盐酸克伦特罗单抗快速检测试剂盒的研制   总被引：16，自引：0，他引：16  

王选年  杨艳艳  邢广旭  李青梅  杨继飞  柴书军  赵东  康晓笛  潘耀谦  张改平 《中国兽医学报》2004,24(1):75-78

以竞争性酶免疫分析原理为基础 ,应用特异性克伦特罗 (Clenbuterol,CL )单克隆抗体研制成功了β-肾上腺素受体激动剂克伦特罗的快速检测 EL ISA试剂盒 (CL- Kit)。 CL- Kit线性检测范围为 0 .5～ 12 8μg/ L,各标准品的吸光值变异系数为 2 .3%～ 3.6 %。标准曲线呈典型的 S型 ,相关系数 R2 =0 .996 ,符合 4参数 L ogit曲线拟合。检测结果表明 :CL 单抗对 CL 的半数抑制量 IC50 为 7.94 μg/ L,对沙丁胺醇 (Sb)的 IC50 为 10 0 0 μg/ L,肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素和来克多巴胺的 IC50 均≥ 6 4 0 0 μg/ L;CL- Kit与 Sb的交叉反应性为 0 .79% ,与异丙肾上腺素的交叉反应性为 0 .12 % ,与肾上腺素、去甲肾上腺素、来克多巴胺、各类抗生素及多种维生素均无交叉反应性。试剂盒测定回收率在 91%～ 10 5 % ,批内变异系数小于 2 0 % ,批间变异系数小于 10 %。试剂盒在保存期内稳定  相似文献   

鸡Igλ轻链绿色荧光蛋白融合分子在COS7细胞膜的表达     

张红  宋海涛  张改平  邢广旭  赵东  杨继飞  柴书军  郝青梅 《河南农业科学》2006,(11):102-104

将牛IgG Fc受体γRⅡ的跨膜区序列嵌合入鸡Igλ轻链基因中,并将鸡Igλ轻链信号肽与Pegfp-C1载体的绿色荧光蛋白N端融合产生带有信号肽的中间载体Pegfp-C1-SP。鸡Igλ轻链基因嵌合分子定向克隆入载体的多克隆位点,构建了带有信号肽的鸡Igλ轻链/GFP融合蛋白真核表达载体。转染COS7细胞后,荧光显微镜观察,重组鸡Igλ轻链/GFP蛋白在COS7细胞膜及膜周围有明显表达,而载体pEGFP-C1转染的COS7细胞GFP则分布在细胞及细胞核。结果表明,牛IgG Fc受体γRⅡ的跨膜区能介导融合蛋白在细胞膜上的表达。  相似文献   

猴源葡萄糖调节蛋白78生物信息学分析及其真核表达     

焦文强  刘运超  邢广旭  陈鹏举  徐引弟  王治方  张青娴  许峰 《中国畜牧兽医》2021,48(4):1170-1178

试验旨在探究葡萄糖调节蛋白78（glucose regulatory protein 78,GRP78）基因的理化性质和结构特点,阐述GRP78在猪流行性腹泻病毒复制中的分子伴侣作用和调控机制。通过RT-PCR方法扩增GRP78基因,并插入到pMD20-T Simple载体进行克隆测序,利用生物信息学方法对其氨基酸序列、跨膜结构、糖基化位点、磷酸化位点、三级结构等进行预测和分析。将GRP78基因插入pCDNA 3.1中,然后转染Vero-E6细胞。Western blotting检测Vero-E6细胞中GRP78的表达。生物信息学分析结果表明,GRP78基因全长1 965 bp,编码654个氨基酸,蛋白质分子质量为72.33 ku,理论等电点为5.07,分子式为C₃₁₈₉H₅₁₅₃N₈₆₅O₁₀₁₉S₁₃。遗传进化树分析显示,猴源GRP78基因与双峰驼、犬、猫、大猩猩、蝙蝠、狒狒、猪、马的氨基酸序列同源性为99.5%~99.8%;遗传进化分析显示,大猩猩和狒狒亲缘关系最为接近。跨膜区和信号肽预测结果显示,该蛋白存在信号肽但不存在跨膜结构。GRP78蛋白无N-糖基化修饰位点,存在6个O-糖基化位点、28个磷酸化位点,表明GRP78可能有与激酶磷酸化有关的PKC、PKA特异性蛋白激酶的结合位点,可能参与己糖代谢和单糖代谢。  相似文献   

植酸酶鼠源多克隆抗血清的制备     

胡骁飞  魏凤仙  邢广旭  职爱民  柴书军  孙亚宁  王磊  邓瑞广  张改平 《中国农业科学》2011,44(3):613-619

 【目的】制备灵敏性高、特异性强的植酸酶多克隆抗体。【方法】将初步纯化的麸皮植酸酶蛋白经凝胶电泳鉴定纯度后,按50 μg蛋白/只?次免疫Balb/C小鼠,共免疫4次,每次间隔4周,最后一次免疫60 d后,摘眼球取血,制备抗血清。利用间接ELISA方法测定抗血清效价,间接竞争ELISA测定敏感性和特异性。【结果】凝胶电泳的麸皮植酸酶只有一个条带;血清植酸酶抗体效价达1×104;半数抑制浓度达148.87 ng?mL-1。此抗血清对市售的普通微生物植酸酶、市售包被微生物植酸酶及浓缩的微生物植酸酶的半数抑制浓度分别达到165.59 、163.80和166.51 ng?mL-1,交叉反应率分别为89.85%、90.88%和89.41%。100℃煮沸5 min后的麸皮、市售普通微生物植酸酶、市售包被微生物植酸酶及浓缩酶半数抑制浓度分别为2 871.34、5 208.85、7 914.12和5 804.24 ng?mL-1,交叉反应率分别为5.18%、2.86%、1.88%及2.56%。【结论】制备出了具有高效价、高灵敏度和特异性的鼠源植酸酶多克隆抗体,为植酸酶单克隆抗体制备及植酸酶ELISA检测试剂盒研制奠定了基础。  相似文献   

