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本研究旨在利用乳酸乳球菌构建牛α干扰素（BoIFN-α）的分泌表达系统并分析其抗病毒活性。根据乳酸乳球菌MG1363密码子使用的偏好性，对BoIFN-α基因进行优化合成。将目的基因和乳酸乳球菌表达载体质粒pAMJ399分别进行SalⅠ和BglⅡ双酶切，将胶回收产物进行连接后，转化大肠杆菌TG1感受态细胞，提取阳性质粒电转化乳酸乳球菌感受态细胞，用SDS-PAGE和Western blotting方法对表达蛋白进行分析和鉴定，同时将重组乳酸乳球菌培养28 h后取上清用PEG20000浓缩10倍左右，进行体外抗病毒试验。结果显示，试验成功构建了重组乳酸乳球菌pAMJ399-BoIFN-α/MG1363，重组菌上清和沉淀均出现约20 ku的目的条带，表明重组蛋白以分泌的形式同时存在于培养液的上清和沉淀中。浓缩后的重组BoIFN-α（rBoIFN-α）上清与水泡性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus，VSV）同时作用，用MDBK/VSV系统以微量细胞病变抑制法测定rBoIFN-α的效价为1.02×106 U/L；通过Alamer Blue法分析可知，加入rBoIFN-α后对细胞的活性影响较小；间接免疫荧光试验可见加入rBoIFN-α后细胞无绿色荧光，说明rBoIFN-α有良好的抗病毒效果；实时荧光定量PCR结果进一步证实rBoIFN-α具有一定的抗病毒效果。本试验构建了能分泌表达rBoIFN-α的乳酸乳球菌，通过一系列的体外抗病毒试验证明rBoIFN-α具有良好的抗病毒活性，试验结果为rBoIFN-α作为抗病毒药物、免疫增强剂的开发、肽类用药及临床应用提供新途径。 相似文献
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观察双峰驼奶对2型糖尿病大鼠肾组织结构及其细胞凋亡的影响,为临床预防和治疗糖尿病及其并发症提供理论参考。通过链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）结合高糖高脂饮食诱导构建2型糖尿病（type 2diabetes mellitus,T2DM）大鼠模型,糖尿病大鼠随机分为糖尿病模型组（diabetes model control,DMC）、低剂量骆驼奶组（2ml/d）（low camel milk,LCM）、高剂量骆驼奶组（5ml/d）（high camel milk,HCM）和盐酸二甲双胍组（200mg/kg）（metformin hydrochloride,MTH）,每组12只,另设正常对照组（control group,C）。建模成功后,试验组处理4周后检测大鼠空腹血糖（FPG）浓度变化;采用苏木精-伊红（HE）染色方法检查肾脏组织的病理变化;采用荧光定量Real time-PCR法检测Bax（Bcl2-associated X protein,Bax）、Bcl-2（B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2）、细胞凋亡蛋白酶3（cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase 3）和核转录因子（nuclear factor-kappa B,NF-κB）mRNA的表达丰度;采用免疫组织化学染色法和免疫印迹法观察肾脏组织凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达变化。结果显示,与DMC组相比,LCM、HCM、MTH组大鼠FPG浓度均显著下降（P〈0.01）,LCM组大鼠胰岛素敏感性指数（ISI）显著升高（P〈0.01）;HE染色显示DMC组肾小球体积增大,囊腔变小,肾小球内出血严重,而LCM、HCM、MTH组肾小球体积、囊腔间隙较正常,肾小球出血明显减少;Bax mRNA和NF-κB mRNA在DMC组中表达量最高,Bcl-2mRNA和Caspase 3mRNA分别在LCM组和HCM组有较高的表达量;与DMC组相比,LCM、HCM、MTH组大鼠肾脏细胞Bax蛋白表达减低,Bcl-2蛋白表达升高。结果表明,双峰驼奶能显著降低糖尿病大鼠肾脏损伤,抑制其细胞凋亡,对糖尿病及其并发症的治疗发挥有效作用。 相似文献
