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猪繁殖和呼吸系统综合征病毒的分子生物学研究进展 总被引：4，自引：0，他引：4
本文综述近年来有关猪繁殖和呼吸系统综合征病毒分子生物学方面的研究概况，内容涉及病毒基因组、蛋白及其变异，尤其对欧洲株和美洲株基因组和蛋白结构方面的不同进行了比较。 相似文献
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猪白介素家族重要基因的克隆、表达及其结构与功能预测分析 总被引：4，自引：0，他引：4
【目的】克隆、表达和预测分析猪白介素家族重要成员的结构与功能。【方法】以猪白介素基因家族为对象，通过对猪PBMC刺激诱导，提取RNA，采用RT-PCR技术克隆IL-4、IL-6、IL-18等重要功能基因，并进行原核表达和结构与功能分析。【结果】成功地克隆和表达了IL-4、IL-6和IL-18基因，序列分析发现，克隆的基因与NCBI/GenBank上登载的参考序列的同源性分别为99.25%、99.21%和100％，与其它各物种的基因及其编码蛋白间具有较大的种属差异性；在大肠杆菌中表达的IL-4和IL-6重组蛋白具有较高的生物活性；结构预测表明，这些蛋白分子均含有较多的磷酸化修饰、糖基化修饰（除IL-6）、蛋白激酶以及信号传导结合位点，其中IL-4、IL-6蛋白分子的螺旋化程度较高，均在60%左右，水溶性较低，但这3种蛋白的立体空间结构均为致密的球状，说明该结构特征是其多种生物学功能发挥的基础。【结论】本研究成功地克隆、表达和分析了猪白介素家族的IL-4、IL-6和IL-18等重要分子的结构与功能，为其进一步的生物学功能研究及其应用奠定了基础。 相似文献
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母源抗体对猪口蹄疫疫苗免疫应答的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
用液相阻断ELISA(Liquid phase blocking ELISA,LPB-ELISA)和正向间接血凝(Indirect hemagglutination test,IHAT)2种血清学试验方法对规模化饲养猪群仔猪的口蹄疫母源抗体、母源抗体的传递途径、消长规律、母/仔代特异抗体相关性及母源抗体对口蹄疫疫苗免疫的影响进行了研究和分析。结果表明,2种血清学方法均没有从未吸吮初乳的新生仔猪中检出特异抗体;在吸吮初乳后的仔猪血清中可检出特异性抗体,并于10日龄左右抗体效价升至峰值,而后随着日龄的增加,特异性抗体的效价呈明显的线性下降,母源抗体半衰期约为10～20d,至45～60日龄母源抗体效价降至不完全保护带(lgX<1.8)或更低;仔猪母源抗体水平与母体特异抗体水平呈正相关。通过对不同日龄仔猪接种口蹄疫疫苗后抗体水平检测发现,仔猪体内较高水平的母源抗体对疫苗免疫应答具有明显或一定的负面影响。 相似文献
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参照GenBank中登录的猪圆环病毒2型(PCV-2)全基因组序列,设计合成了两对特异性引物,从甘肃白银疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)病料中提取病毒DNA,分步扩增全基因组。回收PCR产物,将其插入pGEM-TEasy载体,构建了重组质粒pGEM-PCV-2,转化后筛选、提取阳性重组质粒进行测序。结果表明,克隆到的PCV-2全基因组长度为1767bp。应用DNAStar序列分析软件,对所测PCV-2序列与GenBank中登录的包括甘肃在内的国内外PCV毒株进行同源性分析。结果显示,克隆的PCV-2与英国株(UK-EU656143)遗传关系最近,其核苷酸和推导的氨基酸序列同源性高达96.2%和91.0%,与已报道的2株甘肃毒株(GS03-EU547458,GSLZ-FJ447482)遗传关系较远,可能是流行于甘肃白银的一个变异毒株(GSBY)。 相似文献
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【目的】探讨原核表达猪囊尾蚴TsCL-1蛋白的生物学特性,为研究半胱氨酸蛋白酶(Cysteine proteinase,CP)在猪囊尾蚴与宿主相互关系中的作用奠定基础。【方法】将含有猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶TsCL-1基因的pGEX-4T-TsCL-1重组质粒转入大肠杆菌BL21进行表达,诱导后的重组菌裂解上清通过谷胱甘肽(GST)-琼脂糖亲和层析法进行纯化,纯化产物利用明胶蛋白电泳法进行活性检测。【结果】经SDS-PAGE分析显示,猪囊尾蚴TsCL-1基因表达的重组蛋白相对分子质量约为61ku,表达的目的蛋白约占菌体总蛋白的57.4%。表达产物应用GST琼脂糖凝胶纯化后,纯化蛋白的纯度可达90%以上。明胶蛋白电泳结果显示,纯化蛋白对明胶具有水解活性,并且其水解活性能被半胱氨酸蛋白酶特异性抑制剂E-64抑制。【结论】从重组菌中成功表达了目的蛋白,该蛋白具有明显的水解活性,且E-64对其水解活性有抑制作用。 相似文献
