猪圆环病毒2型荧光定量PCR检测方法的建立   总被引：2，自引：4，他引：2  

张福良  宋长绪  杨鸣琦  朱道中  蒋智勇  林志雄  刘燕玲  宋志军 《中国兽医学报》2006,26(3):248-250

通过条件优化,以定量的10倍系列稀释质粒pMD-ORF2(含PCV2-ORF2全基因)为标准品,进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立了猪圆环病毒2型(PCV2)的荧光定量PCR检测方法。该方法检测灵敏度可达1.0×100拷贝/μL,线性范围为109~100,达10个数量级;对起始浓度为1.0×106、1.0×105、1.0×104拷贝/μL的标准品的最终实际测得值分别为1.000×106、0.935×105、0.987×104拷贝/μL,变异系数分别为2.527%、2.067%、2.092%。该方法的检测灵敏度与套式PCR(nPCR)相当,甚而高于常规PCR。  相似文献   

华南地区猪圆环病毒1型与2型感染情况调查及相互关系   总被引：1，自引：0，他引：1  

孙丽华  徐维加  刘燕玲  蒋智勇  郝永清  宋长绪  李旭阳 《猪业科学》2007,24(4):66-68

根据已发表的猪圆环病毒1型(PCV-1)与猪圆环病毒2型(PCV-2)的全基因组序列,设计4对特异性引物,用套式PCR方法对广东地区的规模养猪场或个体养殖户送检的144份猪血清进行了PCV-1与PCV-2病毒检测.结果显示PCV-1阳性血清21份,PCV-2阳性血清40份,PCV-1与PCV-2均为阳性的血清7份,PCV-1阳性率为14.6%,PCV-2阳性率为27.8%;PCV-1与PCV-2均为阳性的阳性率为4.9%,从数据上的比较可知PCV-2的感染率高于PCV-1的感染率.说明PCV-2感染比较普遍,患病猪群中也存在一定比例的PCV-1病毒感染.  相似文献   

腔上囊病病毒VP2基因重组腺病毒的构建     

宋长绪 黄忠李春玲  张春红 《中国兽医科技》2005,35(2):121-123

采用RT～PCR方法扩增腔上囊病病毒(IBDV)VP2基因，亚克隆到pAdlox转移载体，与野生型腺病毒φ5一起共转染Cre8细胞，将IBDVVP2基因在5型腺病毒中进行表达。结果，获得了含有腔上囊病病毒VP2基因的重组腺病毒Adv—VP2，感染重组腺病毒的细胞经Westernblotting检测，得到了1个约37ku的VP2多肽，而感染空载体病毒的细胞及对照细胞则无此蛋白条带。证实，成功构建了表达IBDVVP2基因的重组腺病毒。  相似文献   

猪圆环病毒2型抗体检测间接ELISA方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

丛丽媛  蒋智勇  张春红  陈德坤  宋长绪 《中国兽医学报》2008,28(8)

用纯化的重组猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2蛋白作为包被抗原,对各种条件进行优化(如抗原的包被、血清及酶标二抗作用时间、底物的选择等),建立了检测猪圆环病毒2型(PCV2)抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)的方法。结果显示,重组抗原最适包被浓度为0.5mg/L,最适包被条件为4℃过夜,血清稀释度1∶160,酶标二抗工作浓度1∶7500,待检测血清和酶标二抗的反应时间均为37℃,45min,底物37℃显色10min。阻断试验表明,建立的间接ELSA对PCV2抗体具有很好的特异性。板内和板间重复试验显示,同1份血清板内各孔的变异系数均值为2.78%,板间同一份血清D值变化不大,表明重复性好。  相似文献   

分泌抗鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立   总被引：6，自引：0，他引：6  

张春红  廖明  杜伟贤  辛朝安  黄忠  宋长绪  杨傲冰 《中国兽医杂志》1998,24(12):5-7

利用超速离心纯化的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）广东地方分离株Ｄ４１免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。取脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞进行融合,经筛选及克隆,成功地建立了６株可分泌抗ＩＢＶＤ４１株的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞：Ｂ５、Ｂ８、Ｃ７、Ｄ８、Ｄ９、Ｇ１１。其中Ｂ８、Ｃ７、Ｇ１１的稳定性最好,腹水ＭｃＡｂ效价高达１０１０,无血清培养上清ＭｃＡｂ（浓缩３０倍）效价达４×１０４以上。６株杂交瘤细胞的特异性均很好。  相似文献   

