猪白介素18基因在BHK细胞中的表达     

王笑笑  宗瑞谦  吕转萍  窦永喜  宋世斌  景志忠 《甘肃农业大学学报》2007,42(6):23-27

将猪白介素18(Porcine interleukin18,PIL-18)基因亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1中,构建了重组表达质粒pEGFP-PIL-18,利用脂质体法转染BHK细胞,采用荧光显微镜实时观察和RT-PCR检测技术确定目的蛋白的表达情况.结果在转染重组质粒24 h4、8 h后的BHK细胞中均观察到绿色荧光,转染的BHK细胞经G418筛选14 d后,用RT-PCR法检测目的基因,并扩增到长576 bpd的目的cDNA片段。表明在BHK细胞中成功地表达了PIL-18与EGFP的融合蛋白,这为下一步建立稳定表达PIL-18的细胞系奠定了基础.  相似文献   

小反刍兽疫病毒酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-tH的构建、表达和鉴定     

蒙学莲  朱学亮  翟军军  窦永喜  才学鹏 《中国兽医学报》2011,31(4)

利用PCR技术扩增获得PPRV-tH基因片段,将其克隆至酵母双杂交系统诱饵载体pGBKT7中,经酶切、测序验证其正确插入后,将重组诱饵质粒转化酵母菌AH109中,检测其在酵母中有无渗漏、自我激活作用和毒性。利用Western blotting分析诱饵蛋白在酵母中的表达情况,以鉴定其作为诱饵蛋白的可行性。结果表明,成功扩增到了PPRV-tH,并正确构建了pGBKT7-tH诱饵表达载体,此载体在酵母细胞AH109中无毒性、渗漏和自我激活能力,且能正确表达tH蛋白。  相似文献   

我国规模化羊场疫病流行情况及防控对策   总被引：1，自引：0，他引：1  

才学鹏  窦永喜 《兽医导刊》2011,(9):22-24

一、我国养羊业现状1.资源丰富,饲养量大。中国土地辽阔,草地资源达60亿亩,占国土面积的40%,是农田和林地的3倍多。农业可利用秸秆非常丰富,为养羊业的发展提供了良好的物质条件。建国以来,特别是近二十年来,我国养羊业发展迅速。据统计:2009年我国绵、山羊饲养量达55185.1万只(其  相似文献   

猪带绦虫六钩蚴45W-4BX的高效表达、纯化及活性分析     

骆学农  郑亚东  吴旭刚  窦永喜  景志忠  才学鹏 《中国兽医学报》2006,26(1):47-50

截去猪带绦虫六钩蚴45W-4B基因的N端信号肽和C端17个疏水氨基酸序列形成45W-4BX。设计特异性表达引物，PCR扩增目的片段，经BamHⅠ和EcoRⅠ酶切后与表达载体pGEX-4T-1连接转化BId感受态细胞。用酶切及PCR扩增鉴定阳性克隆，测序证明阅读框是否正确。用IPTG诱导表达，产物进行SDS-PAGE电泳，Western blot分析其活性。包涵体经纯化、透析复性后作为包被抗原检测囊虫猪和囊虫病人血清中的4B抗体。结果表明．截断的4BX（351bp）基因在大肠杆菌中获得高效表达。表达产物为相对分子质量40000的融合蛋白，并能被囊虫病人血清所识别。ELISA检测表明，囊虫病人血清中含有高滴度的4B抗体，所以45W-4BX的表达产物有可能作为候选抗原用于囊虫病的诊断和免疫预防。  相似文献   

马鼻炎病毒研究进展     

宋一鸣  窦永喜  张志东 《畜牧兽医学报》2015,(3):357-361

在小核糖核酸病毒科的众多成员中,仅有马甲型鼻炎病毒和马乙型鼻炎病毒可以感染马。马群中马鼻炎病毒血清阳性率很高,但对其致病机制知之甚少。本文对目前马鼻炎病毒生物学特性、流行特点、致病机制以及检测技术等方面的研究进展进行了总结,这对于进一步开展该病毒致病机制、检测技术等相关研究具有重要意义。  相似文献   