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李氏杆菌溶血素(Listeriolysin,LLO)是产单核细胞李斯特菌的主要毒力因子,为探索LLO的免疫保护性和作为诊断抗原的可行性,本研究用重组LLO抗原和单核细胞增多性李氏杆菌(Listeria monocytogenes,LM)全菌分别免疫BALB/c小鼠和家兔,定期采血,ELISA检测抗LLO的抗体水平,并分别对免疫和对照动物攻毒致死剂量的LM,分析重组LLO抗原的免疫保护性。结果表明,小鼠和家兔在二免后10~20 d内LLO的抗体即可达到峰值,而且免疫动物能有效抵抗LM的感染。因此,重组LLO不仅可以用作动物LM的诊断抗原,而且具有作为基因工程疫苗的潜力。 相似文献
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猪圆环病毒2型甘肃兰州株全基因组序列的克隆及序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
参照GenBank中登录的猪圆环病毒2型(PCV2)全基因组序列,设计合成了2对特异性引物,从甘肃兰州疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)病料中提取PCV2基因组DNA,分段PCR扩增全长基因组。回收PCR产物,将其插入pGEM-T Easy载体,构建了重组质粒pGEM-PCV2,转化后筛选、提取阳性重组质粒进行测序。结果表明,克隆到的PCV2全基因组长为1767 bp。应用DNAStar序列分析软件对所测PCV2序列与GenBank中登录的包括甘肃在内的国内外PCV2毒株进行同源性分析。结果显示,克隆的PCV2与ZhouKou(EU656143)毒株遗传关系较近,其核苷酸和推导的氨基酸序列同源性高达99.4%、98.6%,与已报道的GS03(EU547458)甘肃毒株遗传关系较远,可能是流行于甘肃兰州的一个变异毒株GSLZ(GenBank登录号为:FJ447482)。 相似文献
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小反刍兽疫病毒P基因的克隆及其结构与功能分析 总被引：2，自引：0，他引：2
【目的】对小反刍兽疫病毒P基因进行克隆,并对其结构和功能的关系进行分析,为研究小反刍兽疫病毒P蛋白的功能及其在病毒增殖过程中的作用奠定基础。【方法】利用RT-PCR的方法对小反刍兽疫P基因全长进行克隆,通过生物学软件对其核苷酸序列和氨基酸序列进行了比对,利用I-TASSER进行三级结构预测,然后分析其结构和功能之间的关系。【结果】P基因和MV、CDV、RPV、DMV和PDV的P基因的相似性分别为62.9%、63.3%、64.4%、65.1%和60.4%,氨基酸的相似性分别为45.9%、46.2%、50.6%、50.3%和47.0%。三级结构表明该蛋白由3个结构域构成,中间是由多个α-螺旋构成的结构域,主要行使与L大蛋白和RNA结合的功能,两边分别是N-端和C-端结构域,C-端结构域含有3个α-螺旋,分别位于458—468aa、492—499aa和503—505aa位,主要作为N蛋白α-螺旋的结合位点。【结论】本研究成功地克隆小反刍兽疫病毒P基因,分析和预测了p蛋白的结构和功能的关系,为其进一步的生物学功能研究及其应用奠定了基础。 相似文献
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猪白细胞介素-4基因的克隆与表达 总被引：1，自引：2，他引：1
利用RT-PCR技术,从被刺激诱导的PBMC中克隆IL-4基因,序列分析表明:克隆的猪IL-4基因序列与GenBank上登录的IL-4基因的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99%和97.8%.然后用表达型引物从T载体上扩增IL-4基因,双酶切PCR产物后与表达载体pGEX连接,构建重组表达质粒pGEX-IL-4,用IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析表明,表达出38 ku融合蛋白,占菌体总蛋白的30%以上,并且以包涵体的形式存在,这为猪重组IL-4规模化生产和疫苗佐剂的研制奠定了基础. 相似文献
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从猪带绦虫六钩蚴cDNA表达文库中筛选、克隆的Ts01基因，设计表达性引物，亚克隆到pGEX-4T-1表达载体，构建了pGEX-GST-Ts01的融合表达重组载体，转化BL21寄主菌和IPTG诱导表达后，经SDS-PAGE和Western蛋白分析．表明成功地高效表达了约40000右的融合蛋白质．与预测的相对分子质量大小一致，表达量达40％左右。表达产物具有免疫学活性，而且呈可溶性，未形成包涵体，这与用蛋白质软件分析的Ts01编码蛋白水溶性相一致。 相似文献