一种基于重组截短Gc_(aa407～614)蛋白的赤羽病病毒抗体间接ELISA方法的建立     

王建华  赵丹  陈本龙  张俊哲  王玉玲  肖妍 《中国动物检疫》2019,36(5):85-92

为建立一种检测赤羽病病毒(Akabane virus,AKAV)抗体的ELISA方法,对Gc蛋白从407位至614位氨基酸的编码序列,经密码子优化后进行基因合成,然后克隆至重组表达载体PET-32a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用1 mmol/L IPTG在37℃进行诱导表达。用Ni~(+2)-NTA树脂亲和层析方法纯化重组蛋白(trGc_(aa407~614)),以Western blotting检测其抗原性;用纯化trGc_(aa407~614)建立间接ELISA方法(trGc_(aa407~614)-ELISA),并评价该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示:重组蛋白trGc_(aa407~614)以包涵体形式在大肠杆菌中高效表达,经Ni~(+2)-NTA树脂亲和层析纯化后的浓度2.4 mg/mL,纯度为94%,对山羊抗AKAV阳性血清呈现较好的抗原反应性;所建立的trGc_(aa407~614)-ELISA方法的最佳抗原包被浓度为4.0μg/mL,血清稀释度为1:80,血清阴阳性的OD450临界值为0.318;该方法对AKAV阳性血清呈特异性反应,组内试验和组间试验的变异系数均小于10%。用该方法对273份进口牛血清进行AKAV抗体检测,发现10份血清为阳性。总之,本研究建立的trGc_(aa407~614)-ELISA方法为血清样品中赤羽病病毒抗体的检测提供了有效手段。  相似文献   

黑寡妇蜘蛛牵引丝单一多聚序列对蚕丝性能改良的研究     

阮靖华  吴美玉  赵丹  唐晓利  钟伯雄 《蚕业科学》2021,47(5):423-429

蚕丝性能的优劣决定了蚕丝的价值和使用领域.本研究人工设计和构建了包含蜘蛛丝MaSp1基因中的32倍type1序列(32×MT1)和红色荧光蛋白表达框的piggyBac转基因质粒pBac[DsRed-32×MT1],通过显微注射家蚕品种兰10蚕卵获得了能够稳定遗传的转基因家蚕品系pBac-32×MT1.经荧光显微镜筛选、插入位点分析、mRNA表达丰度检测以及茧壳蛋白检测,证明了转基因家蚕能够表达融合了蛛蛛丝蛋白和轻链蛋白的重组丝.扫描电镜观察显示,转基因家蚕茧壳和丝纤维表面的形态和结构与野生型蚕品种兰10相近.傅里叶转换红外光谱去卷积分析表明,转基因家蚕丝蛋白二级结构中与丝应力有关的卢折叠含量达到63.6％,而野生型品种兰10丝蛋白的β折叠含量约为20％.蚕丝机械性能测定表明,转基因家蚕蚕丝的应力、应变和韧性比野生型家蚕丝分别提升了27.7％、10.7％和45.2％.上述结果表明,在家蚕基因组中导入MaSp1基因的type1单一多聚序列能显著增强重组丝的综合力学性能.  相似文献   

缓控释肥在如东县冬小麦上的应用效果研究     

魏景辉  赵丹  刘爱云  杨正华  张驰 《现代农业科技》2022,(17):24-27

采用平行试验法,在如东县丰利镇和马塘镇开展了冬小麦缓控释肥试验。结果表明：常规施肥全肥区较配方施肥全肥区折纯化肥投入总量增加了96 kg/hm2,平均实收产量仅增加60 kg/hm2,配方施肥氮、磷、钾肥的平均利用率分别为40.08%、17.62%、31.73%,常规施肥氮、磷、钾肥的平均利用率分别为34.14%、15.52%、19.52%。说明配方施肥较常规施肥具有化肥减量及节本增收优势。  相似文献   

碧泊沉积物样品中趋磁细菌多样性对静磁场的响应     

邢维佳  赵丹  张国静  贺双俊  晏磊 《黑龙江八一农垦大学学报》2020,32(6):70-76

  相似文献   

大规模分布式光伏接入 对电网调控运行的影响与展望     

樊世超  赵丹 《农村电气化》2020,(7)

文章在对分布式光伏并网技术要求进行总结的基础上,分析了大规模分布式光伏接入对电网调控运行的影响,重点从电力平衡调整、配电网设备安全稳定运行两方面进行阐述。结合目前泛在电力物联网建设与"源网荷储泛在调度控制"研究,提出了提高分布式光伏智能感知特性的应对策略与展望。  相似文献   

黑龙江省节能日光温室越冬番茄品种耐寒性初步评价   总被引：2，自引：0，他引：2  

王贤  赵丹  吴凤芝  刘守伟 《北方园艺》2014,(21)

