牛源产志贺毒素大肠杆菌分离株的毒力基因分布和遗传进化分析     

薛涛  李丽  高清清  陈先亮  李甜甜  曲信芹  高崧 《中国畜牧兽医》2017,44(10):2878-2885

为了探讨牛源产志贺毒素大肠杆菌（Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC）分离株在毒力基因分布和遗传进化方面与人源EHEC O157菌株之间的关系,本试验选择收集来自江苏某奶牛场的STEC菌株18株以及人源、羊源、猪源、禽源STEC参考菌株9株,参照美国疾病预防控制中心PulseNet推荐的方法,运用XbaⅠ酶进行酶切并完成脉冲肠凝胶电泳（PFGE）分型和聚类分析;同时对部分STEC菌株进行毒力基因检测。结果表明,经毒力基因检测,不同来源的O157菌株毒力基因分布不尽相同,其中牛源STEC O157与参考株EHEC O157∶H7（EDL933W）的基因排谱最为相近;牛源STEC O18和O26的基因排谱与参考株EHEC O157∶H7（EDL933W）类似,但存在部分基因的缺失。对27株不同来源的STEC分离株进行PFGE,产生了22种不同的酶切图谱。总体来看,不同来源的STEC Dice相似性系数在72%~100%之间。牛源O157分离株与猪源及禽源O157菌株的相似度偏低,而与两株人源O157分离株的相似度偏高,Dice相似性系数在83%~95%之间,牛源O26（克隆群Ⅶ、Ⅷ）与人源O157的相似性系数 > 82%。显然,从牛群中分离到的部分STEC菌株与人源EHEC O157具有较近的遗传进化关系。  相似文献   

依赖药敏试验治疗鸡大肠杆菌病的误区     

刘静  贺生中  陈祥  陆江  高崧 《黑龙江畜牧兽医》2010,(7):98-98

<正>目前防治鸡大肠杆菌病的主要方法仍然是通过药物控制,一般通过药敏试验选择敏感药物进行治疗,但是抗生素药物的滥用以及误用常导致病原菌产生耐药性,所以防治效果并不理想。笔者在大量药敏试验中发现,通过药敏试验筛选有效治疗药物时  相似文献   

表达PCV2 Cap蛋白重组杆状病毒对小鼠的保护力试验     

王海燕  郭振光  盛瑜  陈义平  吴艳涛  高崧  刘秀梵 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2008,29(2)

PCR扩增猪圆环病毒2型(PCV2)的衣壳蛋白(Capsid)基因,鉴定后克隆到杆状病毒转移载体pFastBacTM1中,获得重组转移载体pFastBac-Cap,转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,经转座作用,蓝白菌落筛选得到含cap基因的重组穿梭载体Bacmid-Cap,以脂质体介导的方法将重组穿梭载体转染Sf9昆虫细胞,获得重组病毒reBacCap,PCR能够扩增出相应大小的片段,间接免疫荧光分析表明,PCV2阳性血清能使reBac-Cap感染的Sf9昆虫细胞出现特异性绿色荧光,表明reBac-Cap在Sf9细胞中成功表达PCV2-Cap蛋白.动物试验表明该重组病毒对小鼠有一定的保护力.  相似文献   

大肠杆菌F18菌毛FedE蛋白的表达与鉴定   总被引：5，自引：2，他引：3  

成大荣  徐建生  孙怀昌  高崧  刘俊斌 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2005,26(1):5-8

根据已经发表的F18菌毛E亚单位的基因序列(fedE)设计1对引物,利用PCR技术从重组质粒TFl07E中扩增到一段序列,并按预定的阅读框架插入到表达性质粒载体pGEX-6p-1中的谷胱苷肽转移酶(GST)基因的下游,获得重组质粒pPFedE,并转化大肠杆菌BL21获得重组菌PPFedE。琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析表明：该序列大小为459bp,与GENEBANK中的FedE结构编码序列(Z26520)完全一致。通过对菌体裂解物的SDS—PAGE电泳分析以及Western blotting鉴定,证明重组大肠杆菌PPFedE的可以表达融合蛋白形式的FedE(命名为GST-FedE),即FedE蛋白(16．297ku)与谷胱苷肽转移酶(27．335ku)相连组成分子量为43．632ku的融合蛋白。  相似文献   

PRRSV血清抗体间接ELISA检测方法的建立     

陈义平  邓珣  彭长凌  刘文博  吴晓东  李林  王志亮  刘秀梵 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2006,27(4):1-4

用亲和层析纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组核衣壳蛋白GST-N作为诊断抗原,建立检测PRRS血清抗体的间接ELISA方法。抗原最佳包被量为每孔400 ng,待检血清最佳稀释度为1∶100,待检血清样品的D_(490 nm)≥0．43D_(po■) 0．57D_(neg)判为阳性,反之判为阴性。对采自14个猪场的364份猪血清样品进行检测,PRRS阳性率为51．4%,略高于HerdChek ELISA的阳性检出率49．7%。与HerdChek ELISA相比,间接ELISA的敏感性为94．5%,特异性为91．3%,总符合率为92．9%,Youden指数为0．86。同时还证明该方法具有良好的批间和批内重复性,并且不与猪瘟、猪伪狂犬病等阳性血清发生反应。该方法的成功建立将为我国PRRS的防制工作作出贡献。  相似文献   

