环丙沙星完全抗原的制备和间接竞争ELISA检测方法的初步研究     

刘庆堂  张改平  柴书军  藤蔓  赵银丽 《黑龙江畜牧兽医》2011,(2):11-13

为了研究检测环丙沙星(CIP)残留的间接竞争ELISA方法,试验采用1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDC)一步法将环丙沙星分别与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)偶联制备免疫原(CIP-BSA)和包被原(CIP-OVA),用免疫原免疫Balb/c小鼠制备血清多克隆抗体(CIP pAb...  相似文献   

苯巴比妥多克隆抗体的制备及其免疫学特性鉴定     

王自良  王建华  张海棠  柴书军  张改平 《中国兽医杂志》2006,42(5):12-14

苯巴比妥（Phenobarbital, PB）具有神经、骨髓、致畸、致癌等毒性作用,其在动物性食品中的残留严重危害着人们的健康,我国和世界上多数国家禁止PB用于食品动物.免疫学分析方法用于PB残留检测以其灵敏、快速、特异、简便等优点替代了传统的理化检验方法,美国雅培公司和德国Dade Behring公司已开发出相关产品.合格的抗体是建立免疫学分析方法的基础,关于PB多克隆抗体（pAb）的制备国内尚未见报道.本研究旨在制备出高价、敏感、特异的PB pAb,为免疫学检测方法的建立奠定基础。  相似文献   

分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立     

杨艳艳  张改平  肖治军  杨继飞  柴书军  冯春花  王选年 《华北农学报》2006,21(5):60-63

采用单克隆抗体制备技术,建立了分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株,液氮保存4年后复苏,细胞在HAT选择培养基中生长旺盛,分泌抗体稳定,分别命名为YNF1,YNF2,YNF3,YNF4,杂交瘤细胞染色体数介于96~115条。细胞培养上清和腹水的单抗间接ELISA效价分别为1∶80~1∶160和1∶5 000~1∶10 000。在间接ELISA和夹心ELISA检测中单抗与猪瘟病毒呈特异性反应,与正常的猪、兔肾组织提取液及其血清Ig无交叉。抗体蛋白属IgG类,亚类及轻链分别为IgG1/λ,IgG2a/κ,IgG2a/λ,IgG1/λ。结果表明,4株杂交瘤是分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的细胞株,可长期传代无限分泌单抗,是进一步研究猪瘟病毒和开发敏感、特异、快速诊断猪瘟试剂盒和试纸探针的免疫学特异性试剂来源。  相似文献   

盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备及其特性   总被引：5，自引：0，他引：5  

王选年  杨艳艳  李青梅  邢广旭  李学伍  肖治军  邓瑞广  柴书军  杨继飞  赵东  康晓迪  张改平 《河南农业科学》2002,(6):30-33

以戊二醛法将盐酸克伦特罗 (Clenbuterol,CL)连接到牛血清白蛋白 (BSA)上制备抗原(BSA -CL) ,并以BSA -CL免疫Balb/c小鼠 ,应用杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与NS0细胞融合 ,建立分泌CL单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过对杂交瘤细胞培养上清的检测、鉴定 ,筛选出 1 7株高亲和力的杂交瘤细胞株 ,其中C - 4C9、C - 2D6、C - 4G1和C - 2H6的培养上清ELISA效价为 1∶5 1 2 ,1∶640 ,1∶81 0和 1∶2 5 6;腹水ELISA效价为 5× 1 0 - 6,1 .7× 1 0 - 5,2×1 0 - 6和 3.3× 1 0 - 5。 4株单抗与 β -肾上腺素激动剂沙丁胺醇的交叉反应性为 0 .79% ,与肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素及畜禽常用抗生素无交叉反应性。可以作为制备CL快速检测的特异性单克隆抗体应用  相似文献   

鸡Igγ轻链绿色荧光蛋白融合分子在COS7细胞膜的表达     

张红宋海涛  张改平邢广旭 赵东杨继飞  柴书军郝青梅 《河南农业科学》2006,(11):102-104,109

将牛IgG Fc受体γRⅡ的跨膜区序列嵌合入鸡Igγ轻链基因中，并将鸡Igγ轻链信号肽与Pegfp—C1载体的绿色荧光蛋白N端融合产生带有信号肽的中间载体Pegfp—C1-SP。鸡Igγ轻链基因嵌合分子定向克隆入载体的多克隆位点，构建了带有信号肽的鸡Igγ轻链／GFP融合蛋白真核表达载体。转染COS7细胞后，荧光显微镜观察，重组鸡Igγ轻链／GFP蛋白在COS7细胞膜及膜周围有明显表达，而载体pEGFP—C1转染的COS7细胞GFP则分布在细胞及细胞核。结果表明，牛IgG Fc受体γRⅡ的跨膜区能介导融合蛋白在细胞膜上的表达。  相似文献   

