传染性法氏囊病病毒VP2单克隆抗体夹心ELISA检测试剂盒的研制     

刘静静  ;王永山  ;欧阳伟  ;夏兴霞  ;潘群兴  ;王晓丽  ;毕振威  ;诸玉梅  ;朱瑞良 《兽医大学学报》2014,(4):530-535

为研制传染性法氏囊病病毒（IBDV）快速检测试剂盒,用重组IBDV-VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞触合,获得3株稳定分泌抗VP2蛋白单克隆抗体（mAb）的杂交瘤细胞株,分别命名为1D11、2G8和2E5,抗体亚类分别为IgG1κ、IgG2bκ和IgG1κ。间接免疫荧光试验（IFA）证明,3株单抗均与VP2发生特异性反应。相加ELISA证明3株mAb识别VP2不同的抗原表位。在病毒中和试验中,1D11和2G8腹水对IBDV的中和效价分别为104和103,而2E5无中和活性。用亲和层析方法纯化1D11和2E5,分别作为包被抗体和标记抗体,建立了IBDV夹心ELISA检测方法,优化了试验条件,测定了其主要性能指标,对IBDV的最低检出量为102 TCID50/mL。用夹心ELISA、AGP和RT-PCR 3种方法同步检测8种试验样品,夹心ELISA与RT-PCR的检测结果一致,显著高于AGP方法。组装成的试剂盒,置于37℃保存7d、4℃保存6个月和-20℃保存24个月,其检测结果没有显著差异（P〉0.05）。  相似文献   

不同禽鸟类传染性法氏囊病病毒分离物核酸及结构蛋白的比较   总被引：6，自引：0，他引：6  

王永山  罗函禄 《中国畜禽传染病》1998,20(3):156-158

将从鸡、鸭和麻雀体内分离到的ＩＢＤＶ用ＳＰＦ鸡胚增殖，采用氯仿抽提，聚乙二醇沉淀和蔗糖密度梯度离心的方法纯化病毒，鉴定结果表明，这种方法可有效地将病毒与杂蛋白分开。用异硫氰酸胍－酚－氯仿－抽提一步法提取病毒ＲＮＡ，电泳分析表明，三种ＩＢＤＶ均由双节段ＲＮＡ组成，大、小基因片段的电泳迁移率毒株间无差异。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明，各ＩＢＤＶ的结构蛋白带谱相同，但各蛋白带的相对百分含量有差异，表明这些不  相似文献   

败血支原体16S rRNA基因的克隆与核酸序列分析   总被引：4，自引：0，他引：4  

丁铲  王永山 《中国预防兽医学报》1999,21(2):134-136

从败血支原体Ｄ９６０４株培养物中直接快速提取染色体ＤＮＡ；构建了ＭＧ基因文库，以ＰＣＲ扩增１６Ｓ ｒＲＮＡ基因全长片估并对其进行了核苷酸序列分析。结果表明，Ｄ９６０４株与Ａ５９６９株只有５个核苷酸的差异，同源性为９９．６７％，１６Ｓｒ ＲＮＡ基因具有高度的保守性。  相似文献   

IBDV逆转录—聚合酶链反应和核酸杂交检测方法的研究     

王永山  周宗安 《中国兽医学报》1997,17(1):12-14

以建立的传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和核酸杂交检测方法，检测了细胞培养物、病理组织、粪便和饲料中的ＩＢＤＶ，并与ＩＢＤＶ夹心ＥＬＩＳＡ、琼脂扩散试验（ＩＤ）和病毒分离方法进行了平行比较试验。结果表明，ＲＴ－ＰＣＲ和核酸杂交检测方法具有高度的敏感性和特异性，是深入研究ＩＢＤ流行病学，特别是传播途径的新手段  相似文献   

水貂病毒性肠炎细胞培养灭活苗的研制     

施正良  王永山 《毛皮动物饲养》1990,(1):12-14

  相似文献   

犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因在昆虫细胞中的表达及其抗原性分析     

毕振威  王永山  范红结 《中国兽医寄生虫病》2011,19(5):21-26

将非典型犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）的核衣壳蛋白（nucleocapsid protein,N）基因克隆到杆状病毒表达系统供体质粒pFastBacHTA中,构建含N基因的重组供体质粒pFastBac-N,转化E.coli DH10Bac感受态细胞,经筛选获得含N基因的重组Bacmid DNA（rBacmid-N）,脂质体法转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒vBacmid-N。用vBacmid-N感染昆虫细胞Sf9,免疫印迹（Western blot）分析,在62kDa处出现一条特异蛋白条带,与重组N蛋白的理论值相符合;间接免疫荧光试验（indirect immunofluorescent assay,IFA）检测,vBacmid-N感染的昆虫细胞sf9出现特异绿色荧光。以纯化的重组N蛋白为抗原建立CDV抗体间接ELISA检测方法,犬CDV阳性血清A450大于0.40,而犬CDV阴性血清A450小于0.05,显示了良好的抗原特异性与稳定性。  相似文献   

