以重组mE2蛋白为抗原建立检测猪瘟病毒抗体间接ELISA方法的研究   总被引：18，自引：3，他引：15  

余兴龙  涂长春  李作生  马正海  李红卫  吴健敏  吕宗吉  殷震 《中国预防兽医学报》1999,(3)

以在Ｅ．ｃｏｌｉ高效表达的猪瘟病毒Ｅ２基因主要抗原编码区（ｍＥ２）为抗原,以辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记的兔抗猪ＩｇＧ为二抗,建立了检测猪瘟病毒抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法。经检测筛选出最佳反应条件为：１２μｇ／孔纯化的Ｅ．ｃｏｌｉ表达的ｍＥ２重组蛋白包被酶标板,用１０％的兔血清或马血清进行封闭,以正常Ｅ．ｃｏｌｉ裂解上清液稀释待检血清。试验表明应用重组ｍＥ２蛋白作为诊断ＨＣＶ抗原具有特异性高、抗原易纯化和成本低等特点。  相似文献   

以LacZ为报告基因探讨促进基因表达及基因免疫应答物质的筛选     

陈创夫  余兴龙  马正海  李红卫  李作生  吕宗吉  涂长春  殷震 《塔里木大学学报》2000,(3)

应用分子生物学技术构建了LacZ报告基因的pcDLacZ真核表达载体 ,并对多种促进基因表达的物质进行了筛选。应用筛选的促进基因表达物质对pcDST基因疫苗的免疫增强效果进行了观察。结果 :构建的LacZ报告基因的pcDLacZ真核表达载体 ,肌注后 1天就有表达 ,到第 7天达到高峰。通过对多种促进基因表达的物质进行筛选证明 ,4.5 %斯苯、1 %甘油、2 5 %蔗糖有明显促进基因的表达作用。 4.5 %斯苯、1 %甘油能促进pcDST猪瘟基因疫苗的免疫效果。表明 :4.5 %斯苯、1 %甘油可做为基因疫苗的免疫佐剂使用  相似文献   

抗猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定     

聂福平  杨俊  李作生  王昱  向海洋  王国民  肖进文  李应国 《安徽农业科学》2013,(28):11393-11394,11473

[目的]制备抗猪瘟病毒（CSFV）的单克隆抗体（MAb）。[方法]以纯化的猪瘟病毒免疫4～6周龄BALB／c雌鼠,取其脾细胞与SP2／O骨髓瘤细胞进行融合,筛选出抗CSFV单克隆抗体杂交瘤细胞株。[结果]经间接ELISA获得3株能稳定分泌抗CSFVE2蛋白的MAb杂交瘤细胞,分别命名为1AS、5F3和4D2。Mab亚型鉴定表明3株MAb均为IgG2b,轻链均为K链。Westernblot结果表明3株Mab均能识别重组E2蛋白。间接免疫荧光试验表明3株Mab均与CSFV呈阳性反应,与猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒（PCV2）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）呈阴性反应。[结论]该研究为建立CSFV特异性检测方法奠定了基础。  相似文献   

猪链球菌病的综合诊断与治疗   总被引：2，自引：1，他引：1  

张泉鹏  杨斌  李作生  高淑鹃  刘再超  宋建领 《中国畜牧兽医》2008,35(2):87-90

猪链球菌病是由致病性链球菌感染引起的,临床上有败血型、脑炎型、关节型和淋巴结炎型4种表现。其中败血型链球菌病与急性猪瘟、急性猪丹毒表现相似,应从临床症状、发病年龄、病理变化及进行实验室检查等方面才能确诊。免疫接种时宜选用多价疫苗,药物防治可通过药敏试验筛选敏感药物,加强饲养管理有助于减少该病的发生。  相似文献   

2006-2007年云南流行H9N2禽流感病毒血凝素全基因序列分析   总被引：2，自引：1，他引：1  

张泉鹏  李作生  张富强  李静  赵焕云  张文东  宋建领  鲍晓伟  邱薇  郑颖  范泉水 《中国兽医学报》2009,29(3)

为调查云南省H9N2亚型禽流感病毒的分子流行病学情况,对2006年6月至2007年4月从云南省16地州随机采集了各种家禽、家猪的5 728份喉气管和口腔棉拭子样品进行RT-PCR检测,276份样品呈H9N2阳性.将具有代表性的17份阳性样品的HA全长基因序列测定和分析.结果表明:株间HA基因同源性为91%～100%,推导氨基酸同源性95%～100%,所测序列与云南1999年分离H9N2毒株ackynkenxie-1-99的同源性仅为93%.根据HA基因同源性,可将17个毒株可分为2个亚群,一个亚群的12株HA基因同源性高达97%以上,与Qa/ST3143/05和C/Bei1/94同源性是97%和93%,其中的11株毒株HA基因全长1 671,编码556aa,存在第6～9位4 aa缺失,只有AC/Yndq/06株HA基因1 683.编码560 aa.另外一个亚群的其余5株,同源性98%以上,HA基因全长1683 bp,编码560 aa.17个毒株中3个存在218～220 aa糖基化位点变异,1个毒株551～553 as糖基化位点发生变异.所有毒株在HA裂解位点处没有连续性碱性氨基酸插入,受体结合位点处的氨基酸没有变异.  相似文献   

