鸡肾型IBV分离株M基因的克隆与特性分析     

王晶钰  罗艳  邓小敏  郭抗抗  张彦明 《中国预防兽医学报》2007,29(8):591-595

依据NCBI所登录的鸡传染性支气管炎病毒的M基因序列设计了一对引物,应用TRIzol试剂盒对8个肾型鸡传染性支气管炎病毒陕西地方分离株进行总RNA的提取,以所得到的RNA为模板,用RT-PCR对M基因进行扩增;其目的条带回收提纯后,与PMD18-T克隆载体进行连接,转化到DH5α宿主菌,并经药物抗性筛选、PCR及酶切鉴定,将所筛选鉴定出的阳性质粒进行测序,最后对测序结果进行分析。结果表明：陕西地方8个毒株（BJ2、FF2、YL2、B01、G5、YX、WH、WG）M基因长约为650 bp,其中YX、WH株本身无BamH 1酶切位点。WH与其它分离株的核苷酸同源性为91.8%～92.6%,而其它的分离株间的同源性为98.8%～99.8%。8个毒株与参考株的核苷酸同源性为74.9%～99.8%。其N端90 aa肽段与对照株相比,不同之处表现为高亲水性氨基酸取代低亲水性氨基酸,这会使其具有更好的抗原性。  相似文献   

醋酸甲羟孕酮单克隆抗体制备及ELISA检测方法的建立   总被引：2，自引：0，他引：2  

韩雪清  杨泽晓  张彦明  林祥梅  刘建  梅琳 《西北农业学报》2009,18(1):173-179

建立饲料和食品中醋酸甲羟孕酮(MPA)残留快速、灵敏的检测方法.分别以碳二亚胺法、混合酸酐法合成MPA的人工抗原MPA-BSA、MPA-OVA为免疫原和包被原,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗MPA单克隆抗体(McAb),在Protein G Sepharose 4 Fast Flow纯化MeAb基础上通过对ELISA反应条件的优化建立了MPA检测的间接竞争ELISA方法,并对MPA标品添加试样进行了初步应用.结果获得1株能稳定分泌抗MPA McAb的杂交瘤细胞株M68F9H9,分泌McAb腹水效价为1∶1×107,属于IgGl亚类,MPA半数抑制浓度(IC50)为5.0 ng/mL,具有良好特异性;以纯化McAb为基础建立的间接竞争ELISA,MPA最低检测限为0.16 ng/mL,线性检测范围为0.1～80 ng/mL;除与甲羟孕酮、甲地孕酮、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和已烯雌酚交叉反应率分别为100%、25%、<0.01%、<0.01%和<0.01%;MPA添加试样应用检测结果与进口试剂盒检测结果相符.  相似文献   

动物肌肉发育相关印记基因研究进展     

贺花  何帆  黄永震  姜艳芬  郭抗抗  王晶钰  张彦明 《安徽农业科学》2018,46(27)

就印记基因的发展过程、主要特点及作用机制进行了简要概述,并主要介绍了与肌肉的生长发育密切相关的部分印记基因(DLK1、SNRPN、IGF2和H19),印记基因的作用原理以及对肌肉发育的影响。  相似文献   

一批乌拉圭奶牛境外预检及分析     

李志荣  徐团才  张彦明 《动物医学进展》2017,38(4)