山羊CLAⅠα链基因的克隆及生物信息学分析     

邓阳  吴国华  颜新敏  赵志荀  李杨  李健  窦永喜  张志东  张强 《中国畜牧兽医》2017,44(7):2065-2070

为探究山羊CLAⅠα链基因的多态性,本试验根据GenBank中山羊CLAⅠα链基因序列设计引物,采用RT-PCR技术从10个品系山羊白细胞中克隆山羊CLAⅠα链基因,测序后进行生物信息学分析。结果表明,CLAⅠα链基因长度为1 074 bp,编码357个氨基酸。经核苷酸序列分析发现,10个品系山羊CLAⅠα链基因同源性集中在82.8%~99.5%之间。将10个品系山羊CLAⅠα链基因核苷酸推导的氨基酸序列进行比对,发现突变集中在α1区域（22-110位氨基酸）与α2区域（111-203位氨基酸）。遗传进化分析表明,GenBank中山羊CLAⅠα链基因与红寺湖绒山羊、河西绒山羊、陕北绒山羊、阿尔巴斯绒山羊的CLAⅠα基因遗传关系较近,与其他6个品系山羊,即简阳大耳山羊、金堂黑山羊、西农萨能奶山羊、美姑山羊、大足黑山羊、努比亚山羊的CLAⅠα基因遗传关系较远。本试验结果为进一步研究CLAⅠα链基因的多态性奠定了理论基础。  相似文献   

猪囊尾蚴MTsCL-1基因的原核表达     

宋军科  才学鹏  窦永喜 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2010,38(10):15-18

【目的】探讨原核表达猪囊尾蚴TsCL-1蛋白的生物学特性,为研究半胱氨酸蛋白酶(Cysteine proteinase,CP)在猪囊尾蚴与宿主相互关系中的作用奠定基础。【方法】将含有猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶TsCL-1基因的pGEX-4T TsCL-1重组质粒转入大肠杆菌BL21进行表达,诱导后的重组菌裂解上清通过谷胱甘肽（GST）琼脂糖亲和层析法进行纯化,纯化产物利用明胶蛋白电泳法进行活性检测。【结果】经SDS-PAGE分析显示,猪囊尾蚴TsCL-1基因表达的重组蛋白相对分子质量约为61 ku,表达的目的蛋白约占菌体总蛋白的57.4%。表达产物应用GST琼脂糖凝胶纯化后,纯化蛋白的纯度可达90%以上。明胶蛋白电泳结果显示,纯化蛋白对明胶具有水解活性,并且其水解活性能被半胱氨酸蛋白酶特异性抑制剂E-64抑制。【结论】从重组菌中成功表达了目的蛋白,该蛋白具有明显的水解活性,且E-64对其水解活性有抑制作用。  相似文献   

羊痘病毒P32基因的克隆与原核表达   总被引：11，自引：1，他引：10  

陈轶霞  郑亚东  窦永喜  乔军  景志忠  才学鹏 《动物医学进展》2007,28(1):31-34

根据发表的羊痘病毒P32基因,设计一对特异性引物,PCR扩增P32全长基因,将其克隆入pMD-18-T载体,获得重组质粒pMD-P32.再将P32基因亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,获得重组表达质粒pGEX-P32,转化大肠埃希菌BL21后用IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE分析.结果表明,P32全长基因在大肠埃希菌中以融合形式成功表达,分子质量为58 ku左右,与预期大小相符.  相似文献   

蛋用幼鸡的传染性法氏囊病     

窦永喜 《动物医学进展》1996,(1)

蛋用幼鸡的传染性法氏囊病窦永喜摘译李健强校传染性法氏囊病（ＩＢＤ）是引起蛋用幼鸡（Ｅｇｇ－ｔｙＰｅＰｕｌｌｅｔｓ）最严重而又难以控制的传染病之一。如果不通过环境卫生和疫苗接种适当地控制，一旦流行，危害十分严重。传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）可侵染幼鸡的...  相似文献   

猪繁殖和呼吸系统综合征病毒的分子生物学研究进展   总被引：4，自引：0，他引：4  

窦永喜  王云 《动物医学进展》2001,22(4):21-24

本文综述近年来有关猪繁殖和呼吸系统综合征病毒分子生物学方面的研究概况，内容涉及病毒基因组、蛋白及其变异，尤其对欧洲株和美洲株基因组和蛋白结构方面的不同进行了比较。  相似文献