鸡传染性支气管炎病毒基因型与血清型相关性初步研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

汪洋  李俊平  杨承槐  李启红  黄建华  于静  夏业才 《中国预防兽医学报》2011,33(11):845-848

为研究鸡传染性支气管炎病毒(IBV)基因型与血清型之间的相关性,本研究以国内不同地区的17株IBV分离株、2株疫苗株(M41、W93)和1株强毒株(X株)为研究对象,经RT-PCR扩增获得20株IBV的S1基因并进行测序.将其分别与GenBank中的20株国内外参考IBV株的S1基因进行序列比较,绘制S1基因系统进化树...  相似文献   

禽流感DNA疫苗重组质粒组织分布的实时荧光定量PCR方法建立     

熊杰  彭广能  王国俊  李俊平  姜永萍  陈化兰 《中国预防兽医学报》2011,33(3)

为研究禽流感病毒(AIV)DNA疫苗重组质粒在组织中的分布情况,本研究以AIV DNA疫苗pCAGGoptiHA 5HA基因为检测对象,分别建立检测AIV DNA疫苗重组质粒的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR方法和TaqMan MGB实时定量PCR方法。经优化比较两种方法的特异性、敏感性、重复性和污染率。结果表明,两种方法的标准曲线线性关系均较好,相关系数均达到0.999;最低检测量为42 copies,特异性强;探针法的重复性优于染料法,污染率低于染料法,因此采用TaqMan MGB实时定量PCR方法检测AIV DNA疫苗重组质粒组织分布情况。  相似文献   

H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5对鸭免疫保护效力的研究     

李俊平  赵双成  常晓飞  柳金雄  曾显营  卫星辉  李福基  姜永萍  陈化兰 《中国预防兽医学报》2011,33(3)

为评价H5亚型禽流感病毒(AIV)DNA疫苗pCAGGoptiHA5对鸭的免疫保护效力,本研究将pCAGGoptiHA5以20μg、30μg和50μg剂量免疫3周龄SPF鸭,首次免疫后3周加强免疫一次。2周后以105EID50的鸭源高致病力AIV由鼻腔攻毒,观察SPF鸭发病和死亡情况。分别于攻毒后3d、5d和7d采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离,检测鸭排毒情况及免疫和攻毒后血凝抑制(HI)抗体、中和(NT)抗体的动态变化。结果表明:30μg和50μg免疫组均可对免疫鸭产生100%保护,而20μg剂量组则可对免疫鸭提供80%保护。  相似文献   

高氟低蛋白对放牧山羊牙基质发育的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

王俊东  郭玉红  王伟峰  李俊平  梁占学  郝俊虎 《中国农业科学》2002,35(7):836-838

 对工业氟污染区枯草期发育的放牧山羊牙齿做了脱钙后的牙基质形态学观察。结果表明 ,健康牙齿镜下釉质与本质 ,牙骨质与牙本质界限清晰 ,牙骨质的厚度均匀一致 ,牙骨质与牙本质均致密 ,中毒组第 1切齿牙骨质与牙本质界限模糊 ,局部呈现明显疏松结构 ,釉质与本质界限不整齐 ,有的呈犬牙交错或破损 ;健康牙本质胶原排列整齐、致密、染色均匀 ,而中毒组第 1切齿本质胶原肿胀 ,弯曲 ,排列疏松 ,染色不均匀。结论 :高氟低蛋白对放牧山羊的牙基质有明显的病理影响 ,使基质结构发育不良 ,并进一步影响基质的钙化 ,从而使牙齿整体质量下降 ,易磨损  相似文献   