受国家质检总局动植司委派,两位预检兽医官赴乌拉圭执行进口奶牛预检任务。该批荷斯坦奶牛来自乌拉圭13个省305个农场,初选奶牛共13 162头。农场检疫共采集血样13 002份,送往乌拉圭国家兽医实验室DILAVE进行疫病检测,检测疫病包括牛白血病(EBL)、牛病毒性腹泻(BVD)、副结核病(PT)、布鲁菌病和口蹄疫(FMD),共检出疫病呈阳性的牛(以下简称阳性牛)2 459头,阳性率18.91%,阳性牛全部淘汰,10 543头牛合格。经过临床检查后共有10 217头奶牛进入乌拉圭畜牧业、农业和渔业部(MGAP)批准的出口活牛隔离场Rubadel SA。隔离场共采集血样10 197份进行检疫,送DILAVE实验室进行EBL、BVD和FMD的检测,检出阳性牛227头,阳性率2.23%,9 970头牛合格。240头"哨兵动物"进行口蹄疫液相阻断ELISA检测合格。隔离期间同时进行了钩端螺旋体病治疗、体内外寄生虫驱除及口蹄疫(A型、O型)、传染性鼻气管炎(IBR)、炭疽(Anthrax)的疫苗注射。监装重点核对奶牛数量、耳号等信息,最终共计9 604头合格奶牛装船启程运往中国。预检兽医官与MGAP官方兽医一起顺利完成了该批进口奶牛产地检疫任务。  相似文献   

猪流行性腹泻病毒陕西渭南株的遗传变异     

吴萌萌  许夏澎  张彦明  周宏超  郭抗抗 《西北农业学报》2017,26(9):1273-1280

从陕西省渭南某规模化猪场采集疑似猪流行性腹泻(PED)仔猪病料进行病毒检测,旨在从基因遗传变异方面分析疾病发生的可能原因。通过RT-PCR从疑似仔猪20份小肠样品中检测到9份PED病毒阳性样品,并扩增出PED病毒M、ORF3和S基因的部分序列。序列分析结果表明,与CV777疫苗株对比,样品渭南(WN)株PEDV M基因高度保守,同源性为98.2%;ORF3基因存在11处碱基突变,同源性为98.2%;S基因突变较大,存在4个插入区域,分别是164~166、177~179、181~186和416~418nt,内分核心中和表位区(COE,499~638位氨基酸)存在9个氨基酸突变位点。遗传分析显示,WN株M基因与中国近期分离毒株亲缘关系较近;ORF3基因与同处在G1群中的中国毒株亲缘关系较近,而与CV777疫苗株亲缘关系较远;S基因与中国早期分离毒株及CV777疫苗株亲缘性较远,与当前的流行株亲缘关系密切。这些结果表明,WN株与CV777疫苗株相比,有明显的遗传变异倾向,可能导致目前PEDV疫苗免疫效果下降,PED疫情大规模流行。  相似文献   

牛传染性鼻气管炎病毒内标荧光定量PCR检测方法的建立与应用   总被引：1，自引：1，他引：0  

季新成  牛国辉  员丽娟  张彦明  李鹏  段晓东  于学辉 《中国兽医学报》2010,30(6)

根据牛疱疹病毒1型(BHV1)gB基因序列,设计高度保守的引物和荧光探针,并扩增包含有荧光PCR扩增区域的核酸片段,通过凝胶纯化回收,将该片段克隆至pMD18-T载体,经鉴定后获得目标模板。通过碱基重排和引物设计,用搭桥法PCR扩增,获得BHV1荧光定量PCR内标模板。对内标模板的添加量和反应条件进行优化,建立了含有内标物的荧光定量PCR检测体系。该体系可以检测到10个拷贝/PCR反应的重组质粒,对BHV1可检测到0.01TCID50的病毒粒子,灵敏度比常规PCR和病毒分离高10～100倍,与不加内标的荧光PCR检测灵敏度相当。更重要的是,内标模板可以对反应体系进行监测,指示并校正假阴性结果,从而达到提高PCR检测准确率的目的。对临床收集的40份牛精液(其中8份已经鉴定为阳性)和10份牛鼻腔拭子(其中2份已经鉴定为阳性)用该体系进行检测,均得到预期结果。该方法的建立可用来对临床样品中BHV1的快速检测和实验室的质量控制。  相似文献   

太白蓼乙酸乙酯提取物的药效学研究     

张为民  张彦明  卿素珠  郭抗抗 《中国兽医学报》2010,30(10)

