猪繁殖与呼吸综合征活疫苗中病毒含量荧光定量PCR测定方法的建立及初步应用     

马志亮  孙亭亭  杨洁  范斌  刘旭川  张以芳 《中国畜牧兽医》2014,41(5):71-76

为建立快速、敏感、特异的评价猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）活疫苗中病毒含量的方法,根据GenBank中登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）基因序列设计合成了标准品引物和定量引物,RT-PCR扩增PRRSV基因片段并连接到pMD19-T载体上,构建标准品质粒pMD19-T-PRRSV。采用SYBR GreenⅠ染料法进行荧光定量PCR检测,分析标准曲线并进行特异性、稳定性、重复性试验。结果显示,该方法检测病毒含量为7.43×10⁰～7.43×10⁸拷贝/μL,标准品各稀释度质粒拷贝数与Ct值之间相关系数高(R²=0.9989),引物特异性强。应用该方法对6个厂家PRRS活疫苗中的病毒含量进行测定,发现不同厂家生产的疫苗中病毒含量差异较大,最高差异可达47.9倍。本试验建立的检测PRRS活疫苗病毒含量的荧光定量PCR方法可用于疫苗生产过程中及免疫动物前疫苗质量的评价。  相似文献   

病毒亲和肽的研究方法及进展     

张娜娜  卢清侠  滕蔓  杨艳艳  张以芳  张改平 《农业科学与技术》2016,(12)

随着病毒亲和肽研究的不断深入,其在药理和医学上的应用也逐渐成为热点。研究极具潜在药用价值的病毒亲和肽并应用于治疗,给治愈某些感染性疾病带来希望。分析筛选高选择性、高灵敏度的病毒亲和肽,能为疾病检测、治疗及其分子机制研究提供有价值的思路和手段。该文就计算机模拟、分子对接和同源建模等生物信息学预测技术,及噬菌体展示技术等分析筛选病毒亲和肽的研究方法加以综述。  相似文献   

牛分支杆菌ag85b基因原核表达载体的构建     

蒋成砚  谢昆  罗家琴  柴俊  王生奎  张以芳 《中国畜牧兽医》2011,38(4):121-123

为构建牛分支杆菌ag85b基因的重组表达质粒pET-32a-ag85b,采用聚合酶链反应(PCR)从牛分支杆菌AF2122/97基因组DNA中扩增出ag85b基因(978 bp),然后对扩增产物和载体pET-32a以核酸内切酶EcoR Ⅰ及Sal Ⅰ分别进行双酶切;将两种酶切产物以T4 DNA Ligase连接,将靶基因克隆入载体pET-32a,构建重组质粒。将此重组质粒转化入大肠杆菌DH5α,抽提重组质粒首先经EcoR Ⅰ及Sal Ⅰ双酶切检验,再进行PCR扩增鉴定,最后测序鉴定。酶切片段及PCR扩增片段大小均与预期相符,测序结果与GenBank登录序列完全相同。结果表明,成功地克隆并构建了ag85b基因重组表达质粒pET-32a-ag85b。  相似文献   

云南武定鸡肠道芽孢杆菌分离鉴定及动物饲喂试验分析     

韩建强  卢志远  杨锁住  赵国洪  张以芳  赵津 《西南农业学报》2018,(6)

【目的】筛选适合武定鸡的饲料添加益生菌株。【方法】本试验通过从武定鸡肠道中分离出10株芽孢杆菌,经生化鉴定、耐酸、耐胆盐、肠道粘附、抑菌试验,选择优良的芽孢杆菌进行16S r DNA同源性分析,并选用1日龄武定雏鸡进行饲喂试验。【结果】Bac C1为枯草芽孢杆菌,添加Bac C1组的武定鸡的体重、免疫器官指数、肠道中乳酸菌含量均显著高于对照组(P0.05)。而料肉比显著低于对照组(P0.05)。【结论】在饮水中加入武定鸡分离的芽孢杆菌Bac C1可以提高雏鸡的免疫能力和生产性能。研究结果为饲料添加菌株的筛选提供科学依据。  相似文献   

云南普洱茶特征成分的功能与毒理学评价   总被引：22，自引：2，他引：20  

龚加顺  陈文品  周红杰  董兆君  张以芳 《茶叶科学》2007,27(3):201-210

研究了普洱茶特征成分茶褐素、茶多糖与蛋白质等的复合体对昆明种小白鼠的抗疲劳、降胆固醇以及毒理学效应。实验结果显示：普洱茶特征成分提取物能显著提高小白鼠的抗疲劳作用和降低小鼠血液中的胆固醇含量,且优于普洱茶水提物。普洱茶特征成分提取物经口LD₅₀>10βg/kg,属实际无毒级物质。Ames实验中加S₉混合液和不加S₉混合液的各剂量组回变菌落数与阴性对照差别无统计学意义,且无剂量反应关系。小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验与阴性对照组比较差别无统计学意义。普洱茶特征成分提取物在500~5β000βμg/ml浓度范围内未见诱发CHL细胞染色体畸变率增高。这说明,在实验条件下,普洱茶特征成分提取物属实际无毒级,也未见有致突变作用。  相似文献   

