猪弓形虫感染免疫胶体金试纸条的制备与初步应用     

寇金华  杨正涛  刘维建  高珺珊  李建华  杨举  张西臣  宫鹏涛 《中国兽医学报》2018,(1):82-87

制备1种检测猪弓形虫血清循环抗原的免疫胶体金试纸条。利用柠檬酸三钠还原法制备40nm的胶体金溶液,标记抗弓形虫表面抗原SAG3(surface antigen 3,SAG3)单克隆抗体(Anti-A-SAG3-7),用另1株抗弓形虫表面抗原SAG3单克隆抗体(Anti-A-SAG3-23)与羊抗小鼠IgG抗体分别包被于硝酸纤维素膜(NC膜)上的检测线和质控线,制备并优化免疫胶体金试纸条检测条件。胶体金溶液的最适pH值为加入4μL 0.2 mol/L K2CO3时的pH值。Anti-A-SAG3-7的最适标记量为12μg。最佳NC膜为Millipore 135。T、C线抗体最佳包被质量浓度均为0.25g/L,T、C线抗体最佳包被体积均为8μL。试纸条的灵敏度达1∶160,与猪囊虫阳性血清无交叉反应。稳定性试验表明,该试纸条置于室温至少可保存1个月有效,置于4℃可保存3个月有效。对广东某地区、吉林某地区猪场的各94份猪待检血清进行检测,分别有17,10份为阳性血清,样品阳性率为18.08%,10.63%。本研究制备的胶体金试纸条具有操作简单,敏感特异等优点,适合临床基层单位对猪弓形虫病的早期诊断及流行病学调查。  相似文献   

应用巢式PCR-RFLP方法鉴别我国常见的几种隐孢子虫   总被引：1，自引：1，他引：0  

李巍  张西臣  李建华  李淑红  宫鹏涛  杨举 《吉林农业大学学报》2011,33(1):69-73

应用巢式聚合酶链反应(Nested PcR)-限制片段长度多态性(Restriction fragment length polymorphism,RFLP)方法对微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)、安氏隐孢子虫(C.andersoni)、贝氏隐孢子虫(C.baileyi)和猪隐孢子虫(C.s...  相似文献   

犬贾第虫体外诱导成囊形态学变化的观察     

李凌丹  宫鹏涛  李建华  李赫  杨举  张西臣  杜德江 《中国预防兽医学报》2010,32(12)

为观察犬贾第虫(Giardia canis)滋养体体外诱导成囊过程中的形态学变化,本实验采用TYI-S-33培养基体外纯培养G.canis滋养体,通过改良的TYI-S-33培养基诱导成囊,在0 h、24 h、48 h和72 h对虫体进行观察。结果显示:24 h后虫体开始变圆;48 h后可以观察到虫体鞭毛和吸盘消失,虫体表面出现囊膜分泌型小体,少量虫体被包囊壁包裹;72 h后成囊率最高可达50%。本研究为G.canis成囊方面的研究奠定了基础。  相似文献   

柔嫩艾美耳球虫F2杂交株Rhomboid基因在大肠杆菌中的表达     

张广海  李建华  宫鹏涛  张西臣  张国才 《吉林农业大学学报》2009,31(1)

根据ET-Rhomboid基因开放阅读框,插入有利于表达的酶切位点设计引物,以虫体DNA为模板扩增并克隆了ET-Rhomboid基因,并将该基因与PET-28a(+)质粒载体连接,构建成了原核表达载体PET-ET-Rhomboid.将构建好的表达质粒转入大肠杆菌DE3,经IFTG诱导表达后,用SDS-PAGE检测表达产物,用蛋白印迹(Western blotting)检测其反应原性.结果表明:含重组质粒的工程菌有明显的表达产物为31 kD的融合蛋白,与推测的融合蛋白的分子量吻合,蛋白印迹检测具有反应原性.  相似文献   

肝片吸虫免疫显性抗原基因的筛选及鉴定     

段佳慧  刘少雄  马丹  张西臣  宫鹏涛  李建华  王晓岑  李新  张楠  韩宇  唐博 《畜牧与兽医》2022,(2)

为筛选出特异的肝片吸虫诊断候选抗原,拓展诊断靶标,利用肝片吸虫阳性血清筛选肝片吸虫cDNA表达文库,获得肝片吸虫特异性抗原基因,采用RT-PCR技术扩增目的基因,连接表达载体pET-32a(+),构建重组质粒,转化入感受态细胞BL21(DE3)中,利用IPTG对重组蛋白进行诱导表达,通过SDS-PAGE及Western blot技术对蛋白表达情况进行鉴定。结果显示:经筛选获得了17个肝片吸虫免疫显性抗原基因,其中假定蛋白Fh010935为肝片吸虫特异性抗原基因;扩增得到的Fh010935核苷酸序列大小为144 bp,编码48个氨基酸,A+T含量为55.56%;Fh010935蛋白由1个α-螺旋,2个β-折叠和3个β-转角构成,具有3个抗原表位,推测该蛋白可能具有较好的抗原性;重组蛋白主要以包涵体形式表达,分子量大小约24 ku,可以被肝片吸虫感染阳性血清特异性识别,具有较好的反应原性。提示:假定蛋白Fh010935可作为肝片吸虫病诊断候选抗原,为疾病诊断制剂的开发提供前期基础。  相似文献   

