牛血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法的建立     

王旭  孙雨  王睿男  肖颖  蒋菲  毕一鸣  李硕  杨林  董虹  宋晓晖  王传彬 《中国草食动物科学》2019,(3):33-39

为研究快速定量检测牛血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的方法,试验通过优化抗原表达条件等步骤,在大肠杆菌原核表达系统中表达可溶性的3A-3B融合蛋白,并基于纯化的可溶性融合蛋白建立口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒。结果表明:建立的方法能够检测牛血清中的口蹄疫病毒非结构蛋白抗体,敏感性高,特异性强,对其他相关的牛类病原无交叉反应,其组内与组间变异系数分别低于10%和15%,具有良好的重复性。对300份临床牛血清样品进行检测,同Procheck公司的口蹄疫非结构蛋白抗体试剂盒进行比较,阳性样品符合率96%,阴性样品符合率93.3%,总的符合率95.7%。重复性试验组内与组间变异系数均小于10%。文章首次建立了口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法,同传统的ELISA方法相比,该检测方法特异性相当、敏感性更高,操作更简单、快速,具有较高的应用推广价值。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株膜基质蛋白单克隆抗体的研制   总被引：1，自引：1，他引：0  

王元  胡鸿惠  秦亚曼  张倩  邓小雨  曹振  王传彬  冉多良  田克恭 《中国畜牧兽医》2009,36(11):70-73

为制备抗猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株单克隆抗体,用纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株免疫BALB/c小鼠,最后一次免疫后第3天取其脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇作用下融合,通过酶联免疫吸附试验（ELISA）和间接免疫荧光试验（IFA）筛选,以有限稀释法克隆3次,制备单克隆抗体,并对制备的单克隆抗体进行鉴定。结果表明获得了2株分泌PRRSV膜基质蛋白特异性抗体的杂交瘤细胞,命名为1D12、5H5,经鉴定其抗体亚型分别为IgG2b、IgM,2株均为κ链,腹水ELISA效价分别为1∶107和1∶105。该单克隆抗体与PRV、PPV、PCV、CSFV、JEV无交叉反应。作者成功制备了抗猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株膜基质蛋白单克隆抗体,为进一步建立相关诊断方法奠定了基础。  相似文献   

猪圆环病毒2型IgM抗体间接ELISA的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

原霖  蔡林  倪建强  顾小雪  张硕  张淼洁  王传彬  遇秀玲  翟新验  田克恭 《中国畜牧兽医》2011,38(7):119-122

猪圆环病毒2型(PCV2)是断奶仔猪多系统衰竭综合症的重要原发性病原,其感染的早期检测有助于及时采取防控措施。以重组衣壳蛋白(Cap蛋白)作为包被抗原,通过对反应条件的优化,建立了PCV2 IgM抗体间接ELISA,其最适抗原包被浓度为1.25 μg／mL,最适血清稀释度为1∶100,临界值为0.35。该检测方法与其他5种常见猪疫病阳性血清无交叉反应,特异性良好。批内、批间重复试验的变异系数均在2%~6%,重复性好。对100份临床样本的检测结果表明,该检测方法与国外同类试剂盒相比,敏感性为90.3%,特异性为92.8%,总符合率为92%。试验结果表明,所建立的PCV2 IgM间接ELISA特异性好和敏感性高,适用于PCV2感染早期的流行病学调查。  相似文献   

动物疫病防控净化新型监测模式——现场快速诊断检测与远程监测云平台的构建与应用     

孙雨  宋晓晖  王瑞红  王睿男  马英  李硕  李晓霞  孙航  冯冰  毕一鸣  杨林  顾小雪  王传彬 《中国动物检疫》2021,38(12):50-54

当前,我国动物疫病防控领域实验室存在现场实时快速诊断技术落后、检测工作滞后、疫病监测数据不能实时共享分析、重大动物疫病预警不及时、应急处置协调复杂困难等问题。探索建立重大动物疫病远程实时监测预警大数据云平台等新型监测模式是当前动物疫病防控信息化的当务之急。本文介绍了目前动物疫病防控净化的新型监测模式——现场快速诊断检测与远程监测云平台的构建与实际应用情况。上述平台的构建与应用,在创新推动我国重大动物疫病净化工作的同时,重点解决了当前动物疫病防控净化过程中传统实验室检测效率较低、检测数据不能够互联互通等问题,为创新我国动物疫病防控净化新型监测模式提供了借鉴,同时也为我国动物疫病防控净化提供了强而有力的技术支撑。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲株国家核酸标准物质的研制     

原霖  钟凤然  董浩  陈亚娜  孙圣福  柴方红  宋晓晖  翟新验  杨林  王传彬 《中国兽医学报》2019,(4):627-630

为了研制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)欧洲株国家核酸标准物质,将PRRSV欧洲株代表毒株LV接种Marc145细胞,待出现细胞病变后,反复冻融收集病毒液,并灭活分装。制备后进行均匀性评估、稳定性评估、数字PCR法定值、不确定度分析和临床试用。结果显示,制备的标准物质的定值为(1.83±0.22)×10~4 copies/μL;样品均匀;-20℃稳定保存12个月以上,4℃稳定2个月以上。经全国标准物质管理委员会的专家评审,该制备物达到了国家二级标准物质的要求,可以作为核酸扩增检测的PRRSV核酸标准物质。  相似文献   

