野生型非洲猪瘟病毒多重数字PCR方法的建立     

李松达  蒋亚君  庞忠宝  黄颖  翟文竹  朱鸿飞  赵晓民  贾红 《动物医学进展》2024,(4):32-39

为建立一种鉴别诊断野生株和基因缺失株非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)的方法,针对ASFV的B646L、EP402R、DP96R基因保守序列设计3套引物和探针,优化三重荧光定量PCR体系作为基础建立微滴式数字PCR(droplet digital PCR,dd PCR)检测方法,并对方法的特异性、灵敏性及重复性进行评估。结果显示,优化后的多重荧光定量PCR检测方法的标准曲线线性关系良好,对PRRSV、PEDV、PRV、VSV、PCV、RNase-free水、重组质粒标准品进行特异性检测,特异性良好;重复性试验结果显示,变异系数均小于2%;对3种重组质粒的最低检测下限均为10² copies/μL。参照上述多重荧光定量PCR方法优化后的条件,进行多重ddPCR检测方法的建立,并且对该方法进行评价。结果显示,ddPCR检测方法标准曲线的线性关系良好;特异性及重复性良好;最低检测下限B646L为11.6 copies/μL、EP402R为13.3 copies/μL、DP96R为16.9 copies/μL;ddPCR的检测灵...  相似文献   

不同整枝方式对番茄根系及产量的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

杨圆圆  蒋丽媛  赵伟  唐磊  赵晓民  杨兆森 《现代园艺》2019,(11):3-4

通过田间试验,对比双头和单头不同整枝方式对日光温室番茄与樱桃番茄植株生长和产量的影响。结果表明:双头整枝与单头整枝相比,番茄增产20.3%,樱桃番茄增产32.0%;番茄单果重提高2.8%,樱桃番茄单果重之间无显著差异。双头整枝较单头整枝番茄植株鲜重与根重分别提高48.8%、15.8%;樱桃番茄植株鲜重与根重分别提高59.2%、31.2%,双头整枝根系须根及繁茂程度明显大于单头整枝。可见双头整枝可显著提高番茄产量和根系生物量。  相似文献   

75％猛杀生干悬浮剂对苹果轮纹病的药效试验     

刘艾英  雷新乐  赵晓民  张焕玲  郝静  冀晓燕 《陕西农业科学》2004,(4):29-30

试验结果表明 ,供试药剂 60 0倍、80 0倍、1 0 0 0倍和 1 2 0 0倍均对苹果轮纹病具有很好的防治效果。苹果采收期防效分别可达 91 .5 1 %、88.3 2 %、85 .89%和 82 .0 5 % ;苹果贮藏 3 0 d后 ,防效分别可达91 .48%、89.2 9%、87.0 9%和 84.62 % ;与对照药剂 80 %大生 WP80 0倍相当 ,优于 70 %代森锰锌WP60 0倍。  相似文献   

GHSR—1a在奶山羊胃肠道的分布与表达     

于高水  张文龙  黄勇  赵晓民  李伟  童德文 《兽医大学学报》2014,(1):105-109,115

试验采用免疫组织化学、Real—timePCR和Western blotting方法测定ghrelin的功能性受体GHSR-1a（Growth hormone seeretagogue receptor-1a,GHSR-1a）在奶山羊胃肠道的分布和表达。免疫组织化学结果显示,GHSR—1a免疫阳性细胞广泛分布于奶山羊胃肠道。在皱胃主要定位于黏膜层和肌层;瘤胃、网胃和瓣胃黏膜层及肌层中也可见GHSR-1a免疫阳性细胞;在小肠主要位于十二指肠、空肠和回肠的黏膜层、黏膜下层和肌层;在结肠、盲肠和直肠GHSR—1a免疫阳性细胞也有广泛分布;GHSR—1a主要表达于内在神经丛神经细胞、胃底腺上皮细胞、肠腺上皮细胞、复层鳞状上皮细胞、平滑肌细胞中。real—timePCR和Westernblotting结果显示,皱胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和直肠GHSR—1a的表达水平相对较高,显著高于瘤胃、网胃和瓣胃的表达（P〈0．05）。结果表明,ghrelin可能通过GHsR-1a对奶山羊胃肠功能具有重要的调节作用。  相似文献   