噬菌体展示技术在毒素检测分析中的应用     

胡骁飞  栗力  邢广旭  裴亚峰  职爱民  王耀  孙亚宁  王磊  赵丽娜  邓瑞广 《河南农业科学》2011,40(6):32-35

霉菌毒素严重危害动物及人类健康,毒素检测已成为评价农产品、食品、饲料品质的重要内容之一.毒素检测有一定危险性,建立新的毒素检测手段意义重大.噬菌体展示技术是一种设计精巧、具有极强分离多肽功能的生物学技术.综述了此项技术的发展和在筛选霉菌毒素模拟表位肽中的作用及模拟表位肽在毒素检测中的应用,并展望了该技术的应用前景.  相似文献   

猪口蹄疫O型合成肽疫苗抗原多肽的串联表达及活性鉴定     

卢清侠  郭军庆  郝慧芳  杨苏珍  邢广旭  杨继飞  王世红  张改平 《河南农业科学》2011,40(10):126-130

为获得含合成肽疫苗抗原多肽的重组表达蛋白,根据猪口蹄疫O型合成肽疫苗中抗原多肽的氨基酸序列,使用大肠杆菌偏好性密码子人工合成该抗原多肽的双拷贝基因序列,并克隆至表达载体pET32a中,构建原核表达质粒pET32a - P2.将重组质粒转化BL21 (DE3),经IPTG诱导表达,收集诱导的菌液进行SDS - PAGE电...  相似文献   

6×His—tag在抗菌肽表达纯化中的应用及其对抗菌肽活性的影响     

牛明福  李翔  邢广旭  张红梅  宫强 《河南农业科学》2008,(12)

为方便抗菌肽的体外表达和纯化,以蝎子防御素为对象,在其编码基因末端加入6×His—tag,在酵母表达系统中表达,获得有活性的防御素Sd和融合蛋白Sd—His。进一步纯化、体外抑菌活性及热酸稳定性等试验发现,6×His—tag不但没有降低防御素的抑菌活性,反而有稍微的增强趋势。结果表明,6×His—tag可用于抗菌肽的融合表达且不影响其活性,为抗菌肽的表达纯化提供了一个更简便有效的方法。  相似文献   

甲氧苄氨嘧啶人工抗原的合成及鉴定     

职爱民  刘庆堂  邢广旭  杨继飞  张改平 《河南农业科学》2010,(3)

用重氮化方法将甲氧苄氨嘧啶(TMP)偶联于载体蛋白BSA和OVA上,合成了免疫抗原BSA-TMP和包被抗原OVA-TMP,并用紫外扫描、SDS-PAGE和动物免疫试验进行了鉴定。结果表明,半抗原TMP和载体蛋白偶联成功。人工抗原BSA-TMP的成功合成,为TMP单克隆抗体制备及其快速检测试剂的研制奠定了基础。  相似文献   

猪流行性腹泻病毒S2基因的克隆与遗传进化分析     

焦文强  邢广旭  刘运超  徐引弟  王治方  王克领  李海利 《山东农业科学》2020,52(2):106-110

为了解猪流行性腹泻病毒(PEDV)新流行毒株的遗传变异情况,本研究对2014—2018年间采集的205份PEDV疑似阳性样品进行RT-PCR检测、扩增PEDV S2基因并进行遗传转化分析。RT-PCR结果显示,205份疑似阳性样品中有191份扩增出单一条带,片段大小为1 887 bp,符合S2基因的扩增预期。试验样品阳性检出率为93. 17%。测序分析表明,试验共获得25株S2基因序列,与参考毒株之间核苷酸的同源性为94. 3%～99. 6%,氨基酸的同源性为86. 4%～96. 2%。遗传进化分析结果显示,试验得到的PEDV毒株分属于G1、G2亚群。本研究为PEDV防控以及疫苗毒株筛选奠定基础。  相似文献   

IBD试纸对中等毒力疫苗毒及标准强毒的检测试验     

李学伍  张改平  肖治军  杨艳艳  邓瑞广  赵东  邢广旭  柴书军  杨继飞 《华北农学报》2002,17(4):113-117

应用IBD快速检测试纸和琼脂凝胶免疫扩散试验(AGIDT),对不同疫苗免疫鸡检测结果均为阴性,对人工感染强毒鸡最早检出IBDV的时间,试纸检测法为感染后36h,琼脂扩散检测法为感染后96h。试纸检出的最低含毒量为800ELD50,ELISA检出的最低含毒量为400ELD50,琼扩检出的最低含毒量为2 5×104ELD50,试纸检出的敏感性比琼扩提高32～64倍。IBD试纸检测简便、快速、敏感、特异,是诊断鸡法氏囊病的有效方法。  相似文献