靶向传染性法氏囊病病毒VP1基因siRNA对病毒复制的抑制     

欧阳伟  王永山  刘小娟  张海彬 《中国兽医学报》2011,31(10)

根据传染性法氏囊病病毒（IBDV）VP1基因保守区序列,选择设计了3个靶向VP1的小干扰RNA序列（siR-NA）：VP1-siRNA668、VP1-siRNA1034和VP1-siRNA2250,化学合成DNA序列,体外转录合成siRNA,转染鸡胚成纤维细胞（CEF）后接种IBDV,分析siRNA对病毒复制的影响。结果显示,病毒接种后72h,3个VP1-siRNA转染组未出现明显的细胞病变（CPE）,病毒滴度分别为102.75,102.00,101.75 TCID50/0.1mL,而siRNACON转染和单纯IBDV接种对照组均出现明显CPE,病毒滴度均为106 TCID50/0.1mL;用荧光定量RT-PCR分析VP1基因水平,3个VP1-siRNA转染组比对照组分别降低了73.10%,81.79%,90.28%。结果表明,本试验选择设计的3个siRNA具有明显抑制IBDV复制功能,其中2 250位点的siRNA抑制效果最明显,推测该区域是VP1基因的重要功能区,是新型抗IBDV药物与疫苗设计的重要靶标。  相似文献   

生防细菌与黄腐酸绿源宝促进棉花生长及防治黄萎病的效果   总被引：3，自引：3，他引：3  

林玲  张爱香  金中时  王永山  王凤良  龚伟荣  陈志石  顾本康 《江苏农业学报》2006,22(2):122-126

分析、测定内生细菌73 a、拮抗细菌JB52和化学药剂黄腐酸绿源宝单独使用、混合使用对棉苗生长、棉花产量的影响以及对棉花黄萎病的防治效果。结果表明:73 a和JB52都具有促进棉苗生长和提高棉花产量的作用,特别是73 a的作用最强,苗期株高可增长29.9%,鲜重增加45.2%,田间试验结果籽棉增产11.5%;73 a菌液灌根对棉花黄萎病的防治效果最好,达到50%;黄腐酸绿源宝对棉苗生长和棉花产量没有促进作用,但对防治棉花黄萎病有一定的效能;内生细菌73 a与拮抗细菌JB52或黄腐酸绿源宝混用都不如单独使用效果好。  相似文献   

加工番茄平铺培土起垄栽培技术   总被引：1，自引：0，他引：1  

王永山 《新疆农业科技》2007,(3):25-25

在实际生产中,早衰及烂果是困扰加工番茄高产增效的重大难题。对此,从2003年起,经过不断的研究和探索,结合当地实际,  相似文献   

原核表达的兔出血症病毒衣壳蛋白对兔的免疫保护效果   总被引：4，自引：0，他引：4  

王永山  陆承平  周宗安  薛家宾 《中国农业科学》2004,37(11):1677-1681

 为了检验大肠杆菌表达的兔出血症病毒（RHDV）衣壳蛋白（VP60）对兔的免疫保护效果，将34只清洁兔随机分成3组：单用免疫佐剂对照组（8只）、单用重组VP60组（8只）和重组VP60加免疫佐剂组（18只），分别经皮下注射，VP60的免疫剂量为每只每次400 μg，免疫2次，间隔7 d。在第2次免疫7 d后，VP60加免疫佐剂组的兔血清抗体水平显著高于单用VP60免疫组（ELISA 1∶64 000 对比1∶4 000 / HI 1∶128 对比1∶16），表明免疫佐剂可明显加速重组VP60诱导抗体产生的进程，用RHDV NJ85强毒攻击，免疫佐剂对照组与单用VP60免疫组的实验兔均全部死亡（8/8和8/8），VP60加免疫佐剂组均全部存活，保护率为100%（18/18）。用RHDV血凝试验（HA）检测，死亡兔的肝脏组织液HA效价大于1∶512，而存活兔的肝脏组织液HA效价小于1∶2，肝脏组织触（涂）片检查和细菌培养均为阴性，证明病死兔系RHDV感染所致。用RHD重组亚单位疫苗在养兔场进行800只兔的田间免疫试验，安全有效，没有出现不良反应。对重组菌进行冻存、复苏、培养、诱导表达和质粒酶切分析，证明VP60基因在宿主菌内保持稳定。  相似文献