用0.25 mL细管冷冻保存猪精液     

高俊锋  郑筱峰  葛立军  卢庆  芮荣 《农业生物技术学报》2008,16(2):264-269

研究旨在建立优化的猪精液冷冻保存方法.实验表明,采用ZORLESCO(ZO)液对猪精液进行预稀释,室温平衡1 h.加入冷冻Ⅰ液后于5℃水浴平衡1.5 h,再加入冷冻Ⅱ液平衡2 h后装入0.25 mL细管,液氮面上3cm处平衡10 min投入液氮,采用37℃水浴解冻30 s,可获得最佳冷冻效果.解冻后的精子活力平均为0.58±0.03,质膜完整率为(63.2±1.2)%,顶体完整率为(51.4±2.6)%;精子畸形率最低,仅为(14.0±3.0)%.  相似文献   

猪卵母细胞超低温冷冻保存技术研究进展     

朱良成  芮荣  张德福 《动物医学进展》2006,27(3):1-5

猪卵母细胞有其特殊的生理构造,其冷冻效率一直很低,有关猪卵母细胞冷冻保存的研究尚处在探索阶段。猪卵母细胞冷冻保存方法,主要有快速冷冻和玻璃化冷冻两种,后者的冷冻效果似乎要优于前者,暗示着玻璃化冷冻在猪上的应用可能比程序化法更为优越。在玻璃化冷冻方面,包括OPS法、微滴法和电镜铜网法等,都是在冷冻载体上加以改进。此外,在冷冻保护剂、冷冻程序等方面,仍需要改进和优化,以期进一步提高猪卵母细胞的冷冻效率。  相似文献   

表达绿色荧光蛋白的猪胚胎生殖细胞分离     

芮荣  邱妍  胡元亮  范必勤 《南京农业大学学报》2004,27(4):89-92

以质粒DNA为增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的载体，对处于快速增殖期的8株猪胚胎生殖(EG)细胞(4—9代)进行转基因试验。用1μg DNA和2μL LipofecTamine 2000转染EG细胞后，共获得4株转染EGFP基因的EG细胞系(EG—EGFP)，可发出强绿色荧光；EG—EGFP细胞连续培养2周以上可分化为多种细胞类型。显微注射EG—EGFP细胞至卵裂期胚胎、桑椹胚卵周隙内或囊胚腔中，共注射135枚胚胎，其中112枚存活并发育至囊胚(83．0％)；86枚嵌合体胚培养后含有荧光细胞，其中57枚囊胚在内细胞团(ICM)上发现有EG—EGFP细胞。  相似文献   

猪卵母细胞玻璃化冷冻保存技术的研究进展     

戴建军  芮荣 《中国畜牧杂志》2007,43(3):52-54

卵母细胞冷冻保存技术在动物种质资源保存、濒危动物保护等方面具有独特的作用,猪卵母细胞的冷冻保存仍是一项世界性难题,尚处于摸索阶段。现就猪卵母细胞冷冻保存的现状、冷冻原理与方法及冷冻损伤等问题进行综述。  相似文献   

猪核移植及其相关技术的研究进展(综述)     

朱良成  芮荣 《上海农业学报》2004,20(2):26-30

猪器官的解剖结构和生理生化特性与人类的相近，猪有可能成为人类异种器官移植的首选供体动物。“多莉”羊的诞生，启发了人们改造猪器官用于异种移植的思路，大大促进了猪核移植技术的发展。该文对猪核移植及其相关技术的研究进展加以综述分析，以供参考。  相似文献   

猪卵母细胞、胚胎玻璃化冷冻初步研究     

张德福  刘东  王邵凯  王少兵  芮荣  汤琳琳 《中国畜禽种业》2005,(11)