磺胺间甲氧嘧啶全抗原的制备研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

张改平  职爱民  瞿明仁  王自良  王选年  李青梅  邢广旭  杨继飞  柴书军  刘庆堂  石团员  宋志超 《河南农业科学》2006,(3):96-100

采用重氮化法，将半抗原磺胺间甲氧嘧啶（SMM）与载体牛血清白蛋白（BSA）和卵清白蛋白（OVA）偶联，制得磺胺间甲氧嘧啶全抗原SMM—BSA和SMM—OVA。通过其紫外扫描光谱、SDS—PAGE凝胶电泳试验，表明半抗原和载体成功偶联，免疫动物以后可以产生满意效价。这另进一步制备抗SMM抗体提供了良好的免疫原。  相似文献   

二氟沙星残留检测直接竞争ELISA试剂盒的研制及其性能测定   总被引：1，自引：0，他引：1  

李彬彬  邓瑞广  侯玉泽  张改平  赵东  刘庆堂  柴书军  王自良 《农业生物技术学报》2009,17(3):403-408

应用抗二氟沙星单克隆抗体（DIFmAb）杂交瘤细胞株建立直接竞争ELISA分析方法,研制出DIF残留快速检测试剂盒（DIF-Kit）并对其性能进行了测定。特异性试验结果表明与达氟沙星的交叉反应率为0.32％,与其它氟喹诺酮类药物和磺胺类药物无交叉反应,该方法对DIF的检测限可达到0.1µg/L,半数抑制浓度IC50为2.2µg/L,线性范围0.1～128µg/L, 平均批内和批间变异系数小于<15%。对牛奶、鸡肉分别添加0.4、2.0、10.0、50.0µg/LDIF标准品,平均回收率分别为89.3%和83.9%。DIF-Kit性能稳定,在4℃可保存6个月。DIF-Kit准确度高、重复性好、特异性强,适用于DIF残留快速检测的推广应用。  相似文献   

兔抗猪瘟高免血清的制备及纯度鉴定   总被引：1，自引：1，他引：0  

李娅丽  周洁  李敬玺  李乔木  王丽  柴书军  王选年 《河南农业科学》2009,(5)

利用猪瘟弱毒疫苗(C株)免疫新西兰大白兔,制备抗猪瘟高免血清IgG。运用间接ELISA方法测血清效价,再经饱和硫酸铵盐析沉淀法提纯血清IgG,SDS-PAGE电泳法鉴定提纯IgG的纯度,结合无菌检查试验和仔猪接种试验,检测血清IgG的安全性。结果表明,获得了蛋白含量为6 mg/mL,效价为1∶6400的高效价、安全性高、成本低的抗猪瘟高免血清IgG。为猪瘟病毒的检测和猪瘟的防制提供了理想的生物制剂。  相似文献   

基于免疫层析试纸的猪O型FMDV抗体水平监测     

卢清侠  杨继飞  金前跃  杨苏珍  柴书军  万博  郝慧芳  张改平 《河南农业大学学报》2011,45(5)

为了应用免疫层析试纸评价猪口蹄疫O型合成肽疫苗的免疫效果,对50头试验仔猪进行免疫注射,并在首次免疫后28 d及2次免疫后20 d采血,通过试纸定量测定结果来监测试验猪抗体水平变化,同时对比猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒的检测结果.结果表明,猪口蹄疫O型合成肽疫苗能快速诱导产生高水平的抗体,首次免疫抗体阳性率达88%,2次免疫抗体阳性率高达100%.试纸定量测定结果表明,2次免疫后猪群免疫抗体水平整体显著提升,并保持在较高水平.与ELISA试剂盒比较二者具有相同的敏感性和特异性,符合率为100%.  相似文献   

以合成肽为抗原建立口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测ELISA试剂盒   总被引：3，自引：0，他引：3  

杨继飞  杨苏珍  杨艳艳  职爱民  赵东  郅玉宝  邢广旭  邓瑞广  柴书军  张改平 《中国农业科学》2010,43(6)

【目的】建立合成多肽抗原检测FMD NSP抗体的ELISA方法。【方法】固相法合成特异性FMDV NSP B细胞表位肽,将其偶联在BSA载体蛋白上,作为抗原包被在ELISA板上,制备检测抗FMDV NSP抗体的ELISA试剂盒,并对该试剂盒进行方法考核。【结果】抗原包被浓度选择2.5μg·mL-1;检测199份血清标本,与美国UBI商品试剂盒符合率达到96.48%,与国产3ABC ELISA比较,符合率为97.48%,显示极好的一致性。【结论】该合成肽ELISA试剂盒可以用以检测NSP抗体,从而鉴别FMD的自然感染与疫苗免疫,试剂盒特异性强,重复性好、稳定性高,操作简便。  相似文献