表达外源基因的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性克隆的构建及病毒拯救     

徐彦召  周艳君  童武  李玲  姜一峰  童光志 《农业生物技术学报》2012,20(5):473-480

为建立表达标记基因的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)反向遗传操作平台,本研究在PRRSV HuN4-F112疫苗株感染性分子克隆的基础上,采用突变PCR技术将新城疫病毒(NDV)NP蛋白末端优势抗原区插入PRRSV NSP2蛋白的复制非必须区,经基因片段的克隆、拼接,构建了含有外源标记基因的感染性的PRRSV cDNA克隆psk-HuN4-F112-Δ52+NP49。用限制性内切酶SwaΙ将psk-HuN4-F112-Δ52+NP49线性化后通过细胞外转录获得病毒RNA,用脂质体法将病毒RNA转染叙利亚仓鼠肾细胞(BHK-21)包装出病毒粒子,再转接到猴胚胎肾上皮细胞(MACR-145)传代拯救病毒。对拯救的病毒进行RT-PCR扩增、酶切和序列分析鉴定。结果表明,拯救病毒含有不同于亲本病毒的分子标记(病毒基因组14667位人工产生的MluⅠ酶切位点)和插入的标记基因序列。间接免疫荧光试验表明,外源基因NP49在拯救的PRRSV中表达,且能够在PRRSV传代过程中稳定遗传。病毒生长特性比较显示,拯救病毒与亲本病毒在MARC-145细胞上具有相似的增殖特性。本研究构建了含有标记基因PRRSV的感染性克隆并获得了拯救病毒,为进一步开发新型PRRS疫苗提供了有效的反向遗传操作平台。  相似文献   

分离缓冲液对水稻细胞核悬液DNA分辨率效应的比较   总被引：3，自引：0，他引：3  

金亮  张宪银  薛庆中 《浙江农业学报》2007,19(2):93-96

为制备高纯度水稻细胞核悬液供FACSCalibur流式细胞仪使用,选用6种细胞核分离缓冲液制备样品,对其DNA分辨率效果进行比较,Otto buffers和Marie’s nuclearisolation buffer表现分辨率较高,细胞G0/1峰产生的变异系数较低(CV分别为3.57%和3.41%);其中Otto buffers的组分较Marie’s nuclear isolation buffer简单、成本低,且能在正常室温条件下分析和保存。虽然在细胞核悬液中Tris-MgCl2buffer显示最低的CV值(3.19%),但产生较多的背景碎片。而其余3种缓冲液(Lysis buffer LB01,Galbraith’s buffer和Arumuganathan’sbuffer)的变异系数均较高(分别为4.75%,6.28%和6.73%)。结果表明采用Otto buffers分离缓冲液制备细胞核悬浮液,能实现苗期对水稻花粉植株的不同倍性(单倍体、二倍体、三倍体等)快速鉴定。  相似文献   

我国高致病性猪蓝耳病病毒的演化分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

安同庆  田志军  李冉  彭金美  周艳君  华育平  刘娣  童光志 《中国兽医杂志》2011,47(4)

自2006年以来,我国大面积暴发高致病性猪蓝耳病,但目前对其病原HP-PRRSV的起源还不得而知.本试验通过对多株HP-PRRSV进行全长基因组分析,发现HP-PRRSV中存在4处缺失,而且这4处缺失是逐步形成的,在中间过渡类型的毒株中存在着缺失1处、2处、3处的毒株.此外,中间过渡类型毒株中的一些氨基酸基序也是逐步变化的.本试验初步阐明了我国HP-PRRSV的起源是CH-1a-1ike PRRSV,在中间过渡的毒株中能够发现逐步演变的轨迹.  相似文献   

安徽原卫生厅女副厅长以色谋权内幕曝光     

刘卓  童光 《农村．农业．农民》2006,(9):14-16

  相似文献   

微胚乳超高油玉米子粒含油率的配合力研究   总被引：8，自引：5，他引：8  

奉志高  吴子恺  谭贤杰  赵刚  王兵伟 《玉米科学》2006,14(4):007-009

按Griffing方法4,用6个微胚乳超高油玉米自交系配制15个组合,研究微胚乳超高油玉米子粒含油率的配合力。结果表明:子粒含油率高的双亲在组配时有可能表现出超亲优势;子粒含油率的一般配合力(GCA)在各亲本间及特殊配合力(SCA)在各组合间均存在显著差异;子粒含油率的GCA效应与SCA效应之间无明显关系;以提高子粒含油率为育种目标,应选择具有较高子粒含油率和GCA效应值的自交系作亲本;子粒含油率有较高的遗传力,加性方差在遗传变异中起主要作用,子粒含油率宜在早代选择。  相似文献   