本试验研究了不同冷冻承载工具,玻璃化溶液处理时间和不同发育阶段对猪卵母细胞超低温冷冻保存的影响。(1)比较凝胶上样管(gel-loadingtip;GLT)、开放式拉长麦管(openpulledstraw;OPS)、玻璃微细管(glassmicropipette;GMP)保存法对卵母细胞冷冻效果的影响。(2)比较在EFS40中处理30s,1min,2min对卵母细胞冷冻效果的影响。(3)比较MII期和GV期的卵母细胞冷冻效果。结果表明,(1)GLT法体外存活率为52.8%略优于OPS法(50.5%)和GMP法(51.1%)。(2)解冻后30s组和1min组的体外存活率分别为48.82%、43.9%,显著优于2min组的18.8%(p<0.05)。(3)解冻后MII期体外存活率为53.6%,显著优于GV期的22.0%(p<0.05)。(4)冷冻对猪卵母细胞的发育潜能影响较大,用新鲜精液进行体外受精,仅有4.9%的受精卵分裂,极显著低于对照组的49.5%(P<0.01);并且发育至4细胞期的比例为1.7%,未能发育至8细胞期。胚胎在25%VS1冷冻液中平衡20分钟后将胚胎在65%VS1冷冻液中平衡20秒,然后将胚胎再放入到100%VS1冷冻液中在30秒的时间内装入GLT管投入到液氮中进行保存。扩张囊胚的冷冻效果要明显优于孵化囊胚。  相似文献   

小鼠-猪种间核移植胚胎玻璃化冷冻保存     

剧世强  赵雪璠  张妍婷  孔妍  李建珅  芮荣 《南京农业大学学报》2012,35(2):115-119

以小鼠卵丘细胞为供核细胞,猪体外成熟去核卵母细胞为受体,构建小鼠-猪种间体细胞核移植(iSCNT)胚胎,并以猪体细胞核移植(pSCNT)胚胎为对照,采用开放式拉长细管(OPS)法对所获iSCNT胚胎进行冷冻保存,研究不同冷冻保护液(ES、EFS和EDFS)及胚胎不同发育阶段(2-、4-、8-细胞)对冷冻效果的影响。结果显示:小鼠-猪iSCNT胚胎卵裂率与猪pSCNT胚胎相比无显著差异(P>0.05),但其8-细胞发育率则明显较低(28.1%对56.8%,P<0.05)。采用ES液作为冷冻保护液,iSCNT胚胎冻后存活率与EDFS组相似,但显著高于EFS组(28.6%和22.7%对9.5%,P<0.05);与其他发育阶段相比,2-细胞期小鼠-猪iSCNT胚胎可获得最高的冻后存活率;小鼠-猪iSCNT各期胚胎的冻后存活率均低于pSCNT组,但无统计学差异(P>0.05)。结果表明,以ES液为冷冻保护液,选择2-细胞期小鼠-猪iSCNT胚胎进行OPS法冷冻保存,可获得相对较高的冻后存活率,但iSCNT胚胎的冻后存活率和体外发育能力均较pSCNT胚胎低。  相似文献   

加味五子衍宗丸对公兔精液品质的影响     

芮荣  邓俊良  彭广能 《中国牛业科学》1994,(Z2)

10只公兔随机分成两组，试验组7只兔每日灌服加味五子衍宗一剂，连服二剂。结果表明，试后第二、三周的精子活力比试前分别提高0．26和0．30级，差异均极显著（P＜0.01）；射精量及精子密度在用药后第三周增至高峰，分别达0．55ml和304．52×106个／ml，与试前相比有显著差异（P＜0．05）；精子畸形率在用药后第一周就由试前的17.13％下降到13.17％（P＜0．05），并在用药后三周内保持下降趋势，不灌药的3只对照公兔其各项指标试前试后虽略有波动，但均无显著差异（P＞0．05）．  相似文献   

猪圆环病毒2型ORF1部分位点突变对病毒复制能力的影响     

李荷然  肖琦  温立斌  朱雪蛟  芮荣  何孔旺 《畜牧与兽医》2024,(1):71-76

猪圆环病毒2型(PCV2)可引起断奶仔猪多系统衰竭综合征,导致仔猪逐渐消瘦。PCV2 ORF1表达的Rep蛋白及其剪切体Rep′是PCV2复制所需的重要蛋白。为了研究PCV2 ORF1部分位点对PCV2复制能力的影响,本试验通过构建PCV2 ORF1区域点突变双拷贝感染性克隆质粒,在无PCV2污染的PK-15细胞中进行病毒拯救,使用荧光定量PCR检测不同位点突变病毒培养不同代次上清液的Ct值。结果：将PCV2 Rep的17 aa、19 aa、20 aa和21 aa突变为丙氨酸后病毒无法成功拯救,2 aa突变后严重影响病毒的复制能力,3 aa、5 aa和18 aa突变后病毒的复制能力增强且细胞病毒载量高于PCV2原毒株,推测17 aa、19 aa、20 aa和21 aa是影响PCV2复制的关键作用位点。本研究结果为未来PCV2复制相关研究提供了试验依据。  相似文献   

