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不对称RT-PCR结合芯片技术鉴别4种禽病的初步研究 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究结合非对称RT-PCR和基因芯片两种技术,构建可同时区分AIV的H5、H7、H9血凝素亚型和N1、N2神经氨酸酶亚型以及鸡传染性支气管炎病、新城疫病、鸡传染性法氏囊病的基因芯片。分别T/A克隆部分禽流感病毒的M基因,H5、H7、H9亚型HA基因,N1、N2亚型NA基因,鸡传染性支气管炎病毒np基因、新城疫病np基因、鸡传染性法氏囊A基因,并构建重组质粒;以重组质粒为模板,用PCR方法扩增制备探针,纯化后点于氨基修饰的载玻片上,制备基因芯片;常规方法从待检样品中提取RNA,用Cy3标记引物进行RT-PCR,将荧光素引入PCR产物中;并对扩增条件进行优化。研究发现检测探针可特异性的与相应的标记样品进行杂交,呈现较强的杂交信号;该方法可以准确进行4种主要禽病的鉴别诊断和禽流感主要流行亚型鉴定,对感染样品和现地样品检测结果与RT.PCR、鸡胚接种有较高一致性,符合率分别为100%和96%。结果显示该方法可用于同步鉴别禽流感、鸡传染性支气管炎、新城疫、鸡传染性法氏囊病,以及现地主要流行的禽流感亚型,是一种有效的新方法。 相似文献
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基于猪附睾中低氧的环境,本实验旨在探讨不同负压条件对17℃保存猪精液生化指标的影响。将稀释好的精液分别保存在正常大气压、负0.02 MPa、负0.04 MPa、负0.08 Mpa条件下,而后放置在17℃恒温箱保存,连续保存13 d,每隔24 h检测精子活率、p H、总抗氧化能力、过氧化氢(H2O2)含量。结果表明:在17℃恒温负压下保存的猪精液p H、总抗氧化能力、H2O2含量显著优于常压对照组(P0.05),在负0.04 MPa下保存的猪精液精子活率显著高于其他组(P0.05)。综上可知,17℃恒温保存的过程中,在负0.04 MPa时能够提高猪精液的保存效果,提高猪精子的活力。 相似文献
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采用Klein-Defors悬浮杀灭与感染试验方法,研究“卫可”、“卫康”两种消毒剂在不同浓度下,分别与流感H51N1和H9N2亚型病毒作用5min和10min,对流感病毒的灭活作用。结果表明:这两种消毒剂在相同或不同的浓度范围内。对病毒的杀灭率是有区别的。尽管每种消毒剂在本身稀释浓度范围内都有较好的杀毒效果,但在应用中也应考虑其他因素的影响。因此,我们推荐使用该消毒剂的工作浓度为100%杀灭病毒的稀释度。这将为其临床应用提供依据,对环境消毒和防止流感爆发具有参考价值。 相似文献
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重组高繁殖力疫苗株H5N2(H5/PR8)病毒的制备和鉴定 总被引:1,自引:1,他引:1
作为禽流感疫苗株,不但要求其具有良好的免疫原性,而且要求在生产中具有良好的生长特性,现用的A/Turkey/England/N28/73(H5N2)疫苗株,血凝价28,生长滴度较差.本研究利用自然重组法,预制备一株高繁殖力的预备疫苗株,使它的表面基因血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)来源于A/Turkey/England/N28/73(H5N2)毒株,并使其保持原有的良好的免疫原性,内部基因来源于流感病毒PR8,A/Puerto Rico/8/34(H1N1)毒株,并使其重组病毒赋有了流感病毒PR8高繁殖力的特性.实验结果表明,已获得一株高繁殖力的重组流感病毒H5/PR8,血凝价达到211,生长繁殖特性明显增强.抗原性分析显示,H5/PR8重组病毒与亲本毒株H5N2抗原性无明显差异;致病性分析发现,H5/PR8重组病毒的致病能力较亲本毒株H5N2有明显下降.这为疫苗株的改良奠定了坚实的基础,对禽流感灭活疫苗的生产具有重大意义. 相似文献