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为研究PRRSV N蛋白的结构、功能以及N蛋白在病毒致病中的作用,以临床分离PRRSV毒株E11105为研究对象,采用Primer Premier 5.0设计一对特异性引物,经RT-PCR扩增出N基因片段,利用相关分子生物学软件对N基因序列进行分析;将N基因克隆连接到pColdⅠ原核表达载体上,经PCR、双酶切鉴定及序列测定后,得到重组质粒pColdⅠ-N,将pColdⅠ-N转入大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,IPTG诱导表达后用SDS-PAGE蛋白电泳及Western blot验证分析。结果显示,分离株E11105N基因与北美洲型代表株VR-2332、欧洲型代表株Lelystad virus(LV)、中国2006年暴发的高致病性PRRSV代表株JXA1、中国代表株CH-1a的核苷酸序列同源性分别为93.3%、34.7%、99.2%、95.4%,氨基酸序列同源性分别为94.4%、15.3%、94.4%、99.2%;系统进化树显示,E11105株N基因与美洲型代表株VR-2332、中国高致病性JXA1毒株的亲缘关系较近;分离株E11105N基因所编码蛋白不存在跨膜区;二级结构主要以α-螺旋和无规则卷曲为主,分别占20.33%和63.41%;预测该蛋白可能存在5个较为明显的B细胞优势抗原表位。SDS-PAGE蛋白电泳结果表明,重组N蛋白主要存在于菌体沉淀中,分子质量约为16.7ku;Western blot结果显示,带His标签的重组表达蛋白能被His单克隆抗体识别,显色后条带约为16.7ku,与SDS-PAGE蛋白电泳的条带大小一致。 相似文献
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由于食品安全逐渐被人们广泛关注,各种优质性的牛肉逐渐成为牛肉生产企业的基本目标,因此,标准化的牛肉生产以及优质性的育肥技术是实现这一目标的重要举措。本文在研究的过程中,对牛肉养殖技术潜在的问题、养殖牛肉技术以及育肥技术进行了系统性的探究,旨在通过阐述,促进牛肉养殖产业的综合性发展。 相似文献
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基于FD技术改善低比速离心泵叶 总被引:3,自引:0,他引:3
简要介绍低比速离心泵特点,阐述计算的控制方程和叶轮通道网格划分方法。运用商业CFD软件FLUENT对不同叶片形式叶轮流道进行三维湍流流动计算。 计算采用压强连接的隐式修正SIMPLEC算法和雷诺平均法的RNG κ-ε湍流模型。根据计算结果分析叶片形式对流速分布、压力分布的影响,揭示叶轮内流动规律, 提高低比速离心泵优化设计的水平。 相似文献
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