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为了解长春地区狐狸、貉和家兔养殖场的十二指肠贾第虫感染情况,基于十二指肠贾第虫GDH基因位点分别设计2对引物,对养殖场的120份狐狸粪便样品、60份貉粪便样品和148份家兔粪便样品十二指肠贾第虫进行检测和基因型分析。结果表明,在来自狐狸的粪便中检测出阳性样品44份,阳性率为36.7%,基因型均为基因亚型AI;6份貉阳性样品,阳性率为10.0%,基因型均为集聚体D;41份家兔阳性样品,阳性率为27.7%,其中4份是集聚体B,其他是集聚体A中的基因亚型AI。结果发现在长春地区貉感染贾第虫集聚体D,长春地区的狐狸感染人兽共患型的集聚体A,家兔感染人兽共患型的集聚体A和B。研究结果为该地区十二指肠贾第虫病的防控提供了参考。 相似文献
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E.tenella吉林株单卵囊的分离及PCR鉴定(英文) 总被引：1，自引：0，他引：1
[Objective] In order to get a purified strain to carry out the relative molecular biology research about E.tenella. [Method] The single-oocyst isolation method was improved and the isolated single-oocyst which was put into capsule was fed to chickens. At the same time, the collected oocysts were identified by PCR method. [Result] The oocysts were isolated from feces of 15 chickens among that of 20 chickens and the infection rate was 75%. The PCR results demonstrated that the single-oocyst strain was E.tenella. [Conclusion] The inoculation of single oocyst capsule was simple, besides, this method did not only save time but also declined inoculation difficulty, increased infection rate and provided good materials for biological research of coccidian. 相似文献
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观察硝唑尼特、贝尼尔、咪唑苯脲、Trypan等4种药物在不同浓度、不同作用时间对路氏锥虫的体外杀灭效果。将这4种药物分别以5、10、20、40、80mg/ml的浓度作用于体外培养路氏锥虫,在第24h和48h观察杀灭效果。试验结果:4种药物对路氏锥虫都有杀灭效果,药效依次为硝唑尼特>贝尼尔>Trypan>咪唑苯脲,药物对路氏锥虫的杀灭率随着药物浓度增加和作用时间的延长而增高。硝唑尼特具有较强的杀灭作用,效果较好。 相似文献
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微小隐孢子虫病毒衣壳蛋白抗体检测ELISA方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
为建立快捷的含病毒隐孢子虫的检测方法,本研究利用已构建的微小隐孢子虫病毒衣壳蛋白重组表达质粒表达并纯化重组蛋白,建立以该重组衣壳蛋白为包被抗原检测抗体的间接ELISA检测方法.经优化后间接ELISA的最佳条件为:抗原包被浓度为0.25 μg/孔,被检血清稀释度为1:200,酶标二抗稀释度为1:2000,封闭液为含5％脱脂奶粉的PBST溶液.该方法检测安氏隐孢子虫阳性血清,柔嫩艾美尔球虫阳性血清,蓝氏贾第虫阳性血清,弓形虫阳性血清与微小隐孢子虫阳性结果均为阴性.该方法灵敏度为1:1600,特异性较强且具可重复性,可用于含病毒隐孢子虫的抗体检测及流行病学调查. 相似文献
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旋毛虫肌幼虫总RNA提取方法研究初报 总被引：1，自引：0，他引：1
【研究目的】探索高质量的旋毛虫(Trichinella spiralis)肌幼虫总RNA提取方法；【方法】利用Trizol试剂采用三种方法提取旋毛虫肌幼虫总RNA。(1)液氮预冷的研钵中研磨新鲜虫体至样品快融化时，加入适量的Trizol，继续研磨至液状后转移到离心管中；(2)A将新分离的虫体放到-20℃预冷的研钵中，在研磨过程中不断地添加液氮以保持虫体冷冻，之后对冷冻状的样品粉末继续操作；B把液氮冻存的新鲜旋毛虫肌幼虫取出，放到-20℃预冷的研钵中重复A的操作；(3)新鲜虫体放入匀浆器中，加适量Trizol，在冰水混合物中研磨20分钟。虫体破碎后按Trizol说明书继续抽提。最后通过凝胶电泳和紫外吸收光度值检测。【结果】用液氮和Trizol结合的方法，使用新鲜样品提取旋毛虫肌幼虫总RNA，在纯度和得率上都较为理想；【结论】使用新鲜的样品，且液氮与裂解液结合，是获得高质量RNA的可行方法。 相似文献