卵母细胞扫描电镜和透射电镜样本的制作     

武彩红  张斌  郑筱峰  芮荣  戴建军 《农业科学与技术》2009,10(5):110-112,188

[目的]探讨卵母细胞扫描电镜和透射电镜的制作方法,为相关研究提供技术支持。[方法]以猪GV期和体外成熟MⅡ期卵母细胞（抽吸法采集）为研究对象。①扫描电镜样本制备：供试GV期和MⅡ期卵母细胞于PBS（pH值7．4）中清洗后,部分转入0．1％透明质酸酶中,38．5℃孵育15min,微吸管吹打去除卵丘细胞（CC）,即获得无卵丘细胞的卵母细胞,用以观察卵母细胞外透明带（ZP）结构;取去除卵丘细胞的部分卵母细胞,经PBS液洗后,再置于0．5％链霉蛋白酶中,在实体显微镜下观察,待透明带溶解时,小心地将卵母细胞转入PBS中,即获得了无透明带的卵母细胞,用以观察卵母细胞膜表面的微绒毛（Mv）。未去除卵丘细胞的卵母细胞、去除卵丘细胞的卵母细胞及去除透明带的卵母细胞分别经PBS洗2～4次后,于2．5％戊二醛中4℃固定6h,再经PBS清洗3次,每次30min;再于1％锇酸中固定1．5h,然后再经PBS清洗3次,每次30min;之后,用乙醇逐级（30％、50％、70％、90％、100％、100％）脱水,每级20min;样品脱水后,用乙酸异戊脂置换;置换后的样品直接移到样品台上,再放入临界点干燥仪干燥,粘台,IB-5离子溅射仪喷金,置于扫描电子显微镜下观察、拍照。②透射电镜样本制备：供试卵母细胞也经PBS清洗,戊二醛固定,琼脂包埋后锇酸固定,乙醇脱水,步骤基本同上,只是最后用环氧丙烷置换。脱水后的样品于Epon-812树脂和丙酮等体积混合液中渗透4h,再在纯Epon-812中渗透过夜;然后将样品包埋,放入聚合器中聚合（35℃,24h;45℃,24h;60℃,48h）;聚合后的样品在实体显微镜下修块,半薄切片定位,重新包埋,LKB—V超薄切片机切片;超薄切片用醋酸双氧铀-柠檬酸铅双重染色,样品自然干燥后在透射电子显微镜下观察、拍照。[结果]电镜下观察到的细胞形态结构完好,超微结构清晰。扫描电镜下,GV期卵母细胞的卯丘细胞紧密包围在卯母细胞外,微绒毛呈致密状垂直于卵膜表面,透明带呈不规则的蜂窝状,有小梁突起。在体外成熟MⅡ期卵母细胞中,卵丘细胞变得松散,卵母细胞表面的微绒毛结构显得更光滑,透明带呈不规则的蜂窝样,但蜂窝状结构增多,且小梁突起更明显。透射电镜下,GV期卵母细胞的卵丘细胞在透明带周围紧密排布,并有大量突起伸人透明带中;卵母细胞微绒毛数量较多、相对较长,且也伸人透明带中;线粒体呈圆形,多为横嵴并清晰,成簇分布于皮质区;脂滴以两种不同形式存在于大部分细胞质内,一种呈均质状,另一种不均质且有透亮条纹,两种形式的脂滴常相邻存在,并以均质脂滴居多。脂滴外包有不连续的滑面内质网;高尔基体发达,由多层扁平囊泡及大小泡组成;在MⅡ期卵母细胞中,卵丘细胞间缝隙连接增大,出现了明显的卵周隙;与培养前卵母细胞相比,微绒毛相对较短、较粗,且从ZP内撤回;线粒体体积增大,仍成簇伴随着脂滴分布;脂滴仍以两种不同形式存在,但以不均质脂滴居多;不均质脂滴呈球状,且上透亮条纹增多,电子密度更高;皮质颗粒位于卵质膜下,呈单层排列。[结论]证实该方法适用于卵母细胞超微结构观察的制样,另外,此法也适用于休积小、数量少、游离细胞的电镜样本制备。  相似文献