PCV2的PCR鉴定及其相关序列分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

杨宗照  方维焕 《浙江农业科学》2005,(6):496-498

设计合成了2条猪圆环病毒2型(porcine circovirus type2)PCR引物,对杭州地区发现的PCV2可疑病例进行PCR鉴定,并优化了PCR反应条件,进行了敏感性、特异性试验,对其扩增序列进行测序比较.结果显示,用所设计的2条引物成功扩增了PCV2基因片段,PCV2基因片段序列与参考序列相似性达到91.2%.说明所设计的引物用来检测临床病理中PCV2是准确可行的.对杭州地区的56份病料的检测结果:感染率为57%,表明杭州地区的感染已经比较严重.  相似文献   

嵌合猪瘟病毒基因Ⅱ型E2抗原区的重组C株病毒 构建及其生物学特性     

童超  陈宁  廖迅  袁雪梅  李肖梁  方维焕 《中国农业科学》2013,46(1):179-186

【目的】目前使用的基因Ⅰ型猪瘟兔化弱毒C株疫苗是公认的安全、有效疫苗,但近年来基因Ⅱ群的猪瘟流行毒株比例增高,因此对猪瘟(CSF)的有效防控提出了更高要求。本研究旨在通过反向遗传学技术构建适应CSFV基因Ⅱ型的新型C株疫苗,为标记疫苗的开发奠定基础。【方法】在构建的C株感染性克隆基础上,拯救嵌合CSFV基因Ⅱ型HZ1-08毒株E2抗原区的重组C株病毒RecCHZE2,并分析其致病性和免疫原性。【结果】重组嵌合病毒RecCHZE2接种家兔后出现典型的定型热,兔脾脏肿大;重组嵌合病毒RecCHZE2接种猪只后没有发热和明显的白细胞减少,在接种后第12天检测到一过性的病毒血症;对接种猪血清检测结果表明,针对2型毒株的相应抗体在接种后的20 d达到高峰;接种猪血清针对C株和HZ1-08毒株的中和抗体效价相当,但C株免疫猪血清对流行毒株的中和抗体水平降低。【结论】重组嵌合病毒RecCHZE2不仅保留C株病毒弱毒的特性,且可提高针对Ⅱ型流行毒株的抗体水平。  相似文献   

禽肉弯曲菌污染分析及冷藏条件下失活动力学特征     

刘玺  潘航  NarayanPaudyal  方维焕  李肖梁 《浙江农业学报》2016,28(11):1834

为了解空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)和结肠弯曲菌(Campylobacter coli)在浙江省肉鸡产业链中的污染状况,及其冷藏过程中的失活特征。研究采用多重PCR方法对肉鸡养殖、屠宰和销售环节中分别采集的肛拭子、屠宰场环境和鸡肉等样品进行检测,平板计数法对人工污染鸡肉进行活菌数检测,用于失活特征分析。结果显示,采集的样品中,C. jejuni和C. coli的检出率分别为45.3%(182/402)和4.9%(20/402);其中,养殖环节中的检出率分别为81.2%(65/80)和0,屠宰环节中的检出率分别为30.5%(48/157)和5.1%(8/157),销售环节中的检出率分别为41.8%(69/165)和7.3%(12/165)。在6℃冷藏条件下,鸡肉中的C. jejuni和C. coli失活曲线具有相似的特征,在30 d贮藏期内,lg cfu分别下降了1.98和2.19;其中,0~14 d细菌数量下降速度较快,14~30 d细菌数量下降较为平缓。Log-logistic模型相比于Weibull模型对2种细菌的失活曲线有较好的拟合性。上述研究表明,肉鸡养殖、屠宰和销售环节中均存在着一定程度的空肠弯曲菌和结肠弯曲菌污染,其中,销售环节中检出率高于屠宰环节;在6 ℃冷藏条件下,Log-logistic方程作为2种菌的一级预测生长模型具有较好的拟合性。  相似文献   

不同猪瘟疫苗类型及剂量的抗体反应特性研究     

毛文杰  陈宁  曲健  唐宇龙  方维焕 《浙江农业学报》2010,22(1):0

随机选择3个猪场, 从9头母猪生下的仔猪中挑选81头仔猪。随机分成9组,每组又分为3个小组,每小组3头,分别免疫猪瘟组织苗(A)、猪瘟细胞苗(B)和猪瘟脾淋苗(C),各疫苗分别采用1头份、2头份和3头份3个剂量。于25日龄首免疫前后不同时间点采血,分离血清。应用ELISA和IHA两种方法分别对采集的540份血清检测猪瘟抗体。不同类型的猪瘟疫苗免疫试验结果表明：猪瘟脾淋苗免疫效果较好,但不同疫苗之间的抗体水平差异不显著。不同免疫剂量的试验结果显示：3种疫苗以3头份的剂量免疫后抗体反应略高于1头份和2头份,二免后都能获得较高的抗体水平。  相似文献   

