绵羊卵母细胞采集、体外成熟和胚胎体外培养对体外受精技术效率的影响     

闵江涛  杜卫华  赵学明  郝海生  杭苏琴  朱化彬 《中国畜牧兽医》2014,41(5):202-207

利用屠宰场采集的绵羊卵巢作为试验材料,研究了不同卵母细胞采集方法(卵泡冲洗法、剖切法、注射器抽吸法和真空泵抽吸法)、成熟液中添加不同来源激素(BIONICHE或宁波激素厂生产 FSH/LH)和血清(发情绵羊血清或胎牛血清),以及mSOF和mCR胚胎培养体系对绵羊体外受精各环节效率的影响。结果表明,卵泡冲洗法获得A、B两级卵母细胞比例为77.1%,显著高于其他3种方法(P＜0.05),添加BIONICHE FSH/LH+ESS成熟液中,卵母细胞成熟率显著高于其他添加方式(P＜0.05),mSOF和mCR胚胎培养体系在卵裂率上无显著差异(P＞0.05),但mSOF组中囊胚率和孵化率均显著高于mCR组(P＜0.05)。综上所述,本研究中卵泡冲洗法更适合绵羊卵母细胞采集,成熟液中添加BIONICHE FSH/LH和ESS可显著促进绵羊卵母细胞成熟;与mCR培养体系相比,mSOF培养体系更适合绵羊体外受精胚胎的发育。  相似文献   

复方中草药对彭泽鲫非特异性免疫功能的影响   总被引：17，自引：4，他引：13  

刘华忠  刘定忠  赵学明 《淡水渔业》2004,34(3):31-32

用添加了复方中草药的配合饲料投喂彭泽鲫 (PengzeCrucianCarp) ,并对投喂后彭泽鲫的NBT阳性细胞与溶菌酶活性进行检测。结果表明 :添加 1 0 %和 1 5 %的饲料均能显著提高鱼体的非特异性免疫能力(P <0 0 5 ) ,二者间相比较 ,后者稍高于前者 ,差异不显著 (P >0 0 5 )。添加 0 5 %的饲料尽管也可提高免疫能力 ,但不明显 (P >0 0 5 )。  相似文献   

能量负平衡影响奶牛卵泡发育的机制     

曹建华  杨柏高  张培培  冯肖艺  张航  余洲  牛一凡  郝海生  杜卫华  朱化彬  杨凌  赵学明 《畜牧兽医学报》2024,(1):22-30

奶牛能量负平衡(negative energy balance, NEB)是奶牛产后泌乳初期常会发生的一种代谢性疾病,当奶牛摄入能量无法满足其消耗能量时就会达到NEB状态。奶牛处于NEB状态时易引起患病率增加、妊娠率降低、生产性能下降,给集约化奶牛生产带来很大的经济损失。随着分子、组学技术的广泛应用,奶牛泌乳初期NEB对牛卵泡发育的影响机制得到进一步揭示。本文根据近年来相关报道,综述奶牛早期泌乳NEB对牛卵泡发育分子机制相关研究进展并进行展望,以期为减少NEB对奶牛繁殖性能的不利影响提供理论参考。  相似文献   

牛冻、鲜精子差异蛋白的双向电泳和质谱鉴定的初步研究   总被引：1，自引：1，他引：0  

吴承疆  朱化彬  王栋  郝海生  杜卫华  赵学明  路永强 《中国畜牧兽医》2010,37(11):100-104

采用适合于精子裂解的热Trizol法制备牛精子全蛋白质,应用线性固相IPG胶条（pH 3～7、24 cm）进行精子全蛋白2-DE电泳,在冻精和鲜精蛋白图谱中分别检测到839±34个蛋白点和564±16个蛋白点,经差异比较和显著性检验,在冻、鲜精子中共得到19个具有显著差异的蛋白点,在冻精中表达上调的蛋白点有9个,表达下调的蛋白点有1个,只在冻精中表达的蛋白点有9个。经过酶解和质谱鉴定,获得了3个差异蛋白点的质谱信息,生物信息学分析结果发现,这3个差异点分别为中性鞘磷脂酶激活结合因子（FAN）、谷胱甘肽S转移酶（GST-Mu5）及锌离子结合细胞色素氧化酶,分别与细胞应激和凋亡有关。推测认为,这3种与细胞应激反应及凋亡相关的蛋白在冻精中显著增高可能与精子冷冻损伤有关。  相似文献   

