锌指核酸酶技术研究进展   总被引：1，自引：0，他引：1  

王晓静  武建明  王洪梅  李秋燕  何成强  刘晓  高运东  仲跻峰  何洪彬 《家畜生态学报》2011,32(1):1-4

重组锌指核酸酶(Zinc finger nuclease,ZFN)是锌指蛋白和FokI核酸内切酶的剪切结构域组成的嵌合融合蛋白,可切割特异DNA序列,引起DNA双链断裂(double strand break,DSB),提高了依赖同源重组完成特定基因改造和修饰等的基因打靶的效率,为转基因及基因治疗研究提供了更有效的技术...  相似文献   

口蹄疫病毒感染机理及防控策略的研究进展   总被引：3，自引：0，他引：3  

宋玲玲  王洪梅  李瑞国  高运东  武建明  刘晓  何洪彬 《家畜生态学报》2010,31(4)

口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)可导致牛、羊、猪等发生口蹄疫(Foot-and-mouth disease, FMD),该病毒有7种血清型,并具有高度变异性、适应性及持续感染特点,使得该病不能有效被控制而在许多国家和地区重新暴发和流行.论文对FMDV感染机理、口蹄疫难以防控的因素及目前常用的防制策略等方面进行了回顾,并对其研究前景进行了展望.  相似文献   

转人乳铁蛋白羊奶生物安全试验     

武建明  庾庆华  刘思国  杨倩  王峰  何洪彬 《山东农业科学》2013,45(2):23-27

为了解转人乳铁蛋白羊奶与普通羊奶之间的差异,将两种羊奶的主要成分及其物理性状进行了比较;同时,参考中华人民共和国农业行业标准《转基因植物及其产品食用安全检测——大鼠90天喂养实验》(NY/T 1102-2006)进行转基因羊奶食用安全评价。实验结果表明,90天灌喂转人乳铁蛋白羊奶的大鼠与普通羊奶灌喂组血常规值差异不显著(P>0.05);灌喂转人乳铁蛋白的羊奶中、高剂量组与自由采食对照组及普通羊奶中、高剂量灌喂组大鼠血清铁含量及铁蛋白含量差异显著(P<0.05)。转人乳铁蛋白羊奶与普通羊奶具有实质等同性,转基因成分没有干扰机体对其它营养物质的吸收,从营养学角度来评价,转人乳铁蛋白羊奶是安全的。  相似文献   

抑制牛整合素β5基因表达的shRNA的筛选          下载免费PDF全文

王浩然  王洪梅  朱其军  武建明  刘晓  宋玲玲  何洪彬  王立群 《家畜生态学报》2012,33(2):20-24

 根据牛整合素β5（Integrin Bata5,ITGB5）的基因序列,设计并构建了真核表达载体pcDNA3.1-flag-β5和shRNA重组慢病毒载体H1-shRNA145、H1-shRNA726,利用脂质体介导法,将pcDNA3.1-flag-β5分别和H1-shRNA145、H1-shRNA726共转染293T细胞,并以针对LacZ基因的H1-shRNA-LacZ 与pcDNA3.1 flag β5共转染293T细胞作为对照,以持家基因β-actin为蛋白内参,通过Western blot检测ITGB5的表达,结果表明,H1-shRNA145、H1-shRNA726均可抑制ITGB5的表达,并有剂量效应,为进一步研究ITGB5的基因功能奠定基础。  相似文献   

稳定表达T7 RNAP的BHK-21细胞系的建立   总被引：2，自引：0，他引：2  

李欣  杨少华  王洪梅  刘晓  武建明  高运东  王立群  仲跻峰  何洪彬 《中国预防兽医学报》2010,32(6)

为建立能稳定表达T7RNA聚合酶(T7RNAP)的BHK-21细胞系以研究RNA重组疫苗,本研究从BL21(DE3)大肠杆菌中扩增T7 RNAP基因,定向克隆于质粒pcDNA3.1(+)中,经双酶切及测序鉴定,获得阳性重组质粒pcDNA3.1-T7 RNAP。用该质粒转染BHK-21细胞,经G418筛选14d后获得阳性细胞株。RT-PCR和western blot检测结果表明,建立了稳定表达T7 RNAP的BHK-21细胞系,并且在不同代次的阳性细胞中能稳定表达目的基因和蛋白,该研究为RNA病毒感染性质粒在细胞内转录及病毒拯救技术平台的建立奠定了基础。  相似文献   