中华鳖MyD88部分序列克隆及其在组织中的表达差异分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

朱炳林  李俊  方维焕  李肖梁 《水产学报》2010,34(7):1018-1024

MyD88(Myeloid differentiation factor 88,MyD88)是多数TLRs(Toll like receptor,TLRs)信号转导过程中的关键接头分子。研究根据MyD88(Myeloid differentiation factor 88,MyD88)TIR结构域(Toll-like/IL-1 receptor domain)保守区设计简并引物,通过PCR扩增,成功地从中华鳖脾脏cDNA中扩增出351bp的目标序列。测序后经结构域和序列比较分析,扩增片段为中华鳖的MyD88 TIR结构域。该序列与大黄鱼、鸡等脊椎动物的MyD88的TIR结构域序列同源性和相似性分别为72.9%～86%和77.6%～83.6%。以热灭活嗜水气单胞菌刺激中华鳖后,经荧光定量PCR检测,在48h内,肝、脾和肾组织中MyD88 mRNA相对表达量均出现不同程度的增加,尤以脾脏中的增幅最为明显,为对照组的6.89倍;中华鳖心脏成纤维样细胞经20ng LPS刺激后1～8h,MyD88表达量有所提高,24h的表达量最高。该研究结果将为开展中华鳖天然免疫奠定良好基础。  相似文献   

两种抗菌素油剂防治奶牛干奶期乳房炎的疗效比较   总被引：4，自引：0，他引：4  

方维焕  裘志明 《浙江农业大学学报》1990,16(3):285-288

  相似文献   

荧光法快速鉴定大肠杆菌的研究（简报）     

方维焕  蒋成东  李央群  施明华 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》1994,(4)

荧光法快速鉴定大肠杆菌的研究（简报）方维焕，蒋成东，李央群，施明华（浙江农业大学动物科学学院动物医学系，杭州３１００２９）ＴｅｎｔａｔｉｖｅＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＥｓｃｊｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉｗｉｔｈｔｈｅＳｕｂｓｔｒａｔｅ－ｄｅｆｉｎｅ...  相似文献   

沿海地区副溶血弧菌的表型及其主要毒力基因分布特征     

周向阳  王淑娜  周秀锦  方维焕 《华北农学报》2011,26(1):192-195

为了调查浙江沿海地区副溶血弧菌的分布及其携带毒力基因的特征,在舟山、象山、温州三地实地采样385份,包括海水、泥土和水产品等,共分离到副溶血弧菌菌株278份,其中27株为tdh基因阳性,阳性率为9.7%,trh与ureC基因的阳性率分别为22.3%与11.8%,提示浙江沿海地区广泛存在着致病性副溶血弧菌污染.将不同来源...  相似文献   

2005-2008年浙江省生猪主产区猪戊型肝炎血清流行病学调查   总被引：1，自引：0，他引：1  

帅江冰  张晓峰  徐晶靓  陈宁  方维焕 《畜牧兽医学报》2009,40(7)

本研究旨在建立检测猪戊型肝炎病毒(HEV)感染的间接ELISA方法,并将其用于分析浙江省生猪主产区猪群的HEV感染状况.首先人工合成并原核表达了HEV ORF2蛋白的主要抗原表位区,免疫印迹显示表达产物对HEV抗体阳性的猪血清具有良好的反应性.以此纯化蛋白为包被抗原建立了猪血清中HEV特异性抗体的ELISA检测方法,检测结果显示其与商品化HEV抗体诊断试剂盒的检测符合率达91.5%.对2005-2008年采集自浙江省不同地区46个猪场的1 330份血清进行了检测,有741份血清检测为猪HEV抗体阳性,平均阳性率为55.7%.其中2005和2006年HEV抗体阳性率分别为62.7%(175/8279)和61.4%(301/490),明显高于2007年的43.1%(59/137)和2008年的48.6%(206/424).同时,66-100日龄中猪的血清HEV抗体阳性率(58.2%,110/189)显著高于30-65日龄小猪(39.7%,73/184)和101-160日龄大猪(44.1%,83/188).从猪场水平来看,仅有3个猪场未检测到HEV抗体,场阳性率93.2%.结果表明本研究建立的ELISA方法切实可行,检测结果显示浙江省猪场中HEV感染相当普遍.  相似文献   

动物源食品中病原微生物污染的监控   总被引：2，自引：0，他引：2  

方维焕 《中国动物保健》2004,(10):20-22

2000年5月举行的世界卫生大会充分认识到了食品安全所涉及的全球性公共卫生问题，建议将其列为世界卫生组织(WHO)的优先领域。WHO于次年2月在总部日内瓦组织召开了“食品安全性战略计划会议”。会议强调了微生物和化学性食品安全性、风险分析与评估、食源性疾病的监测、立法、成员国之间的合作等问题。近年来，我国政府也已经开始注重食品安全问题，逐步开展了食品安全性检测网络建设、食品卫生立法、动物防疫检疫法和兽药残留限量标准制订等工作，取得了初步的成功。但从发达国家的食品安全监管历史和现状以及我国的实际情况可以看出，食品安全问题难以在短期内得到根本性的解决，这是一项长期而艰巨的任务，特别是我国人口众多、人们的生活水平和饮食习惯差别较大，更需要正视食品安全性对国民健康的影响问题。  相似文献