禽源U6启动子介导鸡马立克氏病病毒gI、gE基因特异siRNA的筛选及干扰活性鉴定     

全炎铭  崔红玉  赵妍  赵晓岩  石星明  高宏博  闫帅  张晓艳  王玫  王云峰 《中国预防兽医学报》2011,33(5)

为筛选鸡马立克氏病病毒(MDV)gI、gE基因特异性siRNA,本研究以鸡胚成纤维细胞(CEF)的DNA为模板,扩增禽源cU6-3启动子序列,并合成针对gI和gE基因各5个靶位点的10条shRNA序列.通过重叠PCR将cU6-3启动子与shRNA融合扩增制备shRNA表达盒,将制备的shRNA表达盒分别与重组质粒pEGFP-gI或pEGFP-gE共转染CEF细胞,并根据荧光显微镜观察和流式细胞仪检测结果评价siRNA抑制融合荧光蛋白表达的效率.结果表明,gI和gE基因的抑制效率为10%～80%.分别将其中抑制效率最高的一条shRNA插入pGEM-T载体中构建重组表达质粒pcU6-shgI735和pcU6-shgE936,通过不同细胞系稳定干扰试验和抑制病毒复制试验评价其干扰活性.结果显示,pcU6-shgI735和pcU6-shgE936能够明显抑制融合蛋白的表达及MDV在CEF细胞中的增殖,并且禽源U6启动子构建的表达盒在禽源细胞(DF1)中的活性比在哺乳动物细胞(Vero、MDCK)的活性高1.21～1.45倍.本研究鉴定获得了gI和gE基因的特异性siRNA,筛选出能够抑制MDV复制的靶位点,为MDV基因的功能和抗MDV病毒研究奠定了基础.  相似文献   

奶牛巴氏杆菌病的诊断与治疗     

徐明举  李寸欣  崔红玉  丁丽梅  利凯  徐彤 《畜牧与兽医》2009,41(10)

牛多杀性巴氏杆菌病又称为牛出血性败血症,是以高热、肺炎、急性胃肠炎和内脏广泛性出血为特征的急性败血性传染病,对养牛业造成了很大的经济损失.2008年7月中旬,张家口市某奶牛场发生疑似巴氏杆菌感染来我实验室就诊,经过病原的分离鉴定、流行病学调查、临床症状、病理剖检等,确诊为牛多杀性巴氏杆菌病,并作了药物敏感试验,为其筛选了敏感药物,取得了很好的治疗效果.  相似文献   

H3N2亚型猪流感病毒对小鼠的致病性试验     

王存连  徐明举  张茜  利凯  崔红玉  张瑞华  李寸欣  徐彤 《畜牧与兽医》2011,43(4)

采用A/sw ine/Hebei/2/2008(H3N2)猪流感病毒经鼻腔感染6～8周BALB/c小鼠,观察感染后小鼠的临床症状、采食量、组织病理学变化,测定病毒在肺、脑、肝、脾、肾等组织内的复制滴度和小鼠的半数致死量(LD50),研究其对小鼠的致病特性。结果显示该病毒经鼻腔感染后可引起小鼠活动减少、采食量降低、体重严重下降并呈现严重的呼吸困难,25%(2/8)的小鼠在感染后5～8 d内死亡;病理组织学变化为肺部严重的水肿、出血、淤血、坏死以及炎性细胞的渗出,脑、肝及其他实质器官有不同程度的淤血、出血和坏死;病毒分离显示包括脑在内的所有肺外器官均分离出H3N2病毒;该毒株的LD50为10-2.2/0.1 mL。结果表明A/sw ine/Hebei/2/2008(H3N2)猪流感病毒不仅可以在未经预先适应的情况下引起小鼠出现以肺部损伤为主的致死性全身感染,而且该毒株对小鼠具有较强的致病性。  相似文献   

鸡传染性喉气管炎病毒(江苏株)的分离与初步鉴定     

赵妍  孔聪聪  张晓敏  崔红玉  石星明  蒿莲薇  胡顺磊  闫帅  薛美  牛秀杰  李巧玲  王玫  刘胜旺  王云峰 《中国动物传染病学报》2012,(1):22-26

本研究从江苏省某养鸡场采集临床疑似鸡传染性喉气管炎(infectious laryngotracheitis,ILT)的病鸡喉头气管,接种鸡胚绒毛尿囊膜分离病毒,命名为LJS091151。以分离毒人工感染SPF鸡,于攻毒后d3出现了ILT的典型临床症状,剖检亦可见喉头气管黏膜充血肿胀、消化道空虚、黏膜充血等病理变化。根据GenBank发表的鸡传染性喉气管炎病毒(Infectiouslaryngotracheitis virus,ILT)gB、TK基因保守序列设计2对引物对分离株基因组DNA进行扩增和序列测定。序列分析表明,获得的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与GenBank发表的序列相似性均在99%以上,证明了分离株LJS091151为鸡传染性喉气管炎病毒。  相似文献   

病毒克治疗鸡非典型性新城疫试验     

杨玉成  胡满  赵占民  苏杰  崔红玉  李继连  刘明强  高景武 《今日畜牧兽医》1996,(Z1)

5年来应用中药病毒克共治疗鸡非典型新城疫病鸡1407750羽,治愈1282776羽,治愈率为91.12％;对人工感染NDV的病鸡治愈率为63.16％;对NDHI效价中药病毒克组显著高于对照组P<0.05。  相似文献   