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金属硫蛋白-1基因(metallothionein-1,MT-1)是一类广泛存在于动物体内的金属结合蛋白,除维持金属动态平衡和重金属解毒外,还可参与清除自由基、拮抗电离辐射和抗应激等。为深入研究MT-1基因参与动物机体抗逆性的分子机制,本研究采用RT-PCR和RACE(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术获得天祝白牦牛(Bos grunneins)MT-1基因全长cDNA序列,运用生物信息学方法分析MT-1蛋白的理化性质、结构和不同物种间的同源性,并利用RT-qPCR方法分析MT-1基因在天祝白牦牛各个脏器和组织中的表达丰度。结果表明,天祝白牦牛MT-1基因cDNA序列全长为408 bp(GenBank登录号:KF770836),开放阅读框(ORF)长186 bp,编码61个氨基酸,氨基酸的分子量为5.981 kD;氨基酸序列分析显示,天祝白牦牛MT-1基因编码氨基酸序列与牛(Bos taurus)的同源性高达100%,同时与大多数哺乳动物相似;荧光定量PCR结果发现,MT-1 mRNA在天祝白牦牛8个不同脏器和组织中均有表达,心脏中表达量最高。天祝白牦牛MT-1基因的成功克隆为进一步研究该基因的功能提供了基础资料。 相似文献
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乳牛肝MTP基因mRNA定量检测模板的构建 总被引：2，自引：1，他引：1
应用RTPCR方法。克隆394bp的MTP片段，连接到pMD18-T载体上构建pMD-MTP394重组质粒；应用限制性内切酶ApaI消化重组质粒pMD-MTP394，切下-194bp的小片段。回收大的线性片段。T4DNA连接酶连接，成功构建了-个重组的竞争模板质粒pMD-MTP200。为建立竞争性RTPCR法检测乳牛肝MTP基因mRNA奠定了基础。 相似文献
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为阐明胰岛素、胰高血糖素在奶牛脂肪代谢中的调控作用,应用RT-PCR法观察了胰岛素、胰高血糖素对体外培养脂肪细胞胰高血糖素受体(GLNR)mRNA丰度的影响。结果发现,随着培养液中胰岛素质量浓度的升高,GLNR mRNA表达逐渐增加(P<0.05);而随着培养液中胰高血糖素浓度的升高,GLNR mRNA表达逐渐降低(P<0.01)。本研究结果表明,胰岛素、胰高血糖素直接调控奶牛脂肪细胞胰高血糖素受体mRNA的表达。 相似文献
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通过分析我国工程项目造价管理的现状,总结出工程造价的信息化时代已经到来。结合BIM的特征,提出了BIM实训室在工程造价专业教学中的应用方案,解决了学生理论与实践脱节的问题,为社会培养了既符合国家发展要求,又与社会相接轨的实用人才。 相似文献
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条华蜗牛（Cathaica fasciola）翻身习性的研究* 总被引：1，自引：0，他引：1
【研究目的】研究条华蜗牛翻身习性,并研究蜗牛体重、环境温度、光照强度、饥饿和取食等因素对翻身时间的影响作用。【方法】将蜗牛身体倒置后,用秒表记录蜗牛身体从倒置至恢复原状的翻身时间长短来比较不同因素对翻身时间的影响。【结果】翻身时间随体重、光照强度和饥饿时间增加而增加,而随温度和取食时间增加而减少。体重与翻身时间呈极显著正相关（P<0.0001）。三体重组（I、III、V）翻身时间在30～40℃和取食48h分别极显著短于相应10℃和12h的（P<0.01）。在最低强度的白炽灯光（37.8LX）下翻身时间都极显著短于最高光强（4310LX）的,相同光照强度不同光质对翻身时间也有一定影响。饥饿72h后翻身时间都极显著长于12h的。【结论】条华蜗牛身体倒置恢复原状的时间可受多个因素的影响,除受到自身体重的影响外,还受到如光照、温度、是否取食等多个外界因素的影响。 相似文献
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为探讨长期钼暴露对子代小鼠肾功能的影响,采用2月龄清洁级小鼠60只(雌雄比2∶1),随机分为4组(每组10只雌鼠,5只雄鼠),雌雄分开饲养。饮水中加入不同剂量Na2MoO4.2H2O组成空白对照组、低钼组(100mg/L)、中钼组(200mg/L)和高钼组(400mg/L),4周后雌雄合笼饲养,待其产仔。妊娠期和哺乳期母鼠仍按原分组给予不同剂量的钼。仔鼠断奶后,同样按原分组给予不同剂量的钼。饲养8周后,再从每组后代中随机选取雌性小鼠10只和雄性小鼠5只合笼饲养,待其产仔。如此反复,使小鼠繁殖4代。选取第3代(F2)、第4代(F3)小鼠眼球摘除法采血并分离血清,测定血清肌酐和尿素氮。采集肾脏测定微核率和肾组织切片。结果表明,当饮水中Na2MoO4.2H2O达到200mg/L以上时,可显著增加后代小鼠肾细胞微核率(P<0.05)和血清肌酐浓度(P<0.05),降低血清尿素氮含量(P<0.05)。说明钼制剂可对小鼠后代肾脏产生损伤作用。 相似文献