禽网状内皮组织增生症病毒MD-2株感染性克隆的构建与突变分析     

黄小洁  孔冬妮  刘丹  陈晓春  杨飞  侯力丹  李俊平 《中国家禽》2020,(1):38-43

为构建禽网状内皮组织增生症病毒(REV)MD-2株的感染性克隆,将MD-2株的前病毒基因组全长克隆至pMD18-T Simple载体中构建MD-2全长质粒,经转染CEF细胞后进行病毒拯救及鉴定,并对拯救病毒进行了生物学特性研究。结果表明,成功构建了MD-2全长质粒,拯救病毒感染CEF细胞后用间接免疫荧光试验检测到病毒抗原;拯救病毒的生长特性与亲本病毒相比无明显差异。随后对env基因进行了多个位点的定点突变,并拯救出相应的突变株,结果显示env基因第1433位碱基突变后不能拯救出病毒,推断1433位的突变为致死性突变。MD-2株感染性克隆的构建和病毒拯救的研究为继续研究REV基因和蛋白功能提供了技术支持。  相似文献   

H5亚型禽流感病毒A/Duck/Anhui/1/2006(Clade 2.3)密码子优化HA基因DNA疫苗的免疫保护效力研究   总被引：1，自引：1，他引：0  

王国俊  熊杰  李俊平  曾显营  田国彬  李雁冰  施建忠  姜永萍  陈化兰 《中国预防兽医学报》2010,32(2)

为了进一步评价基于HA基因的DNA疫苗的开发应用前景,本研究将表达H5亚型禽流感水禽群代表株A/Duck/Anhui/1/2006(H5N1)[DKAH/1/06(H5N1)]HA基因的DNA疫苗pCAGGoAHHA的免疫保护效力进行了评估,以5μg、10μg、20μg、50μg和100μg剂量免疫3周龄SPF鸡,首次免疫后3周再加强免疫一次,加强免疫后2周用106EID50的高致病力禽流感病毒(HPAIV)A/Duck/Fujian/31/2007(H5N1)[DKFJ/31/07(H5N1)]鼻腔途径进行攻毒,观察发病与死亡情况。分别于攻毒后第3d、5d、7d天采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测攻毒鸡排毒情况,同时检测免疫及攻毒后血清HI抗体、NT抗体的动态变化。结果,20μg、50μg、100μg组的pCAGGoAHHA均可对免疫鸡产生100%完全保护(不发病、不致死、不排毒),而5μg和10μg剂量组则可对免疫鸡分别形成25%和75%的保护。结果表明,H5亚型禽流感水禽群DNA疫苗质粒pCAGGoAHHA具有良好的免疫保护性,有望成为预防H5亚型HPAIV的技术储备候选疫苗。  相似文献   

禽流感灭活疫苗(H5N2,N28株)和重组禽流感灭活疫苗(H5N1,Re-1株)免疫鸡和鸭后抗体消长规律的比较研究   总被引：7，自引：0，他引：7  

雷彩侠  李俊平  李启红  曲鸿飞  夏业才 《中国兽药杂志》2006,40(2):9-13

禽流感灭活疫苗（H5N2，N28株）和重组禽流感灭活疫苗（H5N1，Re-1株）各3批，以重组禽流感灭活疫苗（H5N1，Re．1株）推荐的免疫程序和剂量分组免疫5周龄SPF鸡和5周龄非免疫鸭。免疫后定期采集血样，测定血清HI抗体效价，分别计算各免疫组鸡和鸭HI抗体效价的几何平均数，绘制各批疫苗免疫鸡和鸭后HI效价消长曲线，并分别对两种疫苗免疫鸡和鸭后各时期的HI抗体效价进行t检验。结果为：①免疫后1周，各免疫组均未测到HI抗体；②鸡免疫后4～5周，HI抗体效价达到峰值1：2^6.0～1：2^7.0，随后2周下降相对较快，平均每周下降0．3—0．7个滴度，之后HI抗体效价缓慢下降，直到试验结束，平均每周下降0．04～0．17个滴度；③鸭首次免疫后第3周各免疫组HI抗体效价达到1：2^4.0～1：2^5.3，加强免疫（首次免疫后第3周）后，HI抗体效价迅速升高。加强免疫后第3周（首次免疫后第6周）HI抗体效价达到最高值1：2^10.6-1：2^11.7，且在峰值水平维持3周，之后1周下降相对较快，平均下降1．2～2．7个滴度，然后缓慢下降，到首免后24周平均每周下降0．28～0．39个滴度，24周除049H5N2批疫苗免疫组外，其他各批免疫鸡HI抗体效价均小于1：2^4.0；④免疫后3周内，两种疫苗刺激鸡产生的HI抗体效价均高于相应批次疫苗免疫鸭产生的HI抗体效价，免疫后第2周相差1．9—2．3个滴度，免疫后第3周相差1．6～2．0个滴度；⑤两种疫苗免疫鸡和鸭后，各时期HI抗体效价t检验差异均不显著（P〉0．05）。以上结果表明，两种疫苗免疫SPF鸡和非免疫鸭后，HI抗体效价消长规律一致，两种疫苗免疫后各个时期的HI抗体效价在统计学上差异均不显著（P〉0．05）。  相似文献   