通过抗腹泻、抗炎、对免疫功能调节、体外抑菌和抗病毒等相关试验,研究了太白蓼乙酸乙酯提取物(PTKE)及PTKE柱层层析进一步分离物EB的药效学作用。结果表明,PTKE对蓖麻油和番泻叶所致的小鼠腹泻均有极显著的抑制作用(P0.01);对乙酸所致家兔肠黏膜毛细血管通透性增高有极显著抑制作用(P0.01),对腹腔注射醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高及皮内注射二甲苯致皮肤毛细血管通透性增高也均有显著的抑制作用(P0.05);饮水中分别加入50、100、150 mg/kg的PTKE水溶液观察其对雏鸡免疫功能的影响,结果显示,在雏鸡生长的14～42日龄,各试验组雏鸡胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数与对照组相比差异显著或极显著(P0.05或P0.01);EB质量浓度为156μg/L时,其对脾脏、胸腺、法氏囊和外周血淋巴细胞的增殖显著高于细胞对照组(P0.01);PTKE和EB对临床分离鸡的2株大肠埃希菌和1株沙门菌具有一定的体外抑制作用;EB对新城疫病毒在鸡胚内增殖具有一定的抑制作用。以上结果提示,太白蓼提取物有明显的抗腹泻和抗炎作用,并能促进雏鸡免疫器官发育及淋巴细胞的增殖,具有一定的抑菌和抗病毒作用。  相似文献   

PCV-2陕西株ORF2基因的克隆、分析及原核表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

邢福珊  许信刚  童德文  王志昇  刘文静  宁蓬勃  张彦明 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2010,(3):1-6

【目的】克隆猪圆环病毒2型陕西分离株(PCV-2SX株)ORF2基因,并进行序列分析及原核表达。【方法】根据GenBank公布的PCV-2ORF2基因的核苷酸序列,设计并合成1对特异性引物,应用PCR方法扩增PCV-2SX株ORF2全长基因,将其克隆入pGEM-T载体中,进行测序及序列分析。然后,将ORF2基因亚克隆入原核表达载体pET-32a中,在大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blotting鉴定。【结果】扩增到了702bp的PCV-2ORF2全长基因。序列分析结果表明,PCV-2SX株ORF2基因与广西分离株(EF675237,ChinaGX)和巴西分离株(DQ861802,am21)的核苷酸序列同源性均达98.0%,氨基酸序列同源性均达98.3%,与其他毒株的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别在89.9%～97.9%和88.5%～98.0%。SDS-PAGE可检测到分子质量约为48ku的融合蛋白,主要以可溶性蛋白形式存在。Western-blotting分析表明,重组蛋白可被PCV-2阳性血清所识别。【结论】成功克隆了PCV-2SX株ORF2基因,并进行了原核表达。  相似文献   

农村留守儿童监护制度的缺失及完善   总被引：1，自引：0，他引：1  

张彦明 《信阳农业高等专科学校学报》2010,20(3):69-71

留守儿童是指父母双方或一方外出务工半年以上,其子女留在家乡或托人照看未满18周岁的未成年人。以法律的形式明确监护人的权利和义务,规定非亲权监护人的报酬请求权,建立监护监督制度和留守儿童工作机制,是维护留守儿童合法权益的关键。  相似文献   

猪圆环病毒多重PCR检测方法的建立     

杨泽晓  庞歌  王印  姚学萍  张彦明  杨增岐  汪开毓  戴晓懿 《西北农业学报》2010,19(11):8-12

为建立PCV1和PCV2混合感染快速检测的PCR方法,根据GenBank已发表PCV1和PCV2全基因组序列,设计合成4条引物,通过PCV1和PCV2阳性质粒的构建、反应条件的优化、敏感性试验和特异性试验,建立了PCV多重PCR检测方法,可扩增出PCV1和PCV2长度分别为726 bp和433 bp特异性目的基因片段。结果显示,建立的PCV多重PCR可检测到5×101个拷贝的PCV1和PCV2目的基因,HCV、PRV、PPV核酸扩增均为阴性,具有良好的特异性和敏感性。并初步应用建立的方法对42份采自四川省部分地区的样品进行检测,结果表明,PCV1阳性率为33.3%,PCV2阳性率为45.2%,其中PCV1和PCV2混合感染阳性率为16.6%。  相似文献