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副猪嗜血杆菌菌影的制备 总被引：2，自引：1，他引：1
为研制副猪嗜血杆菌(H.parasuis)菌影疫苗,本实验通过PCR扩增噬菌体PhiX174的裂解基因E,将其连接到含有λPL/PR-cI857启动阻遏系统的pBV220载体中,使裂解基因E与λPL/PR-cI857串联成为温度敏感的裂解盒,构建重组质粒pBV-E。并将含有E基因的裂解盒插入pMD18-T载体中,构建H.parasuis打孔质粒(pMD-E)。采用电击穿孔法将其转入E.coliβ2155中,利用接合的方式将打孔质粒转入H.parasuis 5型菌株中。将含有打孔质粒的H.parasuis在28℃培养至对数生长期,升温到42℃诱导E基因表达,制备H.parasuis菌影。电镜观察菌影形态完整,内容物全部被释放到胞外。本实验为进一步研究菌影疫苗奠定了基础。 相似文献
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为验证一株禽流感病毒(AIV)核蛋白(NP)中的3条T细胞表位候选肽NP89-97(PKKTGGPIY)、NP198-206(KRGINDRNF)和NP64-71(ERMVLSAF)的免疫原性,本研究构建了含有NP基因的重组质粒pCAGGS-NP,将其转染293T细胞,间接免疫荧光和western blot检测表明NP蛋白在293T细胞中获得表达.重组质粒免疫鸡后,用间接酶联免疫实验检测发现重组质粒在鸡体内能诱导产生相应的抗体.将多肽NP89-97、NP198-206、NP64-71和不相关肽N71-78(WRRQARYK)在体外刺激免疫后鸡的脾淋巴细胞,流式细胞术检测发现CD8+T淋巴细胞增殖分别为13.7%、11.9%、0.6%和0.4%;ELISA检测结果显示多肽NP89-97、NP198-206刺激后的淋巴细胞中IFN-γ的分泌量明显增加.本实验表明多肽NP89-97和NP198-206能在体外诱导活化的鸡淋巴细胞产生细胞毒性T淋巴细胞反应,为AIV NP的T 细胞表位.该研究结果对研究禽类抗流感病毒的免疫机制及抗流感疫苗具有重要的意义. 相似文献
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随着油气资源开采难度的逐渐加大,大位移井、大斜度井和水平井等钻井技术发展迅速,钻井过程中托压问题一直是复杂井技术中急需解决的重大问题。通过设计一种立阀结构水力振荡器,实现将管柱与井壁之间的静摩擦转变为动摩擦,减小摩擦阻力,有效解决托压问题。水力振荡器主要通过动定阀周期性开合产生间隙水击压力,压力阀口压力大小直接影响减阻效果,为此建立了立阀结构水力振荡器动定阀有限元模型,利用fluent软件,在滑移网格技术基础上分析立阀结构水力振荡器压降变化规律,并根据现场实际情况分析了流量以及流道口长度对立阀结构水力振荡器性能的影响,为立阀结构水力振荡器的设计与优化提供理论依据。 相似文献
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清除杂草作为草坪种植及管理的关键所在,能否保证杂草得到根除,在很大程度上影响着草坪的草生质量。能否选择正确的除草技术及除草方案,对于做好草坪维护管理具有重要的现实性意义。基于此情况下,本文主要对常见的草坪杂草防除方式进行了简单扼要的概括,重点对草坪常用除草剂种类及使用方法展开了全面分析。 相似文献
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沈楠 《山东省农业管理干部学院学报》2004,20(3):145-146
近年来,我国越来越多的高等学校采用学分制管理模式。本文对学分制的发展及学分制的特点进行了探讨,并结合工作实际提出了当前实行学分制需要解决及注意的问题。 相似文献
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利用PCR技术从质粒pSHIV89．6P中扩增猴免疫缺陷病毒（SIV）衣壳蛋白p27基因,并将其插入表达载体pET32a（＋）构建重组质粒pET32a-p27,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,并将纯化定量后的表达产物免疫小鼠,制备单克隆抗体。结果显示,gag基因的p27相应片段为763bp,其表达产物相对分子量为46ku。经镍柱纯化,获得目的蛋白p27纯度可达90％以上。利用淋巴细胞杂交瘤技术获得5株稳定分泌抗p27的单克隆抗体细胞株,分别命名为1A5、1C7、3C2、2D12、3D12。5株杂交瘤细胞诱生小鼠产生的腹水抗体效价分别为1：12800、1：25600、1：819200、1：51200和1：409600。免疫球蛋白类型均为IgG1型,轻链均为入链。Western blot和IFA试验结果表明所获得的单克隆抗体均对病原检测具有很高的特异性,为进一步开发SW早期诊断试剂盒奠定了基础。 相似文献
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记村,今年50岁.一个有良知的知识分子,曾任沈阳市东陵区人大代表.1998年,一位农民找到他,说是在某市场买东西遭到业主的围攻.记村想,这种事情走诉讼太麻烦.于是,他把情况反映给了报社,记者写了稿发出去之后为那个农民讨回了公道. 相似文献
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基于RT-PCR方法，扩增了用于马传染性贫血病毒（Equine infectious anemia virus，EIAV）减毒疫苗株CTL表位研究的5匹马的编码经典MHC—I类分子的大部分基因，具体包括编码肽结合区大部分区域、α3区、穿膜区及胞浆区蛋白的基因，并进行了PCR产物的克隆和测序。试验马匹外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cells，PBMC）的总RNA提取物经RT-PCR扩增，并将所得产物进行T-A克隆。从每匹马的所有克隆中，分别随机挑取鉴定为阳性重组质粒的21～23个克隆用于测序分析。研究结果表明，5匹试验马匹各自具有3～5个等位基因，由于MHC-Ⅰ分子等位基因表达的共显性特征，可以推测马的基因组内可能存在2～3个基因座对应于这些等位基因，这与国外已有研究结论基本一致。另外，不同马匹PBMC表达的MHC-Ⅰ类分子的差别水平不一致。除了6号与7号和10号马之间MHC-Ⅰ类分子的差异较大，无相同或高度相近的经典MHC-Ⅰ类分子序列外，各马匹间均表达具有1个或1个以上的相同或高度同源的对应经典的MHC-Ⅰ类分子的mRNA。以上研究结果既可作为正在开展的EIAV减毒疫苗株CTL表位研究的基础性、支持性数据，又可进一步丰富国内马的经典MHC-Ⅰ分子多态性方面的相关研究。 相似文献
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