猪Ⅱ型圆环病毒广东分离株的全基因组克隆及序列分析     

王贵平  蒋智勇  宋长绪  高向阳  赵亚华  林志雄  朱道中 《中国预防兽医学报》2004,26(4):248-251

根据GenBank中猪Ⅱ型圆环病毒(PCV-2)基因序列,设计两对特异性引物.将PCV-2广东分离株(GD1株)用PK15细胞系培养,从细胞培养物中提取病毒总DNA并以之为模板,用PCR方法分段扩增病毒全基因组,分别克隆到pMD18-T载体,对阳性质粒进行序列测定.用DNAstar对序列进行拼接,得到PCV-2 GD1株基因组全序列,全长为1767个碱基,包涵2个开放阅读杠(ORF1和ORF2),分别编码与复制相关的Rep蛋白和结构蛋白Cap.通过BLAST对所测GD1株核苷核酸序列早国内外已登录GenBank中的PCV-2病毒核苷酸序更进行同源性比较,与PCV-2参考毒株的核苷酸同源性介于94.4%～99.7%之间,与德国株PCV-2(AF201897)的同源性最高,为99.7%;与猪I型圆环病毒(PCV-1)参考株(AY184287)的同源性仅为70%.  相似文献   

猪源绿色气球菌的分离鉴定及16S rRNA基因序列测定与遗传进化分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

张乐宜  李艳  蔡汝健  刘燕玲  蒋智勇  宋长绪 《中国农学通报》2014,30(29):15-21

为研究引起广东部分地区猪场仔猪发生急性死亡的致病菌及其系统发育地位,本研究从广东英德、惠州龙门、翁源、汕头等地区猪场急性死亡病仔猪中分离到6株呈α溶血的细菌。通过细菌形态学观察、生化特性鉴定、药敏试验、致病性试验以及16S rRNA基因的序列分析,确定为猪源绿色气球菌,分别命名为HD、WY、ZQ、LM、YD和ST。动物感染试验表明：6株分离菌株均具有不同程度的致病性;药敏结果显示：6株分离株均对头孢曲松、头孢唑啉、恩诺沙星、阿莫西林高度敏感,对新生霉素、利福平、阿米卡星、庆大霉素、多粘菌素B中度敏感,对其他抗生素均耐药;同源性及遗传进化分析结果显示：6株分离株与12株国内外参考菌株核苷酸同源性在93%以上,其中与澳大利亚分离自犬的15MS株同源性最高,为98.1%,与广西分离自猪的GXBL-1株同源性最低,为83.6%;6株分离株与广东分离株和澳大利亚分离株亲缘关系最近,暗示进化不存在明显的地域相关性。本研究确定了广东部分地区引起规模化猪场仔猪发生急性死亡的病原菌,为该菌引起的疾病的防治提供了依据。  相似文献   

猪葡萄球菌EXHC、SHETA基因的克隆、序列分析及蛋白结构预测     

张乐宜  李艳  蔡汝健  蒋智勇  刘燕玲  宋长绪 《中国畜牧兽医》2014,41(10):17-22

为分析猪葡萄球菌脱落毒素EXHC和SHETA基因结构并预测其所编码蛋白的结构和功能,本试验根据GenBank已报道的猪葡萄球菌脱落毒素EXHC和SHETA基因序列分别设计了1对特异性引物,从猪葡萄球菌GDZC株中扩增获得EXHC和SHETA基因片段,大小分别为1007和971 bp。序列分析结果表明,EXHC基因与猪葡萄球菌丹麦分离株(GenBank登录号:AF515455)及猪源松鼠葡萄球菌河北分离株(GenBank登录号:JF755400)的核苷酸序列、氨基酸序列同源性均为100.0%,而与其他葡萄球菌脱落毒素基因的核苷酸、氨基酸序列同源性分别为3.3%~53.9%和7.9%~44.2%。SHETA基因与日本分离株(GenBank登录号:AB036768)的核苷酸序列同源性为96.2%,氨基酸序列同源性为98.4%,在保守区共有31个碱基发生突变。利用DNAStar软件对EXHC和SHETA蛋白结构进行分析,结果显示EXHC基因编码的蛋白为亲水性蛋白,SHETA基因编码蛋白为疏水性蛋白,抗原性较差。本研究从猪葡萄球菌GDZC株中成功扩增获得EXHC和SHETA基因片段并对其编码的蛋白结构进行了预测,证实了中国分离的猪葡萄球菌同时携带有EXHC和SHETA 2种毒素基因,为进一步研究猪葡萄球菌的致病机理及毒素之间的相互作用提供了理论依据。  相似文献   

猪圆环病毒病(PCVD)研究进展   总被引：3，自引：0，他引：3  

宋长绪  梁鹏帅 《广东农业科学》2010,37(9):34-37

猪圆环病毒病是由猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)引起的一大类猪病的统称,该病对我国的养猪业造成了极大的危害。就猪圆环病毒病在病原学、流行病学、染毒症状及综合防控措施对其进行了阐述,以期为其后续研究提供参考。  相似文献   

猪圆环病毒2型引发的疾病与防控     

宋长绪  梁鹏帅 《兽医导刊》2010,(7):20-23

猪圆环病毒病（PCVD）或猪圆环病毒相关性疾病（PCVAD）是由猪圆环病毒2型（PCV2）引起的一大类猪病的统称。PCVD包括种猪的繁殖障碍、产房小猪的拉稀、断奶小猪的多系统衰竭综合征（PMWS）、生长肥育猪的皮炎肾病综合征（PDNS）等。  相似文献