斯氏艾美尔球虫肌动蛋白解聚因子在HeLa细胞中的表达     

任保彦  付成福  宫鹏涛  韩乾忠  杨举  李赫  张国才  张西臣  李建华 《中国预防兽医学报》2011,33(12)

为真核表达斯氏艾美尔球虫(Eimeria stiedae)肌动蛋白解聚因子(ADF)基因,本研究采用RT-PCR技术扩增ADF基因,构建pVAX- 1-ADF真核重组质粒,并转染HeLa细胞.采用RT-PCR方法检测ADF mRNA转录水平、western blot检测ADF蛋白表达水平.琼脂糖凝胶电泳结果表明PCR扩增出一条大小为350 bp的特异性片段,与预期值相符.Western blot检测显示,转染pVAX- 1-ADF的HeLa细胞在大约13ku处出现特异性表达条带,与预期值相符.本研究构建了E.stiedae ADF基因真核表达质粒pVAX- 1-ADF,并且在体外真核细胞中表达,为进一步寻找防治E.stiedae的疫苗候选基因奠定了基础.  相似文献   

对工程中预制楼板板缝纵向开裂问题的探讨     

杨举  张孝礼 《林业科技情报》1999,(3)

作者从质量监督和施工角度对予制空心板板缝开裂的问题进行了论述,对板缝开裂存在的问题从几个方面进行研究。对工程技术人员在今后设计、施工、管理等方面有一定的指导作用。  相似文献   

BALB/c小鼠结肠癌皮下转移模型的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

李霞  张西臣  李建华  杨举  宫鹏涛  邓柏林  徐鹏  张国才 《中国兽医学报》2008,28(9)

体外培养人结肠癌细胞株HCT-8,将2×107个/mL人结肠癌细胞(HCT-8)悬液0.2 mL接种于BALB/c小鼠皮下,记录荷瘤生存时间,观察接种瘤生长及转移情况,死亡后解剖并做病理检查.结果显示,皮下转移发生率为94.00%(47/50),淋巴结转移率为96.00%(48/50).荷瘤鼠平均生存时间(60.20±7.60)d,病理结果提示,转移部位肿瘤细胞与接种部位肿瘤细胞结构相似,符合低分化腺癌的特征.本试验成功建立了小鼠结肠癌皮下转移动物模型.为结肠癌的相关研究提供参考.  相似文献   

柔嫩艾美耳球虫serpin基因克隆与生物信息学分析     

李文超  顾有方  宫鹏涛  李建华  杨举  邱发贵  张西臣 《中国兽医学报》2013,33(2):212-216

根据GenBank发表的Eimeria tenella serpin(Etserpin)基因设计1对引物,从孢子化卵囊总RNA中用RT-PCR方法扩增Etserpin基因,克隆后测序,应用生物信息学分析预测其核苷酸及其编码蛋白的结构与功能.结果表明,Etserpin开放阅读框为1 248 bp,编码一分泌蛋白,N端具有1个28 aa的信号肽,有1个跨膜区域,有2个糖基化位点和21个磷酸化位点,88,89,98～101,208～212,283～287,302～304区段是其可能的B细胞表位;同源性比对与进化树的分析表明其为抑制性serpin蛋白,结构保守,与F.acervulina、T.gondii和N.caninumm亲缘关系较近.二级结构以α螺旋和随机卷曲为主,具有类似于serpin家族蛋白的三级结构.  相似文献   

碘醚柳胺脂质体的研制     

陈丽凤  张西臣  杨永胜  何宏轩  尹继刚  杨举 《中国农业大学学报》1998,(Z2)

本研究用改良的冷冻融溶法制备出碘醚柳胺(Rafoxanide,Raf)脂质体定向剂,并对其药物特性进行了观察与测定.用 Raf 与聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpyrrolidone,PVP)共沉方法解决了 Raf 在水性介质中不溶的问题,从而为制备该药脂质体创造了必要条件.以薄膜分散法和冷冻融溶法为理论基础,采用单因素比较法优选出制备碘醚柳胺脂质体的最佳处方组成:药脂比为1:27(W/W);卵磷脂(Pc)与胆固醇(Chol)  相似文献   

球虫散防治鸡柔嫩艾美尔球虫病试验     

张西臣  杨举等 《吉林畜牧兽医》1999,(12):43-43

本试验观察了中药制剂球虫散分别以0.5%、1%和2%添加于饲料中的抗鸡柔嫩艾美尔球虫效力，结果发现将球虫散按1%以上添加于饲料中其抗球虫指数达到180以上，具有高效抗球虫作用，由于中药具有毒性低、残留少等优点，在防治鸡球虫病方面具有很好的应用前景。  相似文献   