应用巢式PCR检测隐孢子虫     

李巍  吴康  张西臣  李建华  张国才  李淑红  宫鹏涛  杨举 《中国兽医学报》2010,30(6)

应用巢式聚合酶链反应(Nested PCR)建立了一种检测隐孢子虫(Cryptosporidium)的方法。试验中隐孢子虫卵囊纯化采用庶糖密度梯度离心法,以液氮-热水浴反复冻融及酚-氯仿抽提冷乙醇沉淀法制备模板DNA,根据隐孢子虫18S rRNA序列高度保守区设计2对引物,建立Nested PCR诊断方法。该方法特异性强,可检出牛源微小隐孢子虫(C.parvum)、羊源微小隐孢子虫(C.parvum)、牛源安氏隐孢子虫(C.andersoni)、鸡源贝氏隐孢子虫(C.baileyi)及猪源隐孢子虫(C.suis);敏感性高,该方法最低核酸DNA检测量达到10fg。初步应用结果表明,所建立的Nested PCR方法适合于隐孢子虫病的诊断和分子流行病学调查。  相似文献   

E.tenella端粒酶逆转录酶基因3'端序列的克隆及分析     

杨桂连  李建华  张西臣  赵权  宫鹏涛  蔡亚南  任保彦  张国才 《中国兽医杂志》2009,45(12)

为了获得E.tenella TERT全长cDNA序列,本试验根据已报道的其他,原虫TERT氨基酸序列,利用CODEHOP方法设计简并引物,同时利用Trizol法提取总RNA并反转录为cDNA,然后采用3'-RACE方法克隆获得E.tenella TERT 3'cDNA序列,并采用生物信息学技术进行序列分析.结果表明,该序列具有TERT蛋白家族特征性基序,证明成功克隆了E.tenella TERT 3'cDNA序列.  相似文献   

安氏隐孢子虫肌动蛋白部分编码基因真核表达载体的构建     

陈健  胡进平  宫鹏涛  李建华  杨举  李赫  张国才  张西臣  任文陟 《安徽农业科学》2012,(7):3860-3862

[目的]将安氏隐孢子虫肌动蛋白基因进行克隆并在Hela细胞中真核表达。[方法]根据筛选安氏隐孢子虫T7噬菌体展示文库获得的肌动蛋白(CA42)部分编码基因序列设计特异性引物,扩增目的基因CA42,构建重组真核表达载体pVAX1-CA42,将其转化入He-la细胞,用间接免疫荧光、SDS-PAGE、Western blotting检测CA42蛋白在转染细胞中的表达情况。[结果]重组质粒能在Hela细胞中表达,且表达产物具有反应原性。[结论]成功克隆并表达了安氏隐孢子虫肌动蛋白基因,并在Hela细胞中能够稳定表达。  相似文献   

硝唑尼特对四翼无刺线虫的驱虫效果     

王泽东  马月  李文超  李伟志  孟莹  宫鹏涛  杨举  李建华  张西臣 《中国畜牧兽医》2011,38(7):187-189

20只自然感染四翼无刺线虫的雌性昆明系小鼠,随机分成4组,每组5只,常规饲喂。第1~3组小鼠分别以200、400、800 mg/kg剂量的硝唑尼特灌胃,第4组设为空白对照组,每24 h一次,连续灌胃5 d。用虫卵减少率和粗计驱虫率作为评价药物效果的指标。结果显示,硝唑尼特对四翼无刺线虫的驱虫效果随药物剂量的增加而提高,以800 mg/kg剂量效果最好。  相似文献   

柔嫩艾美耳球虫端粒DNA重复序列的South-ern印迹杂交分析     

杨桂连  李建华  张西臣  赵权  宫鹏涛  蔡亚南 《吉林农业大学学报》2010,32(2):205-208

为进一步确定柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)端粒DNA的重复序列,为下一步端粒酶活性检测奠定基础,根据已克隆发表的E.tenella端粒DNA重复序列信息,设计了由4个端粒重复序列串联的寡聚核苷酸探针(TTTAGGG)4,并以生物素地高辛标记。将该探针与经BAL31-EcoRⅠ酶切后的E.tenella基因组DNA进行Southern印迹杂交分析。结果显示:E.tenella基因组DNA与探针杂交获得了清晰的杂交条带,随BAL31酶切时间的延长,杂交信号逐渐减弱,进一步证明了E.tenella端粒DNA重复序列为5-′TTTAGGG-3′,且此重复序列在E.tenella染色体的末端。  相似文献