接种不同剂量的新城疫疫苗对鸡免疫应答的影响   总被引：5，自引：1，他引：4  

赵香汝  徐彤  靳喜鹏  崔红玉 《中国兽医杂志》2005,41(7):17-17

目前在我国使用的新城疫疫苗主要有Ⅰ系、Ⅱ系、F系、LaSota系（Ⅳ系）弱毒疫苗和灭活疫苗。其中Ⅳ系苗因其使用方便，免疫效果较好，引起的反应小，所以在临床上应用较多，并常以饮水免疫，但使用剂量较大。机体的免疫应答能力受抗原用量的影响，在一定的范围内随抗原用量的加大免疫效果也相应增强，但并不是抗原用量越多越好，过高的免疫剂量不但不能提高机体的免疫效果，反而会产生免疫抑制，同时也增加了经济投入。为了给临床应用剂量提供了一个参考标准，我们设计了本试验，现报告如下。  相似文献   

不同水平新城疫循环抗体对不同疫苗免疫的影响     

赵占民  赵来兵  李全福  杨占勇  赵香汝  刘栓江  戴宏研  崔红玉 《中国兽医杂志》2000,26(11):15-16

鸡体内的抗体按其来源分为两种，即被动获得的抗体-母源抗体和主动获得的抗体-疫苗免疫后刺激机体产生的抗体(即循环抗体)。关于体内抗体对疫苗免疫的影响不同学者持不同的观点，这就给生产中免疫程序的制订带来困难。为了进一步探讨这一问题以便指导生产，本试验选择了具有不同水平新城疫循环抗体的成年鸡，采用不同的新城疫疫苗进行免疫，以观察其对疫苗免疫的影响，结果为：不同水平的新城疫循环抗体对不同疫苗免疫的影响没有显著差异。报告如下。 1 材料与方法 1.1 试验动物 50日龄健康海兰褐母鸡140只、非免疫公鸡2只(供采血用)。 1.2 新城疫疫苗 LaSota疫苗(中国兽药监察所提供)、Ⅰ系疫苗(北京生药厂生产)、油佐剂疫苗(山东农科院SPF鸡研究中心生产)。  相似文献   

禽网状内皮增生症病毒gp90基因真核表达及ELISA检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

石星明  赵妍  王玫  张晶  魏秀英  杨桂花  高宏博  全炎铭  黄婷婷  张晓艳  崔红玉  王云峰 《中国预防兽医学报》2010,32(11)

为建立禽网状内皮增生症病毒(REV)的ELISA检测方法,本研究通过RT-PCR方法扩增gp90基因,构建杆状病毒重组质粒,转化DH10Bac后,通过转座获得重组杆粒,并将其转染Sf9昆虫细胞,SDS-PAGE及western blot分析表明,表达的重组蛋白分子量约为45 ku,具有良好的反应原性。将表达的重组蛋白纯化后包被ELISA反应板,建立检测REV抗体的rgp90-ELISA方法。特异性试验结果表明该方法具有良好的特异性;将该方法与IDEXX公司生产的试剂盒共同检测包括63份已知背景的血清在内的黑龙江省和广东省的临床血清样品共477份,符合率分别为90.5%和86.4%。该方法的建立为禽群REV抗体的监测提供了方便、快捷、准确的技术手段。  相似文献   

传染性支气管炎重组鸡痘病毒免疫鸡对LHLJ04X I株病毒攻击的免疫保护作用     

石星明  王云峰  王玫  刘胜旺  童光志  何来  贺笋  崔红玉  胡文玮  韩文雄 《中国预防兽医学报》2008,30(1):47-52

将表达鸡IFN-γ基因和传染性支气管炎病毒S1基因的重组鸡痘病毒（rFPV-IFN-γ S1）接种SPF鸡后,用与S1基因亲本毒株具有相同致病型且遗传关系较近的现地分离株LHLJ04XI病毒进行攻击．评价重组疫苗对现地分离病毒的保护效果。结果显示,重组病毒在免疫后1周即可检出ELISA抗体,并且免疫组外周血CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞含量均有显著上升。当用LHLJ04XI株病毒及亲本毒LX4攻击后,免疫鸡的肝脏、肾脏、脾脏及肺脏等脏器的病理损伤程度明显轻于非免疫对照组,排毒时间缩短,攻毒后现地分离株攻击的免疫组的发病率为27.3％（3／11）,死亡率为9．1％（1／11）,亲本毒攻击的免疫组发病率为26．67％（4／15）,死亡率为6．67％（1／15）,两者没有明显差异,而非免疫对照组的发病率和死亡率分别为100％（11／11）和45．5％（5／11）,与免疫组相比差异显著,说明重组疫苗对免疫鸡具有较好的保护效果。体重测定结果表明,攻毒前重组疫苗免疫组和非免疫对照组的体重差异不显著（P〉0．05）,攻毒以后免疫组体重的增加幅度高于非免疫对照组。以上结果表明,共表达鸡IFN-^γ基因和传染性支气管炎病毒S1基因重组鸡痘病毒活载体疫苗能对异源现地分离株的攻击产生较好的免疫保护,同时也减轻了重组疫苗对体重增长的抑制作用。  相似文献