猪源链球菌的分离与鉴定   总被引：6，自引：0，他引：6  

李肖梁  马有智  方维焕  柯春林 《黑龙江畜牧兽医》2003,(10):8-9

从浙江地区98例发病样品猪猪体共分离到56(57％)株猪源链球菌，对12株典型分离株进行培养特性、生化特性及血清型的鉴定，多数具α或β溶血，其中C群链球菌8株。L群链球菌1株，2型猪链球菌2株。未定群1株。小鼠对12株分离株的敏感性有一定的差异。结果表明：浙江地区分离到的猪链球菌已不是单一的C群链球菌，且C群中也不是以往的马链球菌兽疫链球菌亚种。而是停乳链球菌似马亚种。并首次分离到猪链球菌2型。  相似文献   

新城疫病毒F蛋白结构域基因原核表达与抗原表位分析   总被引：1，自引：0，他引：1       下载免费PDF全文

张桂芝  陈亚波  徐程  张朝政  方维焕 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》2006,32(1):82-87

以含新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)基因的重组质粒为模板,设计特异引物进行重叠-延伸PCR扩增获得F基因的抗原结构域基因片段Fa、Fb和Fa-l-Fb,经SalⅠ和NotⅠ酶切后,定向插入原核表达载体pGEX-6P-1,获得重组质粒pGEX-Fa、pGEX-Fb和pGEX-Fa-l-Fb;用定点突变方法获得重组质粒pGEX-Fa-mut.将重组质粒转化大肠杆菌BL21,转化菌经IPTG诱导、提取表达产物进行蛋白电泳和免疫印迹分析.结果表明:Fa-mut、Fb和Fa-l-Fb结构域基因均获得了融合表达,表达产物与NDV阳性血清具有免疫反应性;与pGEX-Fa-mut不同,pGEX-Fa重组质粒在大肠杆菌中未能表达,且转化菌在IPTG诱导过程中未见生长,提示未经突变的Fa片段可能为毒性蛋白.三维结构预测结果显示,目的蛋白片段中均保留F蛋白中原有相应的抗原表位.  相似文献   

减毒沙门氏菌作为原核表达宿主菌和真核表达载体的研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

迪卡  陈雪燕  帅江冰  陈宁  方维焕 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》2006,32(3):237-244

本研究以增强型绿色荧光蛋白(eGFP)为报告基因,探讨了减毒沙门氏菌作为原核表达宿主菌和真核表达载体的可行性.通过多功能分光光度仪测定细菌的OD600和eGFP在大肠杆菌和减毒沙门氏菌中的表达量,结果表明:eGFP在沙门氏菌中的表达量依赖于IPTG的浓度,最佳浓度为0.5 mmol·L-1,增加浓度至0.75 mmol·L-1不能增加eGFP的表达量;而该现象在大肠杆菌中不明显.当IPTG浓度等于或大于0.5 mmol·L-1时,沙门氏菌中eGFP的表达量显著高于大肠杆菌.若以相对荧光度(1个OD600单位的荧光值,即eGFP相对表达量)表示,两种宿主菌的最佳诱导时间均为3 h.Hela细胞侵袭力试验表明该减毒沙门氏菌仍具有侵袭力,同时以脂质体转染为对照,将携带重组质粒pcDNA3-eGFP的减毒沙门氏菌转染Hela细胞,48 h后可观察到绿色荧光,表明了该菌可作为载体将重组质粒携带到细胞内,并使外源基因得到表达.此外,利用基于微孔板的多功能分光光度仪可直接检测荧光强度和OD值,能快速、准确地进行多样本检测,可用于GFP在不同宿主菌或相同宿主菌在不同试验条件下,甚至不同表达载体在相同宿主菌中表达等方面的研究.  相似文献   

萧山鸡IL-2基因真核表达载体构建及其在Vero细胞中的表达     

谢荣辉方维焕  李建荣卢觅佳 于涟 《浙江农业大学学报》2003,29(6):649-654

扩增萧山鸡白细胞介素2(IL-2)基因，将其插入真核表达载体pCI构建重组质粒pCI-IL-2，高压电击法将重组质粒转化入减毒沙门氏菌，并直接转染Vero细胞，提取细胞总DNA，DIG标记探针可检测到阳性杂交信号．用FITC标记的羊抗兔IgG进行间接免疫荧光试验，可检测到特异性黄绿色荧光．SDS-PAGE和Western blotting可检测到18．5kD和14．5kD的蛋白条带．表明减毒沙门氏菌能将重组质粒pCI-IL-2携带进入Vero细胞内表达IL-2，且表达产物具有免疫反应性，为今后研制鸡IL-2基因作为口服免疫增强剂提供了依据．  相似文献   

基于侧向层析原理的赭曲霉毒素A快速检测试纸条的研制          下载免费PDF全文

黄巧莲  金庆日  章先  周一媚  陈彦永  徐露凝  杨永春  程昌勇  田广燕  桂海娈  方维焕  宋厚辉 《浙江农林大学学报》2016,33(3):531-536