云南狂犬病监测及病毒部分N基因序列比较     

赵焕云  金卫华  张文东  杨斌  李朝仓  宋建领  何晓辉  周建国  胡媛媛  王永贤  张应国  范泉水  李作生  高云英  张富强 《中国兽医杂志》2009,45(1)

狂犬病是由狂犬病毒感染引起的一种严重侵害中枢神经系统的致死性人畜共患传染病,呈世界性分布,我国属于疫病高发区.基于病毒N基因结构和变异特征,将狂犬病毒分为2个进化组群、7个基因型[1].国内外已研究建立了一批狂犬病诊断方法[2-4],开展病毒基因结构特征及分子流行病学研究[5-7].至今未见对近年云南狂犬病研究报道.本文在云南省4个地区开展狂犬病病原学监测,并对病毒N基因进行克隆测序,以期认识狂犬病分布状况、病毒特征及与已知毒株的遗传相关性.  相似文献   

原核表达的猪瘟病毒E2蛋白抗原多肽的复性和纯化   总被引：12，自引：0，他引：12  

刘伯华  余兴龙  张茂林  肖昌  徐兴然  吴健敏  李作生  涂长春 《中国兽医学报》2003,23(2):145-148

对原核中以包涵体形式高效表达的猪瘟病毒（CSFV）E2蛋白抗原表位区段（mE2)进行了变性、复性与纯化研究。包涵体经超声破菌分离，然后进行变性溶解和复性，复性产物经硫酸铵沉淀浓缩后，利用免疫亲和层析进行纯化。纯化产物SDS－PAGE分析结果表明，其纯度达97％。酶联免疫试验测定的结果显示，与复性前变性蛋白相比，纯化蛋白与CSFV特异的单抗和多克隆阳性血清的反应活性提高了2－16倍。  相似文献   

Prion蛋白致病机理的研究     

任玉莹  谢红良  余方芳  张泉鹏  聂福平  邱薇  李作生  范泉水 《中国畜牧兽医》2007,34(5):84-85

Prion这一术语是Prusiner提出的,其中Pr源自英文蛋白质(protein),i源自英文传染性的(infec-tious),on意指粒子(particle)。Prions病也称为传染性海绵状脑病(transmissible spongiform enceph-alopathies,TSEs),是发生于动物与人类的一种致命性神经退行性疾病(Attwood等,2000)。TSEs包括疯牛病(mad cow disease,MCD),即牛海绵状脑病(bovine spongiform encephalopathy,BSE)、羊瘙痒症(scrapie)、克-雅氏病(creutzfeldt-jakob dis-ease,CJD)、GSS综合征(gersrmann-straussler-scheikerg disease,GSS)和致死性睡眠综合征(fatalfamil…  相似文献   

锌在预防流感中的应用     

廖金  范泉水  李作生  邱微  于福先  宋桂强  李丽红  聂福平  龙贵伟 《中国畜牧兽医》2007,34(3):96-97

流感是由甲型或乙型流感病毒及其变体引起的上呼吸道（鼻腔、鼻窦、喉咙、肺部、中耳）病毒感染。由于人群对流感普遍易感，加之患流感后的免疫时间不长于3年，流感成了一种常见病和多发病种。因此，流感的预防研究成为目前研究的热点之一。而锌离子依靠于它的电荷,也就是一个类似ICAM-1受体位点,并通过吸附到在鼻病毒结构和鼻上皮细胞的ICAM 1受体上,以此来达到抗流感病毒的效果。  相似文献   

LacZ基因在小鼠骨骼肌中表达的时─空模式     

马正海  余兴龙  陈创夫  简子健  邓普辉  李作生  金宁一  殷震 《新疆农业大学学报》1999,(2)

以ＬａｃＺ为报告基因,利用ＤＮＡ重组技术构建了ＬａｃＺ真核表达质粒ｐＣＤＬａｃＺ,ｐＣＤＬａｃＺ肌注小鼠后,Ｘ－Ｇａｌ染色法及半乳糖苷酶定量分析结果表明,ＬａｃＺ基因在小鼠胫前肌中得到表达,并在肌注后第７天左右达到高峰,表达的ＬａｃＺ主要分布于胫前肌近膝关节肌腱结合处,提示肌肉接种基因疫苗应采用纵向,接种部位应接近肌腱结合处。  相似文献