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为评价Serpin基因重组表达产物对预防鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella,E.tenella)感染的效果,克隆和表达E.tenella Serpin基因,对表达产物进行初步纯化和复性,制备免疫原.设计了重组蛋白肌肉注射组、重组蛋白口服组、重组蛋白滴鼻组3个试验组以及红、白对照组.分别于7、14和28日龄对雏鸡进行3次免疫,35日龄时用3×104个E.tenella孢子化卵囊攻虫,第7天末宰杀,对各组的存活率、相对增重率、卵囊减少率、ACI等指标进行统计分析.结果表明,各免疫组的平均增重与红对照组相比均有显著增加(P＜0.05),其中以重组蛋白肌肉注射组增重最多,相对增重率为66.73％,优于其他免疫组;各免疫组卵囊产量较红对照组均有显著的下降,其中重组蛋白肌肉注射组卵囊减少率最高,为30.01％;各免疫组ACI均明显高于红对照组,其中以重组蛋白口服组最高,但仍低于160,暗示Serpin蛋白并不是一个理想的球虫疫苗保护性抗原. 相似文献
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临床收集阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)进行体外纯培养,通过总核酸电泳筛选携病毒株.分别用DNA酶和RNA酶处理携病毒株总核酸后电泳.电镜观察阴道毛滴虫及其病毒粒子.根据已发表的阴道毛滴虫病毒基因序列设计合成1对引物,进行RT-PCR,将其产物连接到pMD18-T载体,进行克隆并测序,通过BLAST在GenBank进行同源性搜索,并用DNAStar分子生物学软件进行分析.用放射自显影测定阴道毛滴虫病毒的RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)活性.结果显示,阴道毛滴虫病毒呈球形、二十面体、直径33 nm.病毒基因组约5.5 kb,病毒核酸不能被DNA酶(100 mg/L)降解,但可被RNA酶(1.0 mg/L)降解,病毒基因组有RDRP活性.经RT-PCR扩增后得到1条1 454 bp的片段,与预计大小基本相符,其序列与阴道毛滴虫病毒T1基因的同源性为82.9%.结果表明,在我国阴道毛滴虫长春分离株发现阴道毛滴虫病毒,该病毒属于dsRNA病毒. 相似文献
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[目的]将安氏隐孢子虫肌动蛋白基因进行克隆和在Hela细胞中真核表达。[方法]根据筛选安氏隐孢子虫T7噬菌体展示文库获得的肌动蛋白(CA42)部分编码基因序列设计特异性引物,扩增目的基因CA42,构建重组真核表达载体pVAX1-CA42,将其转化入Hela细胞,用间接免疫荧光、SDS-PAGE、Western blotting检测CA42蛋白在转染细胞中的表达情况。[结果]重组质粒能在Hela细胞中表达,且表达产物具有反应原性。[结论]成功克隆并表达了安氏隐孢子虫肌动蛋白基因,并在Hela细胞中能够稳定表达。 相似文献
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以筛选安氏隐孢子虫T7噬菌体展示文库获得的肌动蛋白（CA42）部分编码基因的序列设计特异性引物,扩增目的基因CA42,构建重组表达载体pET-28a-CA42,通过大肠杆菌BL21的诱导表达,产物经SDS-PAGE和Western-blotting鉴定。然后纯化重组蛋白,免疫BALB／c进行体液和细胞免疫水平的检测,并观察重组蛋白对微小隐孢子虫的交叉保护性效果。结果显示,成功构建重组原核表达质粒pET-28a-CA42,Western-blotting显示重组蛋白约为19ku,能被安氏隐孢子虫免疫小鼠的多克隆抗体识别。重组蛋白免疫BALB／c小鼠的抗体水平差异显著（P〈0．05）,CD4^＋T淋巴细胞数差异均显著,CD4^4／CD8^＋T淋巴细胞数的值与佐剂对照组和空白对照组相比差异均显著（P〈0．05）。各组小鼠经接种微小隐孢子虫卵囊后,试验组与各对照组相比卵囊减少率为32．2％,差异均显著（P〈0．05）。结果表明,成功表达了重组安氏隐孢子虫肌动蛋白,纯化的重组蛋白具有一定的免疫原性和交叉保护性。 相似文献
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应用RT—PCR技术扩增并克隆杜氏利什曼原虫（Leishmania donovani）NH36编码基因，经鉴定及序列分析，构建其原核重组表达载体，经IPTG诱导表达，SDS-PAGE和Western-blotting鉴定其表达产物。结果显示，获得的NH36开放阅读框为945bp，编码314个氨基酸残基，与GenBank上发表的国际标准株NH36编码基因序列以及氨基酸序列同源性分别为88．57％（837／945）和89．17％（280／314）。表达蛋白为36ku，经1mol／L IPTG诱导6h后的表达量最高；薄层扫描显示表达的蛋白占菌体蛋白总量的57％；该蛋白可被抗杜氏利什曼原虫的多克隆抗体血清识别。 相似文献