针对霉菌毒素精准检测技术的开发对于保障食品安全至关重要。利用胶体金与赭曲霉毒素A单抗偶联物和赭曲霉毒素A-BSA偶联物（OTA-BSA）,开发了一种快速检测赭曲霉毒素A的方法。研究结果表明:①当OTA-BSA配制终质量浓度为4.8 g·L-1,质控线用羊抗鼠IgG配制终质量浓度为1.5 g·L-1,硝酸纤维素（NC）膜的包被量为1.0 μL·cm-1时呈现最清晰、最均匀的条带。②赭曲霉毒素A胶体金快速检测试纸条的灵敏度达到1.0 μg·L-1,检测时间仅为5 min,非常适合现场快速检测。该检测试纸条具有携带方便、灵敏度高、特异性强等优点。由于本方法检测时间短,灵敏度高,与传统的仪器和酶联免疫检测方法相比,在野外和临床检测中更具有推广应用价值。图5表1参12  相似文献   

利用PicoGreen作为检测探针建立基于核酸适配体识别的玉米赤霉烯酮快速检测方法     

金庆日  苗灵燕  田广燕  方维焕  宋厚辉 《延边大学农学学报》2018,(2)

玉米赤霉烯酮(ZEN)是一种能对动物和人类产生毒性的真菌毒素。研发灵敏而准确的玉米赤霉烯酮快速检测技术对于保障食品动物安全至关重要。该研究以PicoGree荧光染料为检测探针,利用其仅与dsDNA结合后才发出荧光的特性(激发波长:480nm,发射波长:520nm),当ZEN不存在时,适配体能够与其互补链结合而形成dsDNA,导致荧光强度增强;当ZEN存在时,适配体与ZEN结合而不能形成dsDNA,导致荧光强度减弱。建立了一种基于核酸适配体识别的ZEN快速检测方法。灵敏度试验表明:该方法的最低检测限为0.1μg/L(0.1ppb),线性范围为0.1~1μg/L(0.1~1ppb)。检测时间可以控制在40min内。特异性试验结果表明:ZEN核酸适配体与桔青毒素(CTN)、赭曲霉毒素A(OTA)、黄曲霉毒素B_1(AFB_1)和伏马毒素B_1(FB_1)等真菌毒素不会出现交叉反应。本研究与传统的基于抗体识别的ELISA快检方法进行比较,Kappa值为0.805,表明二者一致性相当。由于核酸适配体价廉,检测时间短,因此本文开发的ZEN检测方法较常用的ELISA方法更具有推广和应用价值。  相似文献   

美国近20年主要食源性致病菌的分布及耐药性分析——对我国细菌耐药性监控工作的启示     

潘航  李肖梁  方维焕  乐敏 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》2018,(2)

分析美国1996—2016年间人源、动物源和肉类中主要病原菌类别及耐药性,探讨抗菌药使用量与耐药性的关联性,并对我国抗菌药的使用及人源菌株耐药性进行分析,比较两国间在抗菌药使用和细菌耐药性方面的差异。在美国近19万株病原菌中,29%来源于病人,71%来源于动物及其制品,其中,在动物源菌株中不同动物的比例为鸡41%、牛13%、火鸡9%、猪8%;在动物样本和患病病人样本中检出率最高的均是沙门菌(分别占45%和66%),在畜禽肉样品中检出率最高的是肠球菌属(42%),说明在美国沙门菌是动物和人致病或携带的主要食源性病菌。从我国2016年人源性致病菌数据来看,以致病性大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌为主。耐药性数据显示,美国主要使用的6类抗生素和我国主要使用的4类抗生素皆存在较高水平的耐药率,两国较少使用的氨基糖苷类药物也出现高耐药率。但由于我国缺乏长期而系统的耐药性监测数据,因而这种比较显得牵强。因此,建议卫生部门、农业部门和食品药品监督管理机构整合资源,加强对动物养殖、肉类食品、临床病人以及相关环境中耐药菌株的分布与耐药性进行系统监测和数据整合,及时调整用药相关政策,以便从源头上控制细菌耐药性的产生,并在食物链中遏制耐药致病菌、耐药菌和耐药基因的传播,保障国民健康和公共卫生安全。  相似文献   

一个奶牛场奶牛隐性乳房炎病原菌及其流行情况     

晏海涛  叶定生  方维焕  胡松华  刘汉儒  蒋次升 《中国奶牛》1991,(2)

奶牛乳房炎作为一种多因素性疾病,除了易感牛、病原微生物与环境卫生这三者之间的相互影响外,其复杂性还表现在致病菌的多样性。迄今为止,人们已经从乳房巾分离到130多种微生物,其中包括多种纲菌以及真菌、病毒、霉形体等。各种  相似文献   

乳铁素参与乳房链球菌对乳腺上皮细胞的粘附   总被引：2，自引：0，他引：2  

方维焕  张晓峰 《中国兽医学报》2003,23(1):35-37

免疫印迹试验表明，试验用的3株乳房链球菌（Streptococcus uberis)菌株均可与乳铁素（Lactoferrin)结合。培养基中加入乳铁素或乳清可以显著促进细菌与乳腺上皮细胞之间的粘附，抗乳铁素抗体可以特异性地抑制乳铁素或乳清预处理细菌与乳腺上皮细胞的粘附。乳铁素在细菌和细胞之间起着桥梁分子作用。有助于细菌与乳腺上皮细胞之间的粘附和乳腺感染的建立。  相似文献   

前列腺素在牛繁殖上的应用     

B.E.Seguin  方维焕 《动物医学进展》1981,(6)

由母牛产生的一种溶黄体因子控制着黄体的寿命,未孕母牛约在发情周期的第14～15天释放出这种因子,并终止黄体的功能活动,紧接着又发情。而在怀孕时,黄体溶解因子的释放受到抑制,黄体持续存在以维持胚胎的发育。前已有人专论了母牛这种因子  相似文献