进而证实黑龙江分离株与兰州株边缘无浆体msp5基因序列高度同源。  相似文献   

2010年黑龙江猪高热病流行病学调查     

周玉龙  杨世大  李志强  詹天龙  倪宏波  朱战波  侯喜林  朴范泽 《中国兽医杂志》2011,47(11)

2010年黑龙江省多个地区暴发猪“高热病”,为明确其病因及流行特征,对来自大庆市、齐齐哈尔市、佳木斯市,绥化市等地区送检的43例病例(70头病死猪),应用病原学、血清学和PCR方法进行诊断,对确诊的病例进行流行病学回顾性研究.结果表明,小养殖户或小型猪场发病率较高,发病高峰期集中在9～12月份,发病日龄集中在1～3月龄仔猪(54.16％);病死猪以败血症为主,43例病例中猪链球菌病23例( 53.49％),猪瘟8例(18.60％),副猪嗜血杆菌病8例(18.60％),猪繁殖与呼吸综合征6例(13.95％),圆环病毒病4例(9.30％),混合感染发病率高达58.13％.以上结果表明,猪“高热病”病因复杂多样,防制工作任重而道远.  相似文献   

牛呼吸道综合症多重PCR检测方法的建立     

周玉龙  吴丹丹  周金玲  朴范泽 《黑龙江八一农垦大学学报》2016,(6)

为了建立针对BRDC常见的主要病原牛黏膜病病毒(BVDV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)和牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)的一步法多重RTPCR,引入了新型的具有反转录酶和DNA聚合酶活性的r Tth DNA聚合酶,通过对退火温度和引物浓度的优化,敏感性和特异性的检测,最终确定最佳退火温度为54.5℃,最佳引物浓度为0.6 u M。对BPIV-3、BRSV和BVDV的最小检测量分别为162、16和21个TCID50/0.1 m L。与牛传染性鼻气管炎病毒、冠状病毒、腺病毒,以及多杀性巴氏杆菌、肺炎链球菌、化脓隐秘杆菌、溶血性曼氏杆菌等没有交叉反应。建立起的m RT-PCR检测方法可用于鼻腔分泌物的检测,为进一步m RT-PCR试剂盒的组装奠定了基础。  相似文献