在已有研究的基础上,选用8个番茄品种进行越冬栽培试验,采用隶属函数方法,对番茄植株抗寒性生理指标进行综合评价。结果表明:"光辉101"、"劳斯特"品种叶片和根部各指标的隶属函数值较大,抗寒性较强,较适合黑龙江中部地区进行日光温室越冬栽培,表现较差的是"极早红粉"。  相似文献   

林业保护中封山禁牧存在的问题与优化策略     

赵丹 《现代农业科技》2020,(13)

林业是生态环境的重要组成,为了改善生态环境,国家出台封山禁牧、退耕还林等政策法规,来确保林业健康可持续发展,以此来保障人民的基本利益,为国家的实现资源的可持续发展做铺垫。笔者分析封山禁牧工作中存在的问题,探讨最佳的解决方法,旨在确保我们国家林业的有效发展。  相似文献   

干旱胁迫对3种灌木生长及叶水分生理的影响     

杨建伟孙桂芳赵丹刘嘉翔杨思佳史宝胜 《林业与生态科学》2018,(4):423-428

以天目琼花、麻叶绣线菊和小紫珠幼苗为试验材料,采用盆栽控水法设置4个水分梯度,分别为田间最大持水量的95%(对照)、75%(轻度干旱)、55%(中度干旱)和35%(重度干旱),研究干旱对3种灌木生长及叶水分生理的影响。结果表明:随着干旱胁迫的加剧,天目琼花、麻叶绣线菊和小紫珠的株高、单株叶面积显著下降,在重度干旱胁迫下分别降低了27.59%、32.75%、38.37%,22.26%、24.50%、27.84%;总鲜重和总干重分别减少了47.70%、54.44%、65.83%,58.47%、65.81%、63.61%。3种灌木根冠比在轻度干旱胁迫下上升,分别增加了17.57%、7.27%、11.54%;在重度干旱胁迫下下降,分别减少了48.65%、3.64%、7.69%。随着胁迫程度加剧,3种灌木叶片相对含水量和失水率逐渐下降,在重度干旱胁迫下分别减少了6.83%、33.39%、37.32%,7.58%、8.60%、25.13%;水分饱和亏则显著上升,分别增加了31.97%、73.55%、538.58%。总的来说,天目琼花抗旱性最强,麻叶绣线菊次之,小紫珠最不耐旱。  相似文献   

一种检测奶样中布鲁氏菌抗体免疫层析方法的建立     

肖妍  李蓉蓉  霍蕾  董志珍  张俊哲  赵丹  杨若松  郭鹏 《中国动物检疫》2019,36(5):68-73

通过制备脂多糖(LPS)并将其作为检测抗原,建立了一种检测奶样中布鲁氏菌抗体的酶联免疫层析方法。通过对处理方法和反应条件的优化,制备出敏感性高、特异性强的布鲁氏菌抗体检测试纸条。该试纸条敏感性为98.0%,抗体滴度为1:2~1:8,特异性为96.0%,且与其他常见病原无交叉反应,批内、批间重复性良好。保存期加速试验显示,该试纸条在2~30℃下可保存12个月;符合率验证显示,该方法与标准奶样的符合率达94.9%。上述结果表明,该检测方法具有敏感性高、特异性强以及方便、快捷等优点,适用于现场大批量检测,因而可应用于奶牛场布鲁氏菌病的快速诊断。  相似文献   

H1和H3亚型猪流感病毒二重TaqMan-MGB探针荧光RT-PCR检测方法的建立     

王建华  陈小金  张俊哲  王玉玲  肖妍  赵丹  谭旭菲  王乃福  陈本龙  董志珍  赵祥平 《中国动物检疫》2016,33(10):90-94

根据H1和H3亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(HA)编码基因的保守序列,分别设计合成特异性引物和Taq Man-MGB探针,建立了一种检测H1和H3亚型SIV的二重荧光RT-PCR方法。结果显示,该方法仅对H1和H3亚型SIV呈特异性扩增,对H9亚型SIV、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(SFV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)无交叉扩增反应;用该方法检测H1和H3亚型SIV的HA基因的RNA标准对照(SIV-H1-RNA,SIV-H3-RNA),最适线性检测范围分别为3.7×10~1~3.7×10~8拷贝数/反应和3.4×10~0~3.4×10~8拷贝数/反应,最低检出限分别为38和34个拷贝数;该方法的组内试验和组间试验的变异系数均小于2.0%,显示其具有良好的可重复性。用该方法对520份进口猪的鼻拭子样本和78份国内猪鼻拭子样本进行SIV检测发现,进口猪鼻拭子样本的SIV检测结果均为阴性,12份国内猪鼻拭子样本的H1亚型SIV检测结果为阳性,5份国内猪鼻拭子样本的H3亚型SIV检测结果为阳性。本方法的建立为H1和H3亚型SIV检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。  相似文献