荧光定量PCR检测牛性别相关基因DAX1表达的标准质粒和标准曲线的构建   总被引：1，自引：1，他引：0  

徐超  杜卫华  王宗礼  余大为  王栋  郝海生  赵学明  朱化彬 《中国畜牧兽医》2010,37(9)

本研究根据GenBank中登录的剂量敏感的性别反转-先天性肾上腺发育不良基因1(dosage-sensitive sex reversal,adrenal hypoplasia critical region,on chromosome X,gene 1,DAX1)设计引物,构建包含DAX1基因cDNA片段的质粒,作为中国荷斯坦牛DAX1基因mRNA定量检测的标准品,建立了DAX1基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法.结果表明,该方法特异性好,检测灵敏度达102拷贝,线性范围为102～106拷贝,阈值循环数(Ct)与PCR体系中起始模板量的对数值间有着良好的线性关系(r=0.99975),扩增效率高(E=100%),可以作为检测牛DAX1基因mRNA定量检测方法.  相似文献   

GIS在金沟岭林场森林多功能评价中的应用   总被引：3，自引：1，他引：2  

赵静  刘东兰  郑小贤  赵学明  赵洪生 《西北林学院学报》2010,25(6):207-209

以吉林省汪清林业局金沟岭林场为研究对象,基于ArcGIS平台,利用森林资源调查数据,根据社会需求和森林资源特点,采用综合因子评价法,建立了金沟岭林场森林多功能评价体系。对珍贵树种保护、母树、水土保持、木材生产和护路5个主要功能进行评价,并绘制森林功能分布图。与传统方法相比,利用ArcGIS强大的空间分析和属性数据库管理功能,其评价更加快速、准确,减少了传统定性评价的不确定性,提高了工作效率。  相似文献   

牛精子蛋白质组的双向电泳和质谱鉴定初步研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

韩伟东  王栋  郝海生  杜卫华  赵学明  朱化彬 《安徽农业大学学报》2009,36(4)

通过建立牛精子双向电泳-质谱鉴定研究平台,为从蛋白质水平研究精子生理机能奠定技术基础;采用改进的热TRIzol法裂解精子细胞制备蛋白,应用双向凝胶电泳(2-DE)分离牛精子蛋白,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定蛋白质点.得到了重复性较好的牛精子2-DE图谱,质谱鉴定16个蛋白质点.建立牛精子双向电泳-质谱鉴定研究平台,为后续牛精子X、Y差异蛋白点的检测和分析奠定了理论和技术基础.  相似文献   

钌红对玻璃化冷冻牛卵母细胞线粒体Ca2+的调控研究     

王娜  李崇阳  朱化彬  郝海生  王皓宇  闫长亮  杜卫华  王栋  刘岩  庞云渭  赵学明 《中国畜牧兽医》2017,44(5):1431-1437

玻璃化冷冻会严重损伤哺乳动物卵母细胞的线粒体功能,进而极大地限制了其解冻后的发育能力。为此,本试验设置3个钌红（RR）处理组,即牛卵母细胞用含0.5、1、2 μmol／L RR的玻璃化冷冻液进行冷冻,解冻后放入含0.5、1、2 μmol／L RR的体外成熟液中继续培养0.5 h,同时,新鲜卵母细胞一部分不进行冷冻,一部分用不含RR的冷冻液进行玻璃化冷冻,分别作为新鲜对照组和玻璃化冷冻对照组,然后共检测5组牛卵母细胞线粒体Ca²⁺水平、ATP含量及孤雌激活后胚胎的发育能力,进而研究RR对玻璃化冷冻牛卵母细胞线粒体Ca²⁺水平的调控作用。结果显示：①玻璃化冷冻显著提高了牛卵母细胞中线粒体Ca²⁺水平（P＜0.05）,而2 μmol／L RR处理组线粒体Ca²⁺水平显著低于冷冻对照组（P＜0.05）,但与新鲜组相比无显著差异（P＞0.05）;②玻璃化冷冻显著降低了牛卵母细胞中ATP含量（P＜0.05）,2 μmol／L RR处理组卵母细胞中ATP含量显著高于冷冻对照组及0.5、1 μmol/L RR处理组（P＜0.05）;③玻璃化冷冻对照组卵裂率、囊胚率显著低于新鲜对照组（P＜0.05）,1 μmol／L处理组卵裂率、囊胚率与新鲜对照组相比无显著差异（P＞0.05）。综上所述,RR处理能显著抑制解冻后牛卵母细胞线粒体Ca²⁺流入,保护线粒体功能,提高其发育能力。本试验结果为正向调控玻璃化冷冻卵母细胞线粒体Ca²⁺水平,进而提高其发育能力,促进玻璃化冷冻卵母细胞的广泛应用提供了参考依据。  相似文献   