布氏杆菌病检测技术的研究进展     

郑锦玲  蒋成砚  董仲生  张以芳  李云蓉  鲁曾荣  黄必志 《中国农学通报》2006,22(6):25-25

综述了检测布氏杆菌病的新老方法。布氏杆菌病(Brucellosis)在全球引起巨大的经济损失,对人危害严重,基因苗即将为其防制提供保障。认为,细菌学检验和凝集试验测将淘汰;沉淀试验和补体结合试验不理想;放射免疫试验不能广泛运用;变态反应主要用于绵羊,也用于山羊的筛检,不作山羊个体的诊断依据。竞争酶联免疫吸附试验尚无诊断标准。间接酶联免疫吸附试验是一种先进、快速、可靠的新方法,但不能区别疫苗抗体与致病株抗体。PCR可检1pg的布氏杆菌DNA,应用细菌DNA检测是最可靠的方法。最近建立的荧光探针分析可在野外快速准确地诊断,可用于家畜和野生动物的检测。  相似文献   

软包装松茸灭菌工艺研究(简报)     

郝正喜  张以芳  陈瑶先 《西南大学学报(自然科学版)》1994,(4)

将盐渍松茸流水冲洗、脱盐、切片分类,置钢精锅内用调汤液煮沸10min,用软包装机分装,每袋250g,含松茸100g,分别用间歇法杀菌:置85℃水中,杀菌50min,室温放置48h,再用同样条件杀菌,室温存放;高压蒸汽法杀菌:将袋装松茸置于高压灭菌锅内,121℃杀菌25min,室温存放。结果表明,两种灭菌法均能达到杀菌目的,但间歇灭菌法,营养成分损失更少,且无软包装袋变形损坏现象。  相似文献   

鸡嗉囊内容物中乳杆菌的分离与鉴定     

张以芳  刘旭川 《云南农业大学学报(自然科学版)》1997,12(3):206-208

 对鸡嗉囊内容物中的乳杆菌进行调查.从11份样品中,共分离到41株乳杆菌,鉴定为10个种,其中唾液乳杆菌,卷曲乳杆菌,双发酵乳杆菌3个种占58%,确认为是鸡嗉囊内容物中的优势种群.  相似文献   

青贮玉米秸秆乳杆菌的分离与鉴定     

张以芳  刘荫武  李志祥 《云南农业大学学报(自然科学版)》1994,(1)

本文对昆明地区青贮上米秸秆乳杆菌进行调查。从１２份样品中，共分离到５５株乳杆菌，鉴定出１２个种。其中短乳杆菌及干酪乳杆菌两个种占４３．６％，确认为是青贮料中的优势种群。本文还从青贮料中分离鉴定出：食果糖乳酸杆菌、绿色乳杆菌、格氏乳杆菌、亚麻那乳杆菌等４个种，现作一并报道。  相似文献   

鸭坦布苏病毒荧光定量RT-PCR方法的建立及应用     

王巧萍  严红亚  李珂  朱鹤然  元正菊  常志顺  张以芳  信爱国 《中国动物检疫》2021,38(11):124-130

为建立鸭坦布苏病毒（duck tembusu virus,DTMUV）荧光定量RT-PCR（qRT-PCR）检测方法,对DTMUV的NS5基因设计特异性引物和MGB探针,使用RT-PCR扩增NS5基因并将其连接到pEASY?-T1载体上构建重组质粒,提取阳性重组质粒作为qRT-PCR阳性模板绘制标准曲线,用SYBR Green I法检测MGB探针法qRT-PCR的引物是否有非特异性扩增,并进行特异性、敏感性、重复性试验和临床样品检测。结果显示：MGB探针法qRT-PCR标准曲线的相关系数为0.999 3,其引物没有非特异性扩增;对于其他阳性样本,如鸭肝炎病毒（DHV）、新城疫病毒（NDV）、禽流感病毒（AIV）等抗原无扩增曲线,只能检出DTMUV;qRT-PCR敏感性可达3×102 copies/μL,是普通RT-PCR的10 000倍;批内和批间重复性试验变异系数（CV）为0.08%~0.49%,均小于0.5%。从云南省不同地区采集20份临床出现产蛋下降症状的病鸭组织,应用试验建立的qRT-PCR方法检出12份阳性样品,而普通RT-PCR检出10份,两者的阳性率分别为60%（12/20）和50%（10/20）。结果表明,本试验成功建立了基于DTMUV NS5基因的MGB探针qRT-PCR检测方法,其标准曲线线性关系显著,特异性强,与其他禽源性病原无交叉反应性,敏感性和重复性良好,敏感性和阳性检出率较普通RT-PCR高,更适合于DTMUV感染的临床诊断和流行病学调查。  相似文献