一起猪多杀性巴氏杆菌与猪圆环病毒2型混合感染的诊断     

高杏  董向磊  王小波  高崧 《黑龙江畜牧兽医》2014,(3):124-126

为了确定引起猪出现发热、呼吸困难、进行性消瘦等症状的病原,试验采用细菌分离、间接免疫荧光试验检测抗原、PCR检测以及病理检查等方法进行诊断。结果表明:从扑杀猪体内分离到巴氏杆菌,并经16S rRNA测序判定为多杀性巴氏杆菌(Pm);通过间接免疫荧光试验鉴定出猪圆环病毒2型(PCV-2)。说明引起猪患病的病原为Pm和PCV-2。  相似文献   

家养野猪断奶多系统衰竭综合征的诊断     

王海燕  朱丽娜  程旭  焦库华  高崧 《中国兽医杂志》2009,45(11)

江苏某养殖户养殖18头野猪,2007年10月20日到本院动物医院就诊.据该养殖户介绍,该猪为2月龄,18头中有10头发病,已死亡2头,主要是断奶后发育迟缓、消瘦、气喘,剖检可见淋巴结水肿、出血;肺脏淤血、水肿;大、小肠出血;肾有出血点;肝淤血、水肿;胆汁浓稠;脾、胰腺萎缩.  相似文献   

鸡传染性法氏囊病中等毒力活疫苗对H9亚型禽流感灭活疫苗体液免疫应答影响的研究   总被引：2，自引：1，他引：1  

杨恒东  刘学贤  高崧 《中国畜牧兽医》2009,36(9):144-146

将150只维扬麻鸡商品雏鸡随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ 5组,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组对应免疫A、B、C 3种IBD活疫苗和同一种H9亚型AI灭活疫苗,Ⅳ组为免疫对照组,只免疫H9亚型AI灭活疫苗,Ⅴ组为空白对照组。IBD中等毒力活疫苗二免后,定期监测鸡群H9亚型AI灭活疫苗免疫后的HI抗体消长情况,以评价这3种IBD活疫苗对H9亚型AI灭活疫苗体液免疫应答的影响。结果发现,45日龄前（即IBD疫苗二免后23 d前、H9亚型AI灭活疫苗二免后20 d前）,Ⅰ组与Ⅳ组、Ⅱ组与Ⅳ组H9亚型AIV抗体水平均差异显著（P<0.05）,Ⅲ组与Ⅳ组间差异不显著（P>0.05）。在45日龄后（即H9亚型AI灭活疫苗二免20 d后）,试验鸡的H9亚型AIV HI抗体水平均无显著差异。  相似文献   

断奶仔猪源大肠杆菌F18菌毛的分子流行病学研究     

成大荣  孙怀昌  徐建生  高崧 《中国预防兽医学报》2006,28(2):231-234

利用F18菌毛a因子单克降抗体以及已建立的鉴定F18菌毛及其亚型的双重PCR法,对来自断奶仔猪水肿病和／或腹泻病例的60株VTEC、24株VTEC／ETEC以及24株ETEC的进行了F18菌毛检测,以了解F18ab^＋和F18ac^＋大肠杆菌在江苏省断奶仔猪群的分子流行病学。结果表明：通过F18菌毛a因子单克隆抗体,可检测出52株大肠杆菌为F18^＋,检出率为48．15％;而通过双重PCIL方法,共检测出63株大肠杆菌为F18^＋,检出率为58．33％,其中53株（49．07％）为F18ab^＋10株（92．6％）为F18ac^＋。另外还发现：在VTEC、VTEC／ETEC以及ETEC的菌株之间,这2种F18菌毛亚型的分子流行病学是不同的。在VTEC中,F18ab^＋,菌株37株（61．67％）,未发现F18ac^＋菌株;在VTEC／ETEC中,F18ab^＋菌株15株（62．50%）,F18ac^＋菌株8株（33．33％）;而在ETEC中F18ab^＋菌株只有1株（4．17％）,F18ac^＋菌株只有2株（8.33％）。以上数据表明：④PCR法检测F18菌毛优于单抗法;②F18菌毛是VTEC／ETEC、VTEC的重要致病因子,而在ETEC中则明显低于VTEC／ETEC和VTEC;⑧F18ab^＋菌株一般为SLT-IIe^＋,而F8ac^＋菌株一般为STI^＋。  相似文献   

嵌合型猪圆环病毒(PCV1-2)及PCV2 ORF2真核表达质粒对商品猪的免疫保护     

程旭  宋益  盛瑜  高崧  刘秀梵 《中国兽医学报》2009,29(9)

应用本实验室构建的嵌合型猪圆环病毒(PCV1-2)及真核表达质粒pcDNA3.1/V5-His-ORF2作为免疫原免疫母源抗体ELISA效价在0.07～0.60不等的商品猪,9头猪随机分为4组,1组(3头)肌肉注射免疫103.5TCID50的PCV1-2/头,2组(2头)肌肉注射真核表达质粒200μg/头,3组(2头)肌肉注射空载体(pcDNA3.1)200 μg/头,4组(2头)不免疫作为攻毒对照组.于免疫后42 d,PCV1-2组及真核表达质粒组产生了PCV2抗体.免疫后42 d所有组攻毒PCV2和PRRSV,剂量分别为2×104.5TCID50/头和106TCID50/头.攻毒后21 d,攻毒对照组猪淋巴结比免疫组显著肿大,免疫组猪血清、淋巴结中PCV2病毒载量低于对照组,攻毒对照组猪淋巴结中PCV2抗原含量高于免疫组.这些结果表明,嵌合型PCV1-2及真核表达质粒肌肉注射免疫商品猪后,对PCV2感染能产生保护性免疫应答,有可能成为候选疫苗.  相似文献