2015年我国祖代种鸡场卫生状况及疫病净化情况调查     

韩雪  顾小雪  张倩  刘玉良  刘洋  毕一鸣  翟新验  辛盛鹏  王传彬 《中国动物检疫》2016,33(6):10

为了解我国祖代以上种鸡场的养殖情况、疫病净化的技术能力及面临的问题,2015年7月,中国动物疫病预防控制中心通过问卷调查的方式,在全国23个省开展了规模化种鸡场主要疫病净化现状调查,共收到123个祖代以上种鸡场反馈的调查问卷。本文汇总和分析了祖代以上种鸡场饲养管理、种源来源、疫病监测和疫病净化的相关信息,为推动我国种鸡种源净化工作提供数据资料。  相似文献   

猪圆环病毒3型感染的流行情况与检测方法研究进展   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘颖昳  周智  关婕葳  原霖  侯伯  赵柏林  王传彬  杨林 《畜牧与兽医》2019,(1):114-117

猪圆环病毒3型(porcine circovirus 3,PCV3)是猪群中流行的一种新型猪圆环病毒。2016—2017年,世界范围陆续报道在猪群中发现PCV3,包括美国、中国、美国、韩国、巴西、波兰和意大利等。PCV3感染多见于具有皮炎肾病综合征(PDNS)和繁殖障碍症状的猪群,目前病毒尚未分离成功。本文综述了已报道的PCV3在世界范围内的流行情况,介绍了当前研究的PCV3分子和血清学诊断方法。  相似文献   

羊血清中口蹄疫病毒非结构蛋白3A-3B1-3B2抗体ELISA检测方法的建立     

孙雨  宋晓晖  肖颖  王旭  董浩  王睿男  毕一鸣  蒋菲  李晓霞  杨林  王传彬 《畜牧与兽医》2019,(10):92-98

为建立检测羊血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的间接ELISA方法,通过优化抗原表达条件,在大肠杆菌原核表达系统中获得了可溶性的3A-3B1-3B2融合蛋白,基于纯化的可溶性融合蛋白建立了口蹄疫病毒非结构蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒。该方法对其他相关的羊类病毒病原无交叉反应,其重复性组内与组间变异系数均低于10%,具有良好的重复性。对300份临床血清样品进行检测,与国内市售的口蹄疫非结构蛋白抗体检测试剂盒进行比较,阳性样品符合率为96.67%,阴性样品符合率为94%,总符合率为95.33%。本研究建立的羊血清中口蹄疫病毒3A-3B1-3B2蛋白抗体间接ELISA检测方法,特异性高、敏感性强,操作简单快速,具有较高的应用推广价值。  相似文献   

鸡白痢/禽伤寒沙门菌抗体检测试剂的比较与评估     

顾小雪  刘洋  霍斯琪  刘玉良  韩雪  张倩  翟新验  王传彬 《中国兽医学报》2018,(1):108-112

对市面上现有鸡白痢/禽伤寒沙门菌抗体平板凝集检测试剂及其不同批次,微量凝集检测试剂和ELISA共4种检测试剂进行比较与评估。用4种试剂以及试剂A的不同批次检测来自11个种鸡场的1 650份血清,计算不同试剂检测种鸡场的抗体阳性率,2种试剂之间的阳性符合率、阴性符合率和总符合率,并以Kappa检验判断不同检测方法及其试剂之间的一致性程度。平板凝集试剂A的不同批次间以及平板凝集试剂A和B之间具有高度一致性(Kappa系数=0.714~0.746),但阳性符合率不足80%。平板凝集试剂A、微量凝集试剂C、ELISA试剂D之间仅具有中度或弱一致性(Kappa系数=0.392~0.542)。不同鸡白痢/禽伤寒沙门菌抗体检测试剂间存在差异,平板凝集试剂不同批次间也存在差异,提示试剂生产厂家应加强质量控制,同时研发敏感性、特异性、稳定性更好的替代试剂,而种鸡场在进行抗体监测时应固定使用1种检测试剂,避免影响检测结果的准确性和连续性。  相似文献   

小反刍兽疫病毒核衣壳蛋白抗原性与特异性的比较     

孙雨  宋晓晖  肖颖  李秀梅  王睿男  吕园园  蒋菲  辛盛鹏  杨林  王传彬 《畜牧与兽医》2020,(5):59-63

为筛选建立小反刍兽疫病毒N蛋白双抗原夹心ELISA抗体检测方法的抗原原料,本研究通过优化大肠杆菌密码子、优化蛋白表达与纯化条件等方法,分别在pET-30a与pET-32a两个不同原核表达载体中成功获得了可溶性的小反刍兽疫核衣壳蛋白(N)。分别对重组大肠埃希氏菌pET-30a-(N)-BL21(DE3)株与pET-32a-(N)-BL21(DE3)株种子批的P7代与P20代进行蛋白诱导表达与抗原提取纯化,共获得6批小反刍兽疫病毒pET-30a-(N)蛋白与pET-32a-(N)蛋白,并对蛋白的浓度、纯度、抗原性和特异性进行检验。结果表明两个纯化后的重组抗原与羊小反刍兽疫病毒阳性血清有明显反应,具有较好的反应性,而与羊痘病毒阳性血清、羊口蹄疫病毒阳性血清、山羊关节炎/脑炎病毒阳性血清等特异性血清均无交叉反应,具有较好的特异性。本研究结果为今后以N蛋白为基础建立相应的抗原捕获ELISA方法,竞争ELISA检测方法、间接ELISA检测方法以及双抗原夹心ELISA抗体检测方法打下了坚实的基础。  相似文献