人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)(1354-1802)的原核表达及抗血清制备     

王青泉  武建明  李秀梅  王立群  何洪彬  王洪梅  刘晓 《安徽农业科学》2012,40(16):8905-8907

[目的]制备人组织型纤溶酶原激活剂t-PA(1354-1802)抗血清,并测定其效价,为深入研究t-PA基因功能奠定基础。[方法]利用基因克隆技术获得t-PA(1354-1802)催化域基因片段,然后将其重组到pET-32a(+)质粒中,进行鉴定及序列分析;将测序正确的阳性质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导、蛋白纯化及免疫兔试验。[结果]SDS-PAGE结果显示,37 kD处出现特异性条带;对该融合蛋白进行分离纯化后免疫新西兰兔,制备t-PA蛋白抗血清,Western blot分析表明,抗血清可与标准品t-PA蛋白特异性结合,间接ELISA方法检测抗血清的效价可达到1∶12 800。[结论]成功制备了t-PA(1354-1802)抗血清,为t-PA基因功能的深入研究奠定了基础。  相似文献   

口蹄疫病毒VP2基因重组表达载体的构建及其稳定表达细胞系的建立     

谢金鹿  王洪梅  刘国艺  武建明  刘晓  高运东  于力  仲跻峰  何洪彬 《畜牧兽医学报》2011,42(4)

本试验旨在构建Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)的VP2基因重组表达载体,并建立稳定表达VP2基因的BHK-21细胞系。利用RT-PCR方法扩增Asia 1型FMDV的cDNA,获得VP2基因完整的编码区,构建可表达VP2的带有绿色荧光蛋白标记基因的pIRES2-EGFP-VP2重组表达载体。经鉴定正确后,利用LipofectamineTM2000将重组质粒转染293T细胞,通过Western Blot技术检测VP2蛋白的瞬时表达;然后再转染BHK-21细胞,通过G418筛选,形成单克隆细胞系,经荧光筛选到表达EGFP的抗性单克隆细胞,扩繁培养克隆细胞,再通过West-ern Blot技术检测其VP2的表达,最终筛选到稳定表达FMDVVP2基因的BHK-21细胞系。结果表明,VP2基因重组表达载体pIRES2-EGFP-VP2构建正确,能够在293T细胞内瞬时表达;转染BHK-21细胞,经G418筛选到表达VP2基因的BHK-21细胞克隆,经长达60d的传代,获得了稳定表达VP2基因和EGFP的BHK-21细胞系。上述结果表明,我们建立了稳定表达VP2基因的BHK-21细胞系,为进一步探讨VP2基因在FMD...  相似文献   

牛整合素β5亚基基因的构建与原核表达     

陈旭  王洪梅  武建明  刘晓  王立群  何洪彬 《安徽农业科学》2011,39(7):4009-4011

[目的]构建牛整合素β5亚基（ITGB5）基因,并进行原核表达。[方法]扩增目的基因,将其重组到pET-32a（＋）质粒中,将经鉴定为阳性的重组克隆,转化大肠杆菌感受态细胞表达蛋白后纯化。[结果]从牛甲状腺、扁桃体扩增到目的基因ITGB5;ITGB5基因表达产物的SDS-PAGE结果显示,在88 KD处出现表达产物及纯化后的蛋白;W estern-blot分析表明,抗血清可与原核表达的蛋白特异性结合。[结论]表达、并纯化了ITGB5蛋白。  相似文献   

荷斯坦牛中性粒细胞防御素BNBD12基因克隆、原核表达及其抗菌活性分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

武建明  王长法  何洪彬  胡桂学  杨宏军  杨少华  高运东  仲跻峰 《中国农业科学》2010,43(2):396-403

 【目的】实现荷斯坦牛中性粒细胞防御素BNBD12基因在大肠杆菌中的高效表达,并分析重组BNBD12的抗菌活性。【方法】RT－PCR扩增荷斯坦牛中性粒细胞BNBD12基因,序列分析后人工合成了适于在大肠杆菌中表达的BNBD12成熟肽,构建原核表达载体pET32a(+)/BNBD12,并在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达。通过琼脂扩散法分别确定重组蛋白对牛源乳腺炎主要致病菌革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的抗菌效果,应用扫描电镜观察重组蛋白的杀菌效应。【结果】测序结果表明扩增片段长度为180 bp,可编码含60个氨基酸的成熟蛋白。SDS－PAGE和Western blotting分析显示人工合成的BNBD12的成熟肽基因以融合蛋白形式表达,表达量占菌体总蛋白的21.4%;纯化的重组蛋白0.05 mg?mL-1对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌有明显抑菌效果;扫描电镜观察发现重组蛋白作用后可引起病原菌内容物外泄而死亡。【结论】成功表达了荷斯坦牛中性粒细胞β-防御素12,该重组蛋白既可作用于革兰氏阳性菌又可作用于革兰氏阴性菌,显示出较好的临床应用前景。  相似文献   

新型动物疫苗研究进展   总被引：3，自引：0，他引：3  

王洪梅  宋玲玲  李瑞国  武建明  高运东  仲跻峰  何洪彬 《家畜生态学报》2010,31(4)

动物疫苗产业是战略化产业,新型疫苗将成为其重要组成部分.论文对标记疫苗、活载体疫苗等新型疫苗的优缺点进行了比较,列举了相应的市场化产品,并对新型疫苗的发展方向进行了展望.  相似文献