鸭瘟病毒弱毒株在免疫雏鸭体内的分布和排毒规律   总被引：9，自引：5，他引：9  

程安春  汪铭书  刘菲  宋涌  袁桂萍  韩晓英  徐超  廖永洪  文明  周伟光  贾仁勇 《中国兽医学报》2005,25(3):231-233,258

鸭瘟病毒(DPV)弱毒Cha株经皮下、口服和滴鼻3种途径免疫1日龄雏鸭，应用聚合酶链反应(PCR)检测了病毒在体内分布和排毒规律。Cha株免疫雏鸭后，对血液、心、肝、脾、肺、肾、十二指肠、直肠、法氏囊、胸腺、胰腺、延脑、大脑、小脑、舌、肌肉、骨髓、粪便和食道共19种组织PCR检测结果如下：(1)皮下接种雏鸭后4h，即可在心、肝、脾、肾、法氏囊、胸腺、胰腺、延脑、大脑和小脑共10种组织中检出DPV的DNA；8h后，所有采取的组织器官均可检测到DPV的DNA。(2)口服接种雏鸭后4h，可在舌和食道中检测到DPV的DNA；8h后，可在心、肝、脾、肾、胸腺、胰腺、延脑、大脑、小脑、舌、食道和血液共12种组织器官中检出DPV的DNA。(3)滴鼻接种雏鸭后4h，未能在各种组织中检出DPV的DNA；8h后，可在心、肝、脾、肾、胸腺、延脑、大脑、小脑、舌、食道和血液共11种组织中检测到DPV的DNA。(4)在3种免疫途径中，检出时间最早和检出率最高的组织器官为肝脏、脑(大脑、小脑和延脑)；3种途径免疫的鸭，从免疫后12h至21d均能从所有采集的组织中检测出DPV DNA。  相似文献   

大肠杆菌中重组蛋白可溶性表达的研究进展及展望   总被引：1，自引：1，他引：0  

余波  程安春  汪铭书 《黑龙江畜牧兽医》2008,(10)

大肠杆菌表达系统是目前基因工程中最常用的重组蛋白表达系统.但由于大肠杆菌表达系统所表达的蛋白常常形成无活性的包涵体,为此研究者摸索出许多用来提高重组蛋白在大肠杆菌中可溶性表达的方法,近年来在提高重组蛋白可溶性表达的策略方面取得了一定进展,现介绍如下.  相似文献   

致羔羊脑炎粪肠球菌分离鉴定及毒力因子基因的PCR检测   总被引：2，自引：2，他引：0  

周霞  程安春  汪铭书  剡根强  马勋  韩素娟 《中国兽医学报》2008,28(1):35-39

从新疆部分地区羊场近年来发生的以脑炎为主要临床特征的病死羔羊体内分离出2株细菌,经鉴定为粪肠球菌。经链球菌A-G乳胶分型诊断液检测后确定为D群链球菌。该菌对小鼠和羔羊有较强的致病性,人工感染可引起小鼠的死亡,感染羔羊能够复制出与自然感染相同的临床症状和病理变化,并从感染发病和死亡羊的脑、心血、肝脏中再分离到相同细菌,分离菌对万古霉素、氟苯尼考、头孢噻肟钠、诺氟沙星和恩诺沙星敏感,根据GenBank中粪肠球菌主要毒力因子的基因序列设计引物进行PCR检测,结果显示,1株细菌明胶酶（GelE）、聚合物质（Asa1）、心内膜炎抗原（efaA）、胶原蛋白黏附素（Ace）、新的表面蛋白1（EF3314）等毒力因子基因阳性;另1株细菌溶血素激活因子（CylA）、表面蛋白（esp）、聚合物质（Asa1）、心内膜炎抗原（efaA）、胶原蛋白黏附素（Ace）、2种新的表面蛋白1和2（EF0591和EF3314）等毒力因子基因为阳性。  相似文献   

减蛋综合征病毒六邻体蛋白基因的克隆和表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

汪铭书  程安春  郭万柱  王小玉 《畜牧兽医学报》2003,34(2):172-176

根据Genebank中EDSV-AV127的序列设计一对引物，从EDSV四川株中扩增出六邻体蛋白基因并将其克隆到pUC18中，PCR、限制性内切酶分析和序列分析表明：所扩增、克隆的基因片段包括了EDSV六邻体蛋白基因的完整序列。将克隆的基因正向插入pBV220的PRPL启动子游的SmaⅠ位点，经SDS-PAGE、Western印迹和琼脂扩散试验表明：六邻体蛋白基因在大肠杆菌中获得了表达并具有免疫学活性。  相似文献   

原位反转录PCR技术的应用     

李雪梅程安春  汪铭书 《中国兽医科技》2005,35(3):239-243

针对已有资料中对于以DNA为靶基因序列的原位PCR介绍较多，而对于原位反转录PCR的介绍很少，但在实际研究工作中有很多检测的靶基因是RNA(病毒的或基因组的RNA)的实际情况，就原位反转录PCR技术的基本原理、影响试验结果的关键因素和步骤，如组织细胞的固定、引物和探针的选择、蛋白酶及DNA酶消化、假阳性及假阴性的产生等进行了概述，旨在通过探讨上述问题，对该技术的实际应用有所指导。  相似文献   