小鼠卵丘细胞对牛卵母细胞体外成熟和孤雌发育的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

任晶晶  赵学明  秦彤  杜卫华  郝海生  刘岩  王栋  朱化彬 《农业生物技术学报》2012,20(4):411-419

本实验通过牛生发泡(GV)期无卵丘细胞卵母细胞-裸卵(denuded oocytes,DOs)与小鼠卵丘细胞(mouse cumulus cells,mCCs)共培养,研究异种mCCs对牛DOs体外成熟和孤雌激活后发育的影响,进而探讨卵丘细胞对卵母细胞的作用机制,为牛卵母细胞体外成熟效率提高提供实验依据.牛卵母细胞分为COCs(cumulus-oocytes complexes)组、DOs+bCCs(bovine cumulus cells,bCCs)组、DOs+mCCs组和DOs组4个组合,体外成熟22～24h后,检测各组卵母细胞第一极体排出率、MⅡ期卯母细胞中谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量利孤雌激活后的发育能力,以及卵母细胞内骨形态发生蛋白15( BMP15和生长分化因子9(GDF9)mRNA相对表达水平.结果表明:(1) DOs+mCCs组和DOs+bCCs组卵母细胞核成熟率[(68.48±5.71)％,(71.00±4.27)％]显著低于COCs组(84.70±3.41)％(P＜0.05),但均显著高丁DOs组(54.26±5.03)％(P＜0.05); (2) DOs+mCCs组MⅡ卵母细胞GSH含量和孤雌激活囊胚率[(2.48±0.24) pmol/oocyte,(44.19±4.03)％]与DOs+bCCs组[(2.49±0.18)pmol/oocyte,(48.57±5.20)％]和DOs组[(2.40±0.17)pmol/oocyte,(43.47±7.34)％]之间没有差异,但分别显著低于COCs组[(9.67 ±0.18)pmol/oocyte,(59.93±6.13)％](P＜0.05),各组孤雌激活卵裂率之间没有显著差异[(98.85±4.32)％,(92.11±2.00)％,(95.40±4.11)％,(93.18±3.19)％](P＞0.05);(3)DOs+mCCs组、DOs+bCCs组和COCs组卵母细胞中BMP15和GDF9 mRNA相对表达水平均显著性高于DOs组(P＜0.05),其中,DOs+mCCs组和COCs组GDF9 mRNA相对表达水平显著高于DOs+bCCs组(P＜0.05).实验结果表明,mCCs能提高牛DOs的核成熟率及BMP15和GDF9 mRNA相对表达水平,但对牛DOs的细胞质成熟和MⅡ卵母细胞孤雌激活胚胎囊胚发育没有促进作用,说明卵丘细胞通过一些旁分泌因子促进卵母细胞核成熟,且这些因子的作用可能没有种属特异性.  相似文献   

OPU卵母细胞体外成熟体系的优化研究进展     

张培培  郝海生  杜卫华  朱化彬  李树静  余文莉  赵学明 《畜牧兽医学报》2023,(4):1359-1369

近年来，体外胚胎生产(in vitro embryo production, IVP)技术取得了很大进步，尤其是卵母细胞活体采卵(ovum pick-up, OPU)技术得到广泛应用。OPU是20世纪90年代发展起来的一项新型的能获得优秀种母牛卵母细胞的技术，该技术在动物胚胎生产和发育机理研究及人类辅助生育技术临床实践中有着广阔的应用前景。可以提高种母畜和珍贵野生动物的资源保护效率，提高优良母畜的遗传潜力，为奶牛生物技术发展提供必要的支撑技术。卵母细胞的质量是IVP系统取得成功的关键，卵母细胞的体外成熟(in vitro maturation, IVM)是成功受精和胚胎发育必不可少的步骤。卵母细胞IVM完成了卵母细胞的细胞质和核成熟，准备了发育至胚胎基因组激活所必需的所有必要成分。但体外成熟的卵母细胞发育能力低于体内成熟卵母细胞，卵母细胞减数分裂和细胞核质成熟不同步，氧化应激损伤等对卵母细胞成功受精和胚胎发育非常重要，因此，需要进一步提高卵母细胞体外成熟能力，以改善牛体外胚胎生产系统。本文从卵母细胞体外成熟面临的核质成熟不同步，氧化应激等问题进行概述，同时，叙述C型钠肽、褪黑素、FLI...  相似文献