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31.
禽流感病毒A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)NA基因的克隆及其重组禽痘病毒转移载体的构建 总被引:10,自引:1,他引:9
采用RT-PCR技术扩增了禽流感病毒A/Guangdong/3/96(H5N1)[GD3/96]神经氨酸酶(NA)基因,并将其克隆到pUC18质粒中进行测序。核苷酸序列测定结果为:NA基因全长为1410bp,共编码469个氨基酸,从pUCNA中切下NA基因片段,将其亚克隆到质粒pSY538的EcoR I位点,将带有痘苗病毒启动子P11的LacZ基因平端克隆到该质粒的Sma I位点,然后切下同位含有NA及LacZ基因的片段,再亚克隆到禽痘病毒载体pSY681的Not I位点,经限制性内切酶分析,PCR鉴定等,证明含有禽流感病毒NA基因的重组禽痘病毒转移载体已构建成功,从而为进一步筛选表达NA蛋白的重组禽痘病毒及探讨该蛋白的免疫原性鉴定了实验基础。 相似文献
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禽流感病毒NP cDNA反义逆转录病毒载体的构建及重组病毒的鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
根据反义RNA作用原理,以禽流感病毒(AIV)H14N5 cDNA全长及5’端235个bp为目的基因,反向插入反转录病毒载体 pLXSN中,命名为 pLXSN-NP及 pLXSN-NP,用脂质体包裹重组质粒转染包装细胞 PA317,G418筛选抗性克性,扩增单个克隆后提取包装细胞上清的病毒RNA(vRNA),以巢式PCR方法检测,以及用包装细胞上清(重组病毒)感染滴定细胞系NIH3T3,表明已筛选出产毒的的克隆细胞质,得到重组逆转录病毒,为反义RNA抑制禽流感病毒复制的实验研究奠定了物质基础。 相似文献
35.
禽流感病毒重组核蛋白在琼扩诊断中的应用 总被引:6,自引:0,他引:6
利用杆状病毒表达禽流感病毒型特异性抗原-核蛋白,并就重组核蛋白作为禽流感琼扩诊断抗原地特异性和敏感性及作为抗原的其它特性进行了研究,并与普通全病毒琼扩抗原进行了应用比较试验,对354份现地可疑血清样品进行了检测,结果表明:该抗原可以特异性地定性检测出所有15个禽流感病毒亚型的抗血清,与普通全病毒琼扩抗原的检测结果一致,但沉淀线更细密、清晰,保存方便;与我国广泛流行的15种禽类其它病原体的抗血清没有任何交叉反应,表明该重组核蛋白作为禽流感琼扩抗原特异、敏感、生物安全性更可靠和生产成本更低廉,有利于进一步扩大禽流感疫情调查范围和加大监测力度。 相似文献
36.
RT-PCR快速诊断禽流感 总被引:18,自引:0,他引:18
根据禽流感病毒NP基因的序列分析结果,设计了一对NP基因特异的引物。采用该对引物,不经病毒分离,直接从禽流感病毒感染鸡的气管、泄殖腔棉拭子和组织样品中提取核酸, RT~PCR可以扩增出 326bp的 NP基因片段。采用该技术对14个亚型禽流感病毒标准参考株,4个亚型12株国内分离野毒株,RT-PCR检测的结果都呈阳性;对新城疫病毒、传染性法氏囊病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒以及减蛋综合症病毒,RT-PCR扩增结果都呈阴性。禽流感病毒 A/Goose/Guangdong(H5N1)和 A/African Starling/England(H7N1)实验感染鸡样品 RT-PCR检测与鸡胚病毒分离阳性率分别为34/42、32/42; 24/55、24/55, 二者符合率大于95%。 RT-PCR最少可检测到10pg的病毒核酸。对山东某地发病鸡场样品进行RT-PCR检测,只用6个小时就可得出准确的诊断结果,证明RT-PCR检测方法敏感特异,可用于禽流感的快速诊断。 相似文献
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39.
H9N2禽流感病毒中国分离株血凝素基因序列的初步分析 总被引:6,自引:0,他引:6
10株中国H9N2禽流感病毒分离株的血凝素基因分析表明,这些分离株间的亲缘关系较近,推测它们可能来源于同一种系,H9亚型分离株的HA1亚单位系统发育分析表明中国AIV分离株与97香港禽类市场上分离到的毒株不同,中国分离株中在HA切割位点上均未见到典型的高致病力毒株H5、H7所具有的一系列碱性氨基酸,其排列均为-PARSSGLF-,系统发育分析表明该10株属欧亚种系。 相似文献
40.
中国H3亚型流感病毒生态学与分子进化的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
病毒生态学与分子进化是一门新兴的学科,研究病毒在各种环境中的关系,可以为今后病毒的研究与防治奠定基础。本研究首次详细对我国14株鸭、鸡等禽流感和马、猪等动物的流感病毒的生态学与分子进化进行了分析研究,初步摸清了这些病毒在我国的流行与进化情况,为今后流感病毒疫苗的应用奠定了理论基础,并为今后的H3或其它亚型流感病毒的研究与防制提供了理论基础。 相似文献