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猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5和M蛋白共表达的自杀性DNA疫苗的构建及其免疫应答 总被引：12，自引：1，他引：12
【目的】探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）自杀性DNA疫苗的免疫效果。【方法】将ORF5和ORF6基因分别插入可以同时表达两个外源基因的表达载体pSCA2的26S启动子下游，获得ORF5和ORF6双基因共表达自杀性DNA疫苗pSFV-56。【结果】Western blot检测证实ORF5和ORF6基因获得正确表达，并且所表达的GP5和M蛋白可以形成异源二聚体。将pSFV-56免疫Balb/c小鼠，首免后4周可检测到特异性PRRSV中和抗体，首免后8周的中和抗体最高可达1﹕32，同时还可检测到较高的特异性细胞免疫应答。进一步将pSFV-56免疫断奶仔猪，二免后4周即可产生1:8～1:16的中和抗体，直到二免后6周仍维持这种高水平的中和抗体，而且也可检测到较高的特异性细胞免疫应答。【结论】上述研究结果表明pSFV-56具有良好的免疫原性和诱发免疫动物产生较高免疫应答的能力。 相似文献
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牛疱疹病毒I型ul49（VP22）基因的序列分析及其表达 总被引：1，自引：0，他引：1
以牛疤疹病毒I型（BHV—I）国内地方分离株感染的细胞培养物制备PCR模板,扩增出大小约0．77kb的ul49基因完整编码区片段,将扩增片段克隆到pMD18-T载体中,获得含ul49基因的重组质粒pMD—VP22。采用双脱氧末端终止法进行序列测定,发现与国外Cooper株ul49基因序列完全一致,说明ul49基因相当保守。进一步将BHV—lul49完整编码区片段插入原核表达载体pET-28a和真核表达载体pEGFP—C1中,获得分别与6xHis融合的原核表达质粒pET-28aVP22和与EGFP融合的真核表达质粒pEGFPVP22。将pET-28aVP22转化大肠杆菌BL21（DE3）,经IPTG诱导,SDS—PAGE电泳检测发现在58kDa处有一条特异性的表达带。利用脂质体介导,将pEGFPVP22转染PK-15细胞,经G418加压筛选,获得稳定表达VP22的细胞克隆。在倒置荧光显微镜直接检测未固定的活细胞,发现pEGFPVP22转染细胞能发出很强的荧光并主要集中在细胞核中,而对照载体pEGFP—C1转染细胞的荧光分布于胞浆。 相似文献