猪流行性腹泻病毒截短M基因克隆、生物信息学分析及其截短片段表达     

张明亮  耿亚春  连凯琪  马磊  常莹  王双山  张福良 《中国畜牧兽医》2022,49(4):1479-1487

【目的】 探索猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)截短M蛋白的序列结构特征与原核表达情况。【方法】 根据已公布的PEDV M基因序列设计1对特异性引物,以从阳性病料提取的RNA为模板,通过RT-PCR扩增并克隆PEDV截短的M基因(rM),应用在线生物信息学软件预测rM蛋白的结构特征。将得到的截短的M基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建原核表达质粒pET-28a-rM,将鉴定正确的pET-28a-rM转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,成功构建重组菌株BL21(pET-28a-rM),并对重组菌株进行IPTG诱导表达,优化重组蛋白的表达条件,重组蛋白经亲和层析纯化后进行SDS-PAGE及Western blotting检测,同时应用重组蛋白制备兔抗rM多克隆抗体。【结果】 试验克隆得到大小为366 bp的截短的M基因,重组蛋白由121个氨基酸组成,预测蛋白分子质量大小约为12.8 ku。该蛋白的二级结构由无规则卷曲、延伸链、β-转角和α-螺旋组成,占比分别为48.76%、33.88%、9.09%和8.26%。该蛋白不含信号肽,但有跨膜区,包含21个磷酸化位点。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白大小约为15 ku,以包涵体蛋白形式存在,在37 ℃、1 mmol/L IPTG诱导12 h时蛋白的表达量最高。Western blotting检测结果表明,重组蛋白与PEDV阳性血清具有较好的反应原性,纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔获得的高免血清效价高于1∶51 200。【结论】 本研究成功克隆PEDV 截短的M基因,对rM蛋白进行了生物信息学分析,获得了高纯度的rM蛋白,为猪流行性腹泻治疗及检测用生物制品的开发奠定了基础。  相似文献   

一起由劣质饲料引起蛋鸡产蛋量下降的调查报告     

郝贵增  靳玉芬  张福良  刘书梅 《黑龙江畜牧兽医》2002,(7):19-20

20 0 0年 7月份 ,安阳市郊一中型国有利民鸡场大批鸡只突然发病、死亡 ,产蛋量持续下降。进行了一系列诊断后 ,确诊为劣质饲料中毒 ,并采取了综合性防治措施 ,现将诊疗结果报告如下。1　发病经过利民鸡场原有蛋鸡 2 5 0 0余只 ,于 2 0 0 0年 5月 12日鸡 2 0周龄开始全部使用某饲料厂的 134# 料精 ,以后数日一直连续使用。 7月 14日场方从该饲料厂又购买了 134# 料精 2 .0 4ｔ,使用后产蛋量持续下降 (使用前 7月 10日产蛋数为 14 82枚 ,7月 15日产蛋数为 12 10枚 ,相差 2 72枚 ) ,此时鸡群正值 2 9周龄 ,应为产蛋上升期 ,而 7月 15日产蛋率只…  相似文献   

抗肿瘤抗生素研究进展   总被引：1，自引：0，他引：1       下载免费PDF全文

杨鸣琦  张福良  路宏朝 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2005,33(12):27-33

对烯二炔类、糖肽类、蒽环类、苯并二吡咯类、核苷类、β-内酰胺类、苯醌类等7类抗肿瘤抗生素的研 究开发、作用机制、药效及临床应用现状进行了综述,提出今后抗肿瘤抗生素的研究应在新的分子靶点寻找、前药 研究、多药耐药性克服等方面有所加强。  相似文献   

荷斯坦奶牛心电图正常值的测定     

靳玉芬  郝贵增  张福良  汪怀同  董文庆 《河南畜牧兽医(综合版)》1999,(3)