疫苗的科学使用与禽病防控     

李俊平  蒋桃珍 《中国畜牧杂志》2007,43(16):34-37

随着现代养殖生产的规模化和集约化,使用合适的疫苗进行免疫接种无疑是预防和控制甚至消灭传染性疾病最经济和有效的措施。但疫苗免疫效果的好坏不仅与疫苗本身的质量有直接关系,还与疫苗的接种程序、使用方法、疫苗的保存和运输等因素密切相关。有效地控制各种禽类疫病,是保证养禽业持续稳定健康发展的根本。本文从疫苗的生产管理、质量控制入手,就如何识别真假疫苗、科学使用疫苗等方面做简要论述,为广大禽类养殖者在合理的使用疫苗方面提供参考。  相似文献   

鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体间接ELISA检测方法的建立     

黄小洁  薛麒  刘丹  张兵  孔冬妮  侯力丹  杨飞  吴华伟  李俊平 《中国兽药杂志》2022,56(9):14-21

为建立鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体的间接ELISA检测方法,应用原核表达的IBDV VP2蛋白作为包被抗原,经方阵试验确定间接ELISA试验的最佳反应条件：包被抗原的浓度为8 μg/mL,标准阴、阳性血清的稀释度为1:400,封闭液选用10 %马血清,酶标抗体最佳稀释倍数为1:15000,最佳抗原稀释液为0.01 M PBS(PH 7.2);抗原最佳包被条件为4 ℃过夜,待检血清和酶标二抗反应条件为37 ℃ 60 min,底物作用时间为15 min。待检血清的OD450nm≥0.288判为阳性,反之判为阴性。特异性试验、敏感性试验和重复性试验结果显示,该方法的特异性好、敏感高、重复性好。用建立的间接ELISA方法与商品化IDEXX-ELISA试剂盒对临床血清样品进行检测,符合率为93.5 %。该方法的建立为检测IBDV抗体提供了一种安全、特异、敏感、方便经济的检测方法,为鸡传染性法氏囊病免疫监测和预防控制提供了科学的技术手段。  相似文献   

噬菌体展示技术及其在单克隆抗体制备中的应用     

刘铭赫  李巧玲  李林姣  程君生  李俊平  张媛  彭小薇  王楠 《中国兽药杂志》2022,56(12):82-89

噬菌体展示技术是一种强大的高通量多肽筛选技术,常用于确定靶标蛋白的亲和力与结合位点,并广泛应用于单克隆抗体的制备。随着下一代测序和微流控技术的出现,噬菌体展示技术已成为制备单克隆抗体更为强大和流行的工具。通过对噬菌体展示技术的历史发展与分类、噬菌体展示技术制备单克隆抗体的过程以及其在制备单克隆抗体上的应用进行论述,以期为相关研究人员提供参考。  相似文献