间接酶免疫组化检测DPV在感染鸭体内细胞定位的研究和应用   总被引：4，自引：3，他引：4  

徐超  程安春  汪铭书  文明  刘菲  韩小英  宋涌  廖永洪  陈孝跃 《中国兽医学报》2007,27(5):640-644

以超速离心浓缩结合蔗糖密度梯度离心法提纯的鸭瘟病毒（DPV）作为抗原免疫家兔制备兔抗DPV血清,用饱和硫酸铵沉淀结合DEAE-Sephedax-A-50离子交换柱层析提纯兔抗DPV IgG,建立了检测甲醛固定鸭体组织石蜡切片上DPV抗原的间接酶免疫组化法。该法能特异地检测出DPV感染鸭组织中的DPV而对鸭疫里默氏菌、鸭源多杀性巴氏杆菌（5∶A）、鸭源大肠杆菌（O1）感染致死的鸭组织以及正常鸭组织呈阴性反应,检测DPV感染死亡鸭的肝、十二指肠、脑、脾和胸腺的结果与PCR检测结果相同。其敏感性高于原位杂交。对DPV CH强毒株人工感染致死鸭的检测结果表明,该法可特异检测到肝、肺、肾、脑、十二指肠、空肠、回肠、直肠、法氏囊、脾脏、腺胃以及食管中的DPV。DPV主要分布于这些器官的上皮细胞和巨噬细胞。对1992-2004年经10%福尔马林保存的鸭瘟临床病例的肝脏检测结果均为阳性。该法可用于DPV感染鸭的诊断和定位检测,也可用于对甲醛固定组织进行回顾性诊断检测。  相似文献   

黄曲霉毒素及其检测方法的研究进展   总被引：5，自引：0，他引：5  

刘艳丽  程安春  汪铭书 《黑龙江畜牧兽医》2006,(6):15-17

黄曲霉毒素(aflatoxin,AFT)是一组具有强毒性和致癌性的次级真菌代谢产物,全球性污染粮食及其制品,给人类的健康造成严重的威胁.据世界粮农组织(FAO)报告,全球每年约有2%的农作物因污染严重而失去营养和经济价值.近年进出口商品中均有黄曲霉毒素超标现象,因此黄曲霉毒素已经成为出入境农产品安全卫生检验的重要对象.现就黄曲霉毒素及其检测方法的研究进展等加以讨论.  相似文献   

麻鸭α干扰素基因的克隆与序列分析   总被引：5，自引：0，他引：5  

陈斌  程安春  汪铭书  余勇  唐琼  石谦  张东  彭健康  陈海滨 《中国兽医学报》2006,26(4):401-404

根据GenBank文献，应用Oligo6．0分析软件设计合成了用于扩增鸭Ⅰ型干扰素（α—IFN）基因的2对引物。以麻鸭肝脏提取的基因组DNA为模板，采用Nest—PCR方法扩增获得了约600bp片段，经T载体克隆和测序分析证实，是麻鸭Ⅰ型干扰素基因（SDIFN—α）。生物信息学分析表明，SDIFN—α的开放阅读框架（ORF）由576个核苷酸所组成，预测蛋白质相对分子质量为21640，编码191个氨基酸。其中前28个氨基酸可能是信号肽部分，切割位点在28号氨基酸A和29号氨基酸S之间，序列中无内含子。成熟的多肽中含8个半胱氨酸和2个糖基化位点，2个蛋白激酶C磷酸化位点（protein kinase C phosphorylation site）和2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点（casein kinase Ⅱ phosphorylation site）。SDIFN—α与鸭α—IFN基因核苷酸同源性为99．3％。有4个碱基的差异；与北京鸭α—IFN基因的核苷酸同源性为99．1％，氨基酸同源性为98．96％；与鸡α—IFN的核苷酸同源性为71．8％。与鹅、狗、牛、马和人的α—IFN基因的核苷酸同源性分别为96．0％、45．8％、45．5％、44．6％和41．7％。遗传进化分析结果表明，IFN—α的这些同源性与其动物分类地位相一致。  相似文献   

囊膜糖蛋白gE对α疱疹病毒毒力的影响     

黄雅琳  程安春  汪铭书 《畜牧兽医学报》2020,51(7):1506-1514

近年来，α疱疹病毒的囊膜糖蛋白gE在病毒细胞间传递、神经系统入侵、免疫逃避等方面的研究取得新的进展。gE能促进合胞体形成，影响病毒的顺行、逆行神经传导，也是第一个报道可以抑制浆细胞样树突状细胞产生Ⅰ型干扰素的病毒蛋白。本文对α疱疹病毒囊膜糖蛋白gE与毒力之间的关系进行阐述，以期为α疱疹病毒gE的功能研究提供参考。  相似文献   

鸭源致病性大肠杆菌Ⅰ型菌毛pilA基因序列测定及生物信息学分析     

于小娜  汪铭书  程安春  李玲  段泽  钟传德  陈孝跃 《四川农业大学学报》2006,24(3)

据GenBank中人源大肠杆菌pilA基因序列,由Oligo 6.0设计一对引物,以提取的鸭源致病性大肠杆菌基因组为模板,进行PCR扩增,获得了5株鸭源致病性大肠杆菌的pilA基因,序列测定和生物信息学分析表明:鸭源致病性大肠杆菌pilA基因核苷酸序列长度为549 bp,编码182aa,与人源、鸡源及猪源大肠杆菌pilA基因之间核苷酸同源性为87.3%~100.0%,氨基酸同源性为87.5%~100.0%。对不同宿主来源大肠杆菌pilA基因所编码蛋白的二级结构、亲水性、抗原性、抗原表位进行预测分析比较,结果显示Ⅰ型菌毛间具有一定的结构相似性,并存在一定的共同抗原位点;系统进化分析表明,各菌株之间的pilA基因遗传相关性与其宿主来源及血清型之间没有严格的相关性。  相似文献