胸腺肽β4基因的克隆、表达及活性检测   总被引：1，自引：0，他引：1  

赵晓民  张晓光  吴淑华 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2008,36(9):17-21

【目的】在大肠杆菌中克隆和表达胸腺肽β4(thymosinβ4,Tβ4)基因,并进行分离纯化及免疫活性测定。【方法】将基因序列拆分成10个互补的小片段,互为模板,采用PCR两步法扩增得到Tβ4基因。将Tβ4基因片段克隆至pTXB1载体的NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点之间,将重组质粒转化至E.coliBL21 codon plus,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达、几丁质(Chitin beads)亲和层析柱纯化Tβ4。然后用MTT法测定Tβ4的免疫活性。【结果】经测序表明获得了序列正确的人胸腺肽β4基因,构建重组质粒pTXB1-Tβ4,经SDS-PAGE电泳分析表明,重组质粒pTXB1-Tβ4在E.coliBL21 codon plus中高效表达,表达量为30%。将表达产物用几丁质亲和层析柱纯化,获得较纯的Tβ4。MTT检测表明,Tβ4有促进淋巴细胞增殖的活性,最适刺激质量浓度为1.6μg/mL。【结论】获得高效表达的、高纯度的、有生物活性的重组Tβ4,它可促进淋巴细胞的分化、增殖,具有免疫活性,最适刺激质量浓度为1.6μg/mL。  相似文献   

非洲猪瘟病毒D250R蛋白生物信息学分析及多克隆抗体制备     

许春梅  邵明珠  王心悦  林佳迪  郭建雄  张祥胤  童德文  梁瑞英  赵晓民 《中国畜牧兽医》2022,49(12):4745-4755

【目的】分析非洲猪瘟病毒（Africa swine fever virus,ASFV） D250R蛋白潜在的生物学功能,制备其多克隆抗体,为ASFV D250R蛋白功能研究及相关诊断试剂的研发提供材料。【方法】应用生物信息学软件分析D250R蛋白的理化性质、信号肽、跨膜结构、磷酸化位点、生物功能及蛋白结构等。通过大肠杆菌表达系统表达重组D250R蛋白,采用镍亲和层析柱和分子筛纯化重组D250R蛋白,Western blotting检测纯化蛋白的反应原性,将纯化的D250R蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,用间接ELISA方法测定多克隆抗体效价,用间接免疫荧光试验（IFA）检测多克隆抗体特异性。【结果】生物信息学分析结果显示,D250R蛋白共由250个氨基酸组成,理论分子质量为29 822.54 u,理论等电点为8.96,为亲水性蛋白,无信号肽及跨膜区。修饰位点预测结果显示,D250R蛋白可能存在15个磷酸化修饰位点,其中丝氨酸（Ser）6个、酪氨酸（Tyr）6个、苏氨酸（Thr）3个;2个N-糖基化修饰位点,分别位于第61和197位氨基酸处。生物学功能预测结果显示,D250R蛋白含有Nudix序列,具有解水解酶活性。蛋白结构预测结果显示,D250R蛋白二级结构中α-螺旋、β-转角、延伸链、无规则卷曲占比分别为49.20%、7.60%、15.20%和28.00%,三维空间结构存在较多α-螺旋,与二级结构预测结果基本一致。将ASFV D250R基因克隆至pET-32a （＋）获得pET-32a-D250R重组质粒,转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,在16℃、1 mmol/L IPTG诱导下,D250R蛋白以可溶性和包涵体2种形式表达,蛋白大小约44 ku,蛋白上清经镍亲和层析柱和分子筛层析纯化得到纯度较高的蛋白;Western blotting检测结果显示,重组蛋白具有良好的反应原性;间接ELISA检测结果显示,D250R蛋白抗体效价达到1：256 000,成功制备多克隆抗体;IFA检测结果表明该多克隆抗体具有良好的特异性。【结论】本研究在分子层面分析了D250R蛋白的理化性质及蛋白结构,在大肠杆菌表达系统中实现了ASFV D250R蛋白的高效表达,纯化的D250R蛋白免疫小鼠制备的多克隆抗体具有较高的特异性,为深入探讨ASFV D250R蛋白的生物学功能及ASFV相关诊断试剂的研发奠定了基础。  相似文献   

牦牛源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及基因组功能分析     

王俊书  徐进强  封家旺  顾庆云  赵晓民  金红岩 《动物医学进展》2022,43(6):27-31

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