近年来，随着我国奶牛饲养量的迅速增加，其疾病的诊治已具有重要的意义。在兽医临床工作中，心电图是诊断心脏疾患的有效辅助手段，但目前奶牛心电图方面的资料却见之甚少，给奶牛心脏疾病的诊断带来诸多不便。为了探求奶牛心电图的测定方法及正常值，给奶牛心肌疾患定位诊断提供依据，我们对46头荷斯坦奶牛心电图进行了测定。l材料与方法1．l供测动物随机选择安阳市郊区某奶牛场黑白花母奶牛46头，营养中等，近一个月未发病用药，呼吸、脉博、体温均正常。1．2仪器及器材XDH—3型热笔式心电图机：鳄鱼夹型电极；导电糊（10％NaCI液）；…  相似文献   

两株不同来源的猪圆环病毒1型ORF2基因的克隆与序列分析     

张福良孙丽华  宋长绪杨鸣琦郝永清  刘燕玲武占银 《中国兽医科技》2006,36(4):282-286

根据GenBank中猪圆环病毒1型（PCV1）ORF2基因序列，设计了1对引物，应用PCR方法从PK-15细胞和疑似患断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）的仔猪组织病料中分别扩增出了PCV1 ORF2全基因（702bp）。将此基因片段克隆入pMD18-T载体，筛选获得了重组质粒pMD-PCV1-ORF2，并对其进行了测序与分析。结果表明：所克隆的PK-15来源和组织病料来源的ORF2基因的同源性为99．4％，二者与GenBank中登录的PCV1 ORF2基因的同源性为97．3％～99．9％，与PCV2 ORF2基因的同源性为67．9％～68．4％，二者编码的蛋白在几个功能区比较保守。抗原表位预测表明，PCV1 ORF2编码的蛋白具有良好的免疫原性。  相似文献   

猪病与生物安全     

宋长绪  张福良 《猪业科学》2007,24(11):21-23

养猪业是我国农业中的优势产业,在农业和农村经济中占有重要地位,养猪业的发展不仅满足了人们对猪肉及其产品的消费需求,而且为农民增收、农村劳动力就业、粮食转化及推动相关产业的发展做出了重大贡献.  相似文献   

养猪生产与生物安全     

靳玉芬  张福良  蔡敏  靳国旺 《动物检疫》2008,(7):11-12

1生物安全的提出 生物安全是近年来国外提出的有关集约化生产过程中保护和提高畜禽群体健康的新理论。猪场的生物安全体系是指在养猪生产过程中防制传染病人猪场．造成疫病流行的技术措施（包括致病性病原菌（细菌、病毒和寄生虫）进入、增强自体免疫力和对已侵入的致病菌（毒）不能连续传染给其它猪只等一系列技术措施和防疫免疫制度的建立等）和防止禁用、滥用抗生素及其它违禁药品,  相似文献   

BHK-21细胞中猪乙型脑炎病毒动态增殖的研究     

张福良  马圣明  邢月腾  刘芳  曹金泽 《黑龙江畜牧兽医》2023,(5):75-79+136-137

为了研究猪乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)在仓鼠肾细胞(BHK-21细胞)中的增殖情况，试验首先建立了实时荧光定量PCR方法，并检测该方法的敏感性、特异性和重复性，然后利用建立的实时荧光定量PCR方法和病毒半数组织感染量(TCID₅₀)方法测定并比较猪JEV在BHK-21细胞中的增殖规律。结果表明：建立的猪JEV实时荧光定量PCR检测方法的扩增效率为99.3%,敏感性、特异性和重复性良好，检测敏感性可以达到1.0×10¹ copies/μL;TCID₅₀方法测定的细胞悬液和细胞培养上清液中的病毒含量分别为1.0×10^5.44 TCID₅₀/0.1 mL和1.0×10^4.86 TCID₅₀/0.1 mL,实时荧光定量方法测定的病毒粒子数量分别为1.0×10^7.50 copies/μL和1.0×10^5.60 copies/μL,两种方法在细胞悬液中...  相似文献