中国人源蓝氏贾第虫病毒基因组全长cDNA克隆及序列测定   总被引：4，自引：0，他引：4  

田宗成  张西臣  李建华  尹继刚  杨举 《中国兽医学报》2003,23(6):573-575

从中国人源蓝氏贾第虫北京株(BEIJ88／BTMR1／1)体外纯培养的电镜负染和超薄切片观察到蓝氏贾第虫病毒粒子。该病毒位于感染早期贾第虫的细胞质中，感染晚期的细胞核中。根据国外发表的蓝氏贾第虫病毒序列设计了6对互相重叠的引物。用这6对引物对从中国人源蓝氏贾第虫北京株发现的蓝氏贾第虫病毒基因组进行RT—PcR，将产物连接到pMD18-T载体中并转化入DH5a感受态菌，送上海生工测序，通过BLAST对Gen-Bank进行同源性搜索。结果 测得我国人源蓝氏贾第虫病毒基目组全长为6273bp，与国外报道的蓝氏贾第虫病毒序列同源性为95％，编码的氨基酸同源性为90％。  相似文献   

隐孢子虫（Cryptosporidium）病毒的鉴定及其特性   总被引：3，自引：0，他引：3  

陈建宝  张西臣  田宗成  李建华  尹继刚  杨举  于卫东 《中国兽医学报》2001,21(1):54-57

根据已发表的隐孢子虫病毒的序列,设计合成2对引物,对小球隐孢子虫(Cryptosporidiumparvum)、鼠隐孢子虫(C.muris)、贝氏隐孢子虫(C.baileyi)、火鸡隐孢子虫(C.meleagridis)进行RT-PCR扩增,结果发现仅小球隐孢子虫(C.parvum)含有大小约为1.7×103nt和1.3×103nt2个片段的dsRNA病毒.将其PCR产物连接到pMD18-T载体上进行克隆测序,经与GenBank比较,含这2个片段的dsRNA病毒与已发表的该虫病毒的同源性分别为96%和98%.电泳鉴定发现,该病毒对低浓度RNA酶不敏感,且不能被DNA酶降解.依赖RNA的RNA聚合酶活性测定结果表明,该病毒具有该聚合酶的活性.电镜观察未发现存在病毒样粒子.  相似文献   

应用RAPD技术对鸡柔嫩艾美耳球虫不同地理株的多态性研究   总被引：3，自引：2，他引：1  

张伟信  张西臣  李建华  赵权  尹继刚  杨举  田宗成 《吉林农业大学学报》2003,25(2):194-197

利用RAPD技术对鸡柔嫩艾美耳球虫(E．tenella)GZ株、HB株、JL株及HB株与JL株杂交虫株FZ1进行了研究。结果表明：E．tenella不同地理株间及同一地理株亲代与子代间均存在DNA多态性。其中不同地理株间种内变异程度较大(SI=O．6225--O.6977)。而同一地理株子代与亲代间也发生遗传变异，但变异程度不大(SI=O.9813--0．991O)。同时对本室培育的HB株与儿株的杂交虫株FZl的基因组DNA进行RAPD分析。发现该杂交株与其亲本HB株、JL株的相似值为O.8215，O.7916，大于HB株与JL株间相似值(O．6977)。小于传代虫株间的相似值(O.9813--O.991O)，且其扩增务带显示出与亲本株间的相似，且又有不同，表明试杂交虫株是1株既具有两亲本株的遗传性状，又发生了变异的虫株。  相似文献   

微小隐孢子虫黏附相关蛋白基因CP21的原核表达及鉴定     

任保彦  陈玉兰  宫鹏涛  李巍  李建华  苏利波  李赫  杨举  刁玉梅  张西臣 《畜牧兽医学报》2011,42(8)

本研究旨在克隆微小隐孢子虫黏附相关蛋白基因CP21开放阅读框,构建其原核表达质粒,并对获得的融合蛋白进行鉴定。从含CP21基因的噬菌体中提取模板DNA,PCR扩增基因片段,构建pET-28a-CP21原核表达质粒,转化至埃希氏大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定。用原核表达蛋白免疫小鼠,制备抗重组蛋白多抗,对蛋白进行定位。结果表明成功扩增出CP21基因,并构建原核表达质粒,转化至大肠杆菌中表达出相对分子质量为25 ku的融合蛋白,Western blotting证明表达的CP21融合蛋白能与抗C.parvum多克隆抗体产生特异性反应。免疫荧光结果表明:CP21基因在子孢子和卵囊期均表达,且表达产物位于子孢子表膜和卵囊壁表面。CP21是一种与侵入机制有关的黏附相关蛋白。研究结果为微小隐孢子虫的免疫学诊断及疫苗研制奠定了基础。  相似文献