应用杆状病毒系统高效表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因   总被引：3，自引：0，他引：3  

周艳君  仇华吉  王云峰 《中国预防兽医学报》2000,22(4):278-280

将猪繁殖与呼吸综合征病毒CH_la株囊膜糖蛋白 (GP5 )基因定向亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHisB中 ,与杆状病毒线性DNA(Bac_N_BlueTMDNA)共转染昆虫细胞sf9,经过三轮蚀斑纯化后 ,获得重组杆状病毒rBac_GP5。用该重组病毒感染sf9细胞后 ,应用间接免疫荧光试验、SDS_PAGE和Westernblot检测表明 ,GP5基因在杆状病毒系统中获得了高效表达 ,表达产物因糖基化程度差异 ,表观分子量有 2 2、2 5和 30kDa三种总计约占细胞蛋白总量的 2 6 .4%。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征重组核衣壳蛋白(N)-ELISA诊断方法的建立与应用   总被引：2，自引：0，他引：2  

王云峰  周艳君  仇华吉  钱平  蔡雪晖  柴文君  童光志 《中国预防兽医学报》2000,(Z1)

将猪繁殖与呼吸综合征病毒国内分离株ＣＨ－ｌａ的核衣壳蛋白基因定向克隆到ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓＢ转移载体ＰＨ启动子下游,与苜蓿银蚊夜蛾多核型多角体病毒线性化ＤＮＡ共转染Ｓｆ９细胞。获得能隐定表达核衣壳蛋白（Ｎ 蛋白）的重组杆状病毒。利用昆虫杆状病毒表达系统表达的猪繁殖与呼吸综合征病毒重组Ｎ蛋白作为抗原,包被聚苯乙烯微量反应板,建立了猪繁殖与呼吸综合征重组Ｎ蛋白－ＥＬＩＳＡ诊断方法。试验证明,该方法对其他８种猪疫病阳性血清均无交叉反应,对标准阳性样品的检出率为１００％,具有敏感性高、特异性强的特点。  相似文献   

高效秸秆速腐剂在菏泽投产     

王清存  王志高 《农技服务》2000,(1):44-44

<正> 由中国农科院何策熙研究成功的一种高效秸秆速腐剂,最近在山东菏泽微生物制品厂投入生产。 该产品高效、无毒,具有升温快、腐熟快等特点。据测定,干秸秆18～20天就能腐熟。有机质达  相似文献   

稻蟹共作模式对池塘养殖尾水的净化效果研究     

孙静妤  李敏  呙金亮  李奎  石伟  邱文杰  管卫兵 《水产科学》2024,(3):363-371

为探究稻蟹共作模式对池塘养殖尾水的净化能力,在宁夏银川地区的大规模稻蟹共作-池塘养殖耦合系统中,稻田种植面积52 hm²,水产养殖面积20 hm²,采取田间试验、水质分析相结合的方法,分别对稻田进水口、出水口水体中的溶解氧、磷酸盐、亚硝态氮、氨氮等水环境指标进行分析。结果表明,2020年试验稻田出水口氨氮、磷酸盐、亚硝态氮的最高去除率分别为69.2%、14.0%、100%,2021年试验稻田出水口氨氮、亚硝态氮的最高去除率分别为25.1%、100%,2022年试验稻田出水口氨氮、磷酸盐、亚硝态氮的最高去除率分别为76.9%、74.4%、100%。试验结果显示,2022年稻田对池塘养殖尾水的净化效果最好。由此表明,稻蟹共作模式可以显著降低池塘养殖尾水中的氨氮、磷酸盐、亚硝态氮水平,具有较好的水质净化效果,对生态环境产生积极影响。  相似文献   

香椿贮藏保鲜技术的研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

段新梅  石金亮 《蔬菜》1999,(6):27-28

香椿馥郁芳香、甘美可口,且富含大量的维生素C和胡萝卜素,受到人民群众的喜爱,但因其食用的嫩芽部分易枯萎,不耐贮藏,受生产季节性的限制较大,迫切需要解决香椿贮藏保鲜的技术难题。为此,1999年我们采用了袋装、各种保鲜剂（自配）、恒温、气调贮藏（CA）等综合保?..  相似文献