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以CP23重组蛋白为抗原建立检测微小隐孢子虫抗体间接ELISA方法的研究 总被引：3，自引：0，他引：3
摘要：以在E.coli高效表达的微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP23为抗原，以辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗鼠IgG为二抗，建立了检测微小隐孢子虫抗体的间接ELISA方法。经检测筛选出最佳反应条件为1μg／孔纯化的E.coli表达的CP23抗原包被酶标板，用10％免血清进行封闭，以正常E.coli裂解上清液稀释待检血清。实验表明应用CP23重组蛋白作为诊断C.parvum抗原具有特异性高、抗原易纯化和成本低等特点。 相似文献
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犬贾第虫dsRNA病毒的鉴定及特性 总被引：12，自引：0，他引：12
对分离到的6株犬贾第虫（Giardia cnais)包囊进行核酸分析，在其中1株犬贾第虫核酸的琼脂糖凝胶电泳图谱上观察到1条长度约7.0kb的片段。经鉴定，该核酸不能被DNA酶（100mg/L）降解，对质量浓度低的RNA酶（0.1mg/L)不敏感，但可被质量浓度高的RNA酶（10mg/L）降解。纯化包囊经流氮冻融后，磷钨酸负染，电镜观察发现有球形、直径约为33nm的病毒样粒子存在，包囊超薄切片在胞质中也观察到该病毒样粒子存在。RNA依赖RNA聚合酶活性测定结果表明，该病毒具有RNA依赖RNA聚合酶的活性。犬贾第虫dsRNA病毒核经RT-PCR扩增后得到1条预计扩增大小的片段，将其回收后连接到pMD18-T载体上进行克隆并测序，所得序列仅与蓝氏贾第虫病毒具有较高同源性。 相似文献
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将编码CP15 / 6 0的基因插入真核表达载体pcDNA3(+)中构建重组质粒pcDNA3 15 / 6 0 ,然后经鼻粘膜免疫怀孕成年山羊 ,观察其免疫应答的产生情况及其对后代的保护力。结果为抗CP15 / 6 0抗体存在于免疫山羊的血浆和初乳中。pcDNA3 15 / 6 0经鼻粘膜免疫的怀孕山羊产生的免疫力能传给子代 ,使子代对微小隐孢子虫 (Cryp tosporidiumparvum)感染产生保护。CP15 / 6 0 DNA免疫母羊的后代比非免疫母羊的后代排出卵囊少且排卵时间短。这就表明重组质粒pcDNA3 15 / 6 0可作为隐孢子虫候选核酸疫苗 相似文献
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亲环蛋白（cyclophilin,CyP）是一类广泛存在于原核和真核生物体内的胞溶性蛋白,是刚地弓形虫（Toxoplasmngondii）速殖子的主要成分,能够诱导产生IL-12和IFN-γ,在控制弓形虫急性感染过程中起重要作用。本研究根据GenBank发表的TgCyP基因序列,设计并合成一对包含BamHI和EcoRI酶切位点的引物,以cDNA为模板,应用PCR技术扩增TgCyP基因。PCR产物连接到pMD18-T克隆载体。用限制性内切酶BamHI和EcoRI双酶切克隆载体,将TgCyP目的基因克隆到载体pVAXI,构建真核表达质粒pVAXl-TgCyP。将真核表达质粒转染Hela细胞,利用问接免疫荧光检测其在Hela细胞内的表达情况。结果表明扩增的TgCyP基因与GenBank上相应基因序列（U04633．1）的一致性达100％,构建的真核表达质粒pVAX1-TgCyP能在转染的Hela细胞中表达,其表达产物与刚地弓形虫阳性血清具有免疫反应性。本研究表明Tg-CyP有望作为弓形虫疫苗的候选抗原,将为进一步研究该质粒的动物免疫试验奠定基础。 相似文献
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作者从理论到实践,论述了柔性“脱开”防水层倒置保温屋面的施工原理、施工方法及要点、主 要材料要求及其优点,对倒置屋面施工,具有实际的指导意义。 相似文献
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[目的]利用纯化的刚地弓形虫RH株表面蛋白SAG3的原核重组蛋白为基础,建立抗体间接ELISA检测方法。[方法]采用棋盘滴定法,确定间接ELISA的最佳条件。采用鼠抗新孢子虫阳性血清、鼠抗安氏隐孢子虫阳性血清、鼠抗柔嫩艾美尔球虫阳性血清、鼠抗蓝氏贾第虫阳性血清以及鼠抗微小隐孢子虫阳性血清和健康小鼠阴性血清作对照,检测血清之间是否有交叉反应。[结果]最佳包被条件为:抗原包被浓度0.25μg/孔,被检血清稀释度1∶400,酶标二抗稀释度1∶3 000,封闭剂5%脱脂奶粉的PBST溶液;血清之间没有交叉反应。该方法的灵敏度为1∶1 600。[结论]该方法灵敏度高,特异性较强,可重复性较好,可用于对弓形虫感染